SOP-10029-00薄层色谱法操作规程

******有限公司 薄层色谱法操作规程 SOP-10029-00 起草人： 日期： 批准人： 日期： 拷贝号： 变更记载： 修订号 01 02 审 核 人： 日期： 执行日期： 颁发部门：质量部 制定（变更）原因及目的：新建 批准日期 执行日期 质 量 部 [ ]份 生 产 部 [ ]份 财 务 部 [ ]份 行政人力资源部 [ ]份 销 售 部 [ ]份 分发部门 物 料 部 [ ]份 薄层色谱法操作规程

1. 目的：建立薄层色谱法检验的标准操作程序，确保薄层色谱法检验结果的准确性。 2. 适用范围：适用于本公司实验样品的薄层色谱检验。 3. 职责

检验员：严格按检验操作规程进行检验。 QC主管：监督检查执行情况。 4. 定义

薄层色谱法系将供试品溶液点样于薄层板上，经展开、检视后所得的色谱图， 与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用于药品的鉴别或杂质检查的方法。 5. 仪器与材料 5.1.

玻板：除另有规定外，用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm、20cm×20cm、5cm×20cm

的规格，要求光滑、平整、洗净后不附水珠，晾干。 5.2.

吸附剂或载体：最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H和硅胶HF254，其次有硅

藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。其颗粒大小，一般要求粒径为 5～40μm。薄层涂布，除另有规定外，一般可分无黏合剂和含黏合剂两种；前者系将吸附剂或载体用水适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上，后者系在吸附剂或载体中加入一定量的黏合剂，一般常用羧甲基纤维素钠水溶液(0.2%～0.5%)适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。 5.3.

涂布器： 应能使吸附剂或载体在玻璃板上手工或自动涂成一层符合厚度要求的均匀

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薄层。 5.4. 5.5.

点样器：微量进样器(平头)、微升毛细管，应能使点样位置正确、集中。

展开容器：使用适合薄层板大小的平底或双槽薄层色谱专用展开缸，并配有严密的盖

子。水平展开时使用专用水平展开缸。。 5.6. 氨

水、浓硫酸等）的蒸气中熏蒸显色，用以检出斑点。 5.7.

显色装置：喷雾显色可使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均显色剂：见各品种项下的规定。可采用喷雾显色、浸渍显色或置适宜试剂（如碘、浓

匀细雾状喷出；浸渍显色可用专用玻璃器皿或用适宜的玻璃缸代替；蒸气熏蒸显色可用双槽玻璃缸或适宜大小的干燥器代替。 5.8.

检视装置： 为装有可见光、短波紫外光（254nm）、长波紫外光（365nm），光源及相

应滤片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄色谱图用，暗箱内光源应有足够的光照度。 6. 试药与试液

0.2～0.5%羧甲基纤维素钠溶液：称取2—5g羧甲基纤维素钠，加1升水煮沸溶解,过滤,静置，用时取上清液。 7. 操作方法 7.1.

薄层板的制备

7.1.1. 自制薄层板

自制薄层板一般可分为无黏合剂和含黏合剂两种。

7.1.1.1. 无黏合剂薄层板系将固定相直接涂布于玻璃板上，除另有规定外，将1份固定相和3份水，在研钵中沿同一方向研磨混合，去除表面的气泡后，置玻璃板上使涂布均匀，或倒 入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2?0.3mm)，取涂好的薄层板，置水平台上于室温下晾干后，在110℃活化30min,即置有干燥剂的干燥器中备用。

7.1.1.2. 含黏合剂薄层板，除另有规定外，系将固定相中加人一定量的黏合剂，一般常用 10%?15%煅石膏(CaS04?2H20在140℃加热4h),混匀后加水适量，或用0.2%?0.5%羧甲基纤维素钠水溶液(取羧甲基纤维素钠适量,加入一定的水后，放置使溶胀，加热煮沸至完全溶解，放置，取上清液，即得）适量，在研钵中沿同一方向研磨混合调成糊状，去除表面的气泡后，同7.1.1.1，均匀涂布于玻璃板上。晾干，活化后，备用。

薄层板使用前应检査其均匀度（可通过透射光和反射光检视），表面应均匀、平整、光滑，无麻点、无气泡、无破损、无污染。

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7.1.2. 市售薄层板 临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不需要活化。铝基片薄层板或聚酰胺薄膜均可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的涂层不得有破损。如在存放期间被空气中杂质污染，使用前可用适宜的溶剂在展开容器中上行展开预洗，110℃活化后，置干燥器中备用。 7.2.

点样

除另有规定外，在洁净干燥的环境下，用专用毛细管或配合相应的半自动、自动点样器点样于薄层板上，一般为圆点状或窄细的条带状，点样基线距底边2cm（高效薄层板一般基线离底边0.8～1.0cm），样点直径为2～4mm（高效薄层板为1～2mm），接触点样时注意勿损伤薄层表面。条带状宽度一般为5～10mm，高效薄层板条带宽度一般为4～8mm，可用专用半自动或自动点样器械喷雾法点样。点间距可视斑点扩散情况以相邻斑点互不干扰为宜，一般为1.0～2.0cm（高效板供试品间隔不小于5mm）。 7.3.

展开

7.3.1. 展开缸预先用展开剂饱和可避免边缘效应，如需预饱和，可在缸中加入足够量的展开剂，必要时在壁上贴两条与缸一样高的宽滤纸条，一端浸入展开剂中，密封顶盖，一般保持15?30min，使系统平衡或按各品种项下的规定操作。

7.3.2. 将点好供试品的薄层板放入展开缸中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边 0.5～1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封顶盖，待展开至适宜的展距（如20cm 的薄层板，展距一般为 10～15cm，高效薄层板展距一般为5cm左右），取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。

7.3.3. 展开可以单向展开，即向一个方向进行；也可以进行双向展开，即先向一个方向展开，取出，待展开剂完全挥发后，将薄层板转动90°，再用原展开剂或另一种展开剂进行展开；亦可多次展开。 7.4.

显色与检视

荧光薄层板可用荧光猝灭法；普通薄层板，有色物质可在日光下直接检视；无色物质可用物理或化学方法检视。物理方法是检出斑点的荧光颜色及强度；化学方法一般用化学试剂显色后，立即覆盖同样大小的玻璃板，检视。 7.5.

记录 薄层色谱图像一般可采用摄像设备的拍摄，以光学照片或电子图象的形式保

存。也可用薄层扫描仪记录相应的色谱图。 8. 系统适用性试验

按各品种项下要求对检测方法进行系统适用性试验，检测灵敏度、比移值（Rf）和分离效

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能应符合规定。 8.1.

检测灵敏度 系指杂质检查时，供试品溶液中被测物质能被检出的最低量。一般采用

对照溶液稀释若干倍的溶液与供试品溶液和对照溶液在规定的色谱条件下，在同一块薄层板上点样、展开、检视，前者应显示清晰的斑点。 8.2.

比移值（Rf） 系指从基线至展开斑点中心的距离与从基线至展开剂前沿的距离的

比值。（Rf）的计算公式为：

Rf =

从基线至展开斑点中心的距离

从基线至展开剂前沿的距离 鉴别时，可用供试品溶液主斑点与对照品溶液主斑点的比移值进行比较，或用比移值来说明主斑点或杂质斑点的位置。

除另有规定外，比移值（Rf）应为0.2～0.8之间。 8.3.

分离效能 鉴别时，将对照品与结构相似的药物对照品制成混合对照溶液，按规定

方法展开后，应显示两个清晰分离的斑点。杂质检查时,考察分离效能:可将杂质对照品用供 试品自身稀释对照溶液溶解制成混合对照溶液；也可将杂质对照品用待测组分的对照品溶液 溶解制成混合对照溶液；或者采用供试品以适当的降解方法获得的溶液。上述溶液点样展开 后的色谱图中，应显示清晰分离的斑点。 9. 测定法 9.1.

鉴别 可采用与同浓度的对照品溶液，在同一块薄层板上点样、展开与检视，供试

品溶液所显主斑点的颜色（或荧光）与位置（Rf）应与对照品溶液的主斑点一致，而且主斑点的大小与颜色的深浅也应大致相同。或采用供试品溶液与对照品溶液等体积混合，应显示单一、紧密的斑点；或选用与供试品化学结构相似的药物对照品与供试品溶液的主斑点比较，两者Rf 值应不同；或将上述两种溶液等体积混合，应显示两个清晰分离的斑点。 9.2.

杂质检查 可采用杂质对照品法、供试品溶液的自身稀释对照法或杂质对照品法与供

试品溶液自身稀释对照法并用。供试品溶液除主斑点外的其他斑点应与相应的杂质对照品溶液或系列浓度杂质对照品溶液的主斑点比较，或与供试品溶液的自身稀释对照溶液或系列浓度自身稀释对照溶液的主斑点比较，不得更深。

通常应规定杂质的斑点数和单一杂质量，当采用系列自身稀释对照溶液时，也可规定估计的杂质总量。 10. 注意事项

10.1. 薄层板的活化与保存 自制薄层板和市售薄层板在使用前均应进行活化，活化后的

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薄层板应立即置于有干燥剂的干燥器中保存，保存时间不宜过长，最好随用随制，放入干燥箱中保存仅作为使用前的一种过渡。

10.2. 供试液的制备 溶剂选择是否适当影响点样原点及分离后斑点的形状，一般应选择极性小的溶剂；只有在供试品极性较大，薄层板的活性较大时，才选择极性大的溶剂。除特殊情况外，试液的浓度要适宜，最好控制在使点样量不超过10μl（高效薄层板点样量不超过5μl)。

10.3. 点样 薄层板上样品容积的负荷量极为有限，普通薄层板的点样量最好在10μl以下，高效薄层板在5μl以下。点样量过多可造成原点“超载”，展开剂产生绕行现象，使斑点拖尾。点样速度要快，在空气中点样以不超过10分钟为宜，以减少薄层板和大气的平衡时间。点样时必须注意勿损坏薄层表面。待溶剂挥散后方可展开。

10.4. 点样环境 实验环境的相对湿度和温度对薄层分离效果有着较大的影响（实验室一般要求相对湿度在65%以下为宜），因此应保持试验环境的相对恒定。对温、湿度敏感的品种必须按品种项下的规定，严格控制实验环境的温、湿度。 11. 编制依据

《中国药典》2010年版二部

《中国药品检验标准操作规程》2010年版

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