清开通灌肠液对内毒素性发热兔的退热效应及对血管活性肠肽、白介素-2的影响_刘亚娟

收稿日期：2012－05－29

基金项目：山东省中医药科技发展计划资助项目（2005－124）作者简介：刘亚娟（1979－），女，山东招远人，讲师，硕士，研究方

向：中医临床基础学科的教学及科研。

通讯作者：张思超（1963－），男，山东郓城人，教授，博士，研究方

向：温病教学科研与临床研究。E-mail ：zhangsichao @163．com 。

脏MDA 水平较正常组水平明显升高，健肝颗粒可明显降

低这两种因子水平，以低剂量组最明显，提示其有良好的抗氧化作用。健肝颗粒可能是通过抗氧化作用，抑制LPO 产生是其抗肝纤维化的机制之一。继续从传统天然药物中筛选高效抗肝纤维化单体或复方，仍将是该领域的研究热点

方向之一，

由于复方中药抗肝纤维化的机制具有多靶点、多层次、多途径的特点，故该复方中药抗肝纤维化的机制有待

更进一步深入研究。参考文献

［1］黄古叶．健肝散治疗慢性乙型肝炎肝纤维化35例［J ］．中国中西医结合消化杂志，

2005，13（1）：53－55．［2］黄古叶，胡振斌，毛德文，等．健肝散抗慢性乙型肝炎肝纤维

化的作用及其机制研究［J ］．现代中医药，2007，27（6）：11－13．

［3］黄古叶，龙富立，胡振斌，等．健肝散联合恩替卡韦片对乙型

肝炎早期肝硬化血清纤维化指标的影响［J ］．新中医，2009，41（11）：30－31．

［4］Naito M ，Hasegawa G ，Ebe Y ，et al．Differentiation and func-tion of Kupffer cells ［J ］．Med Electron Microsc ，2004，37：16－28．

［5］Shimizu l ，Ma YR ，Mizobuchi Y ，et al．Effects of Sho －saiko －to ，

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［6］Guo J ，Friedman SL．Hepatic fibrogenesis ［J ］．Semin Liver Dis ，

2007，27：413－426．

［7］VENDEMIALE C ，CRATTAGLIANO L ，CARUSO ML．Increased

oxidative stess in dimethylnitrosamine －induced liver fibrosis in the rat ：effect of N －acetylcysteine and interferon －alpha ［J ］．Toxicol Appl Pharmacol．2001，175（2）：130－139．

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2012年10月中华中

医药学刊

CHINESE

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MEDICINE

Vol．30No．10Oct．2012

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清开通灌肠液对内毒素性发热兔的退热效应及

对血管活性肠肽、白介素－2的影响

刘亚娟，张思超，王晓君，孙敬昌

（山东中医药大学，山东济南250355）

摘

要：目的：观察基于“脑－肠轴”学说组方的清开通灌肠液，对内毒素性发热兔的退热效应及VIP 、

IL －2在发热中的变化。方法：日本大耳白家兔60只，随机分成4组：正常组、模型组、清开灵组和清开通组。模型组、

清开灵组及清开通组，各组经耳缘静脉注射无热源生理盐水稀释的内毒素，建立兔内毒素性发热模型。同时清开灵组、清开通组分别予以清开灵、清开通灌肠液灌肠。注射内毒素2h 后，清开灵组、清开通组再予灌肠1次。4h 后，各组动物随机抽取10只，采集脑、肠及外周血标本，用放射免疫法检测脑、肠及血浆中VIP 、

IL －2含量。持续观察每组另外5只动物体温变化情况，

每间隔10min 记录1次体温，连续测温12h 。结果：清开灵组和清开通组动物的体温与模型组相比都有明显降低（P ＜0．01），但清开通组降低比清开灵组更为显著（P ＜0．05）。脑肠及血浆

中VIP 和IL －2的含量都显著低于模型组（P ＜0．01），尤其清开通组较清开灵组降低幅度更大，二者有显著差异（P ＜0．05）。结论：“清开”与“通腑”合治，较单一清开法在退热及提高机体免疫方面效果更著，VIP 和IL －2在发热中起正调节作用。

关键词：清开通灌肠液；发热；VIP ；IL －2；兔中图分类号：R285．5文献标识码：A

文章编号：1673－7717（2012）10－2234－03

Study on the Antipyretic Effection of Qingkaitong Enema and

Its Influence on the Changes of Vasoactive Intestinal Peptide （VIP ）and

Interleukin －2（IL －2）in Endotoxin －induced Febrile Rabbits

LIU Ya-juan ，ZHANG Si-chao ，WANG Xiao-jun ，SUN Jing-chang

（Shandong University of Traditional Chinese Medicine ，Ji＇n an 250355，Shandong ，China ）

Abstract ：Objective ：To investigate the antipyretic effect of Qingkaitong enema according to the theory of brain －gut axis in endotoxin －induced febrile rabbits ，

and observe changes of vasoactive intestinal peptide （VIP ）and interleukin －2（IL －2）in different tissues．Methods ：Sixty Japanese White Rabbits were randomly divided into following four groups ：nor-mal control group ，model group ，Qingkailing enema group and Qingkaitong enema group．The Escherichia coli endotoxins 4322

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药

学

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were injected into marginal ear veins of the rabbits of model group，Qingkailing enema group and Qingkaitong enema group to induce the rabbit febrile model．Qingkailing enema group and Qingkaitong enema group were immediately treated with Qingkailing enema and Qingkaitong enema respectively after the Escherichia coli endotoxins were injected．Qingkailing enema group and Qingkaitong enema group were once again treated with Qingkailing enema and Qingkaitong enema re-spectively after two hours．The brain，intestine and peripheral blood samples were obtained from ten rabbits which were selected randomly in every group．The levels of vasoactive intestinal peptide（VIP）and interleukin－2（IL－2）were detec-ted by radioimmunoassay．The body temperatures of the remaining five rabbits in every group were taken every ten mi-nutes for12hours．Results：The rabbits temperatures of Qingkailing enema group and Qingkaitong enema group were obvi-ously lower than that of the model group（P＜0．01）．Qingkaitong enema group had lower temperature significantly（P＜0．05），compared with Qingkailing group．The levels of vasoactive intestinal peptide（VIP）and interleukin－2（IL－2）in different tissues of Qingkailing enema group and Qingkaitong enema group were decreased evidently，compared with the model group（P＜0．01）．Qingkaitong group had lower levels of vasoactive intestinal peptide（VIP）and interleukin－2（IL －2）than Qingkailing group did（P＜0．05）．Conclusion：The effects of Qingkai and Tongfu were better than Qingkai alone in pyretolysis and immunoregulation．Vasoactive intestinal peptide（VIP）and interleukin－2（IL－2）maybe play a positive accommodation role in fever．

Key words：Qingkaitong enema；fever；vasoactive intestinal peptide（VIP）；interleukin－2（IL－2）；rabbit

基于“脑－肠轴”学说，采取“清开治脑之法”、“通腑治肠之法”合用的自制清开通灌肠液，探讨其对内毒素性发热的退热效应及脑肠肽和机体免疫调节在其发热中的作用及意义。

1材料与方法

1．1药物清开通灌肠液组成：莲子心15g，水牛角20g，冰片3g，菖蒲15g，郁金10g，黄连6g，黄芩10g，栀子10g，大黄10g（购自山东中医药大学中鲁医院）。清开通灌肠液制备：取水牛角打碎，加水400 500mL，浸泡30min，再先煎30min，而后加入其他药物（莲子心、郁金、黄连、黄芩、栀子，煎前用水浸泡20 30min）将水加至适量，继续煎煮。待上述药物煎沸后15 20min，再纳入大黄、菖蒲用文火煎沸5 10min即可。头煎完毕，滤出药液，药渣再加入3倍量的水重新以上煎煮过程。合并两次煎液，过滤，在60?水温上浓缩至含生药0．96g/mL，然后再将冰片研粉冲入，最后制成约含生药1g/mL的煎液。冰箱保存备用。清开灵灌肠液的制备：清开灵颗粒（广州明兴制药厂生产，批号：Z10950088，为中药复方制剂，每包3g，临床用量3 6g/次，2 3次/天，冲服）。实验时用蒸馏水配成浓度0．18g/mL。1．2试剂血管活性肠肽（VIP）试剂盒：购自中国人民解放军第二军医大学神经生物学教研室。白介素－2（IL－2）试剂盒：购自北京解放军总医院放免研究所。

1．3致热源大肠埃希菌内毒素（endotoxin，ET）：购自sigma公司。

2实验动物及方法

2．1动物分组日本大耳白家兔60只，体重2．2 3．0kg （购自山东大学实验动物中心），随机分成4组，每组15只：A组：正常组（耳缘静脉注射无热原生理盐水）；B组：模型组（耳缘静脉注射ET）；C组：清开灵组（耳缘静脉注射ET，同时予清开灵灌肠液灌肠）；D组：清开通组（耳缘静脉注射ET，同时予清开通灌肠液灌肠）。

2．2造模给药全部动物实验前1h测直肠温度3次，每隔15min测1次，取平均值作为动物基础体温。试验兔分别固定，模型组、清开灵组、清开通组各组耳缘静脉注射无热源生理盐水稀释的ET（浓度0．2μg/mL），剂量为200ng/ kg，并记录注射内毒素时间。攻毒同时，清开灵组、清开通

组分别予以清开灵、清开通灌肠液灌肠。给药剂量：4．0

mL/kg，药物浓度：1g/mL。攻毒2h后，清开灵组、清开通组

再予灌肠1次。攻毒4h后，各组动物随机抽取10只，按要

求取脑、肠组织及血浆标本，标本制备见文献［1］；上四组的

另外每组5只动物继续观察体温变化情况，每间隔10min

记录一次体温，连续测温12h，观察解热效应。

2．3观察指标注射内毒素后立即观察各组动物症状与

体征变化，连续观察48h；观察平均发热曲线，发热高峰值（AT），体温反应指数（TRI）；用放射免疫法检测脑、肠及血

浆中VIP、IL－2含量。

2．4统计方法应用SPSS13．0统计学软件，数字资料进

行多个样本均数间的两两比较之q检验。

3实验结果

3．1症状、体征变化模型组种菌后体温持续上升，2h左

右出现蜷卧、耸毛、纳呆、耳壳色白、呼吸加快、脉搏应指、舌

边尖红等典型卫分证表现。且个别家兔出现喘促、鼻煽、躁动、拒食、肺部湿罗音、舌红、苔黄、脉搏应指有力等症状。

清开通、清开灵治疗组在分别灌肠用药后约3h出现轻微的

蜷卧、耸毛表现，用药12h后基本消失，两组无显著差别。

而模型组动物于24h后症状体征基本消失。

3．2平均发热曲线见图1。

造模组家兔感染内毒素后，一般6 8min左右体温开

始升高，于2h左右达到高峰，其中最低升高2．1?，最高可

达2．6?。清开灵和清开通治疗组体温升高明显低于造模组，且发热潜伏期延长、热程缩短。

3．3发热高峰及体温反应指数见表1。

从图1，表1可见，模型组、清开灵组及清开通组动物

在攻毒后体温皆有上升，模型组高达2．36?，清开灵组1．

74?，清开通组1．46?，模型组最高，清开灵组次之，清开

通组最低，正常组无上升，清开灵组和清开通组动物的体温

与模型组相比都有明显降低（P＜0．01），而且清开通组降

低比清开灵组更为显著。说明清开通灌肠液和清开灵对内

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毒素所致的家兔发热皆有退热作用，而清开通灌肠液较清开灵为强，且二者之间有显著差异（P ＜0．05）。

图1各组体温变化曲线比较

表1

12h 兔发热高峰值及体温反应指数比较（珋x ?s ）

组别n AT （?）TRI 12（cm 2）A 组50．24?0．0910．32?0．66B 组52．36?0．19

*

35．04?2．31*C 组51．74?0．09▲＊27．84?1．00▲＊D 组

5

1．46?0．09▲＊﹟

24．48?1．37▲＊☆

注：与B 组比较：▲P ＜0．01；与A 组比较：*P ＜0．01；与C 组比较：﹟P ＜0．01；与C 组比较：☆P ＜0．05。

3．4

对兔脑肠组织、外周血VIP 含量的影响见表2。

表2各组兔下丘脑、肠、血浆VIP 含量比较（n =10，

珋x ?s ）组别脑组织VIP （pg /mg ）

肠组织VIP （pg /mg ）

外周血VIP （pg /mL ）

A 组0．29?0．051．32?0．097．91?0．80

B 组0．43?0．05*1．58?0．08*12．96?0．73*

C 组0．38?0．06Δ*1．47?0．08▲＊9．10?0．49▲＊

D 组

0．33?0．05

▲☆◇

1．39?0．06

▲☆◇

8．51?0．46

▲☆◇

注：与B 组比较：▲P ＜0．01，ΔP ＜0.05；与A 组比较：☆P ＜0.05，*P ＜0．01；与C 组比较：◇P ＜0．05。

实验证明，ET 引起体温升高的同时，脑肠组织及血浆

中VIP 的含量明显高于正常组（P ＜0．01），用清开通、清开灵治疗后，两组的脑肠组织及血浆中VIP 的含量显著低于模型组（P ＜0．01），尤其清开通组较清开灵组降低幅度更大，

二者有显著差异（P ＜0．05）。表明VIP 参与了体温的正调节。3．5

对兔脑肠组织、外周血IL －2含量的影响见表3。

表3各组兔下丘脑中、肠组织、血浆

IL －2含量比较（n =10，珋x ?s ）

组别脑组织（pg /mg ）肠组织（pg /mg ）外周血（pg /mL ）A 组7．59?0．619．28?0．821．00?0．05B 组13．41?0．72*13．14?0．76*2．31?0．07*C 组8．74?0．36▲＊10．55?0．56▲＊1．13?0．07

▲＊

D 组

8．16?0．49

▲☆◇

9．93?0．51

▲☆◇

1．07?0．05▲☆◇

注：与B 组比较：▲P ＜0．01；与A 组比较：☆P ＜0．05，*P ＜0．01；与C 组比较：◇P ＜0．05。

本实验结果显示，模型组IL －2含量均明显高于正常

组（P ＜0．01），

提示本实热证的发生、发展与IL －2活性增强有关。用清开通、清开灵灌肠后，两组的脑肠组织及血浆中IL －2的含量与模型组相比均显著降低（P ＜0．01），尤其清开通组较清开灵组降低幅度更大，二者有显著差异（P

＜0．05）。4

讨

论

胃肠道与中枢神经系统联系起来的神经、内分泌网络

称为脑－肠轴（brain －gut axis ）［2］

。中枢神经系统通过影响胃肠激素的分泌及免疫功能而影响胃肠功能，而胃肠功能的异常又可通过胃肠与神经系统的共有激素即脑肠肽与

免疫系统而影响神经系统［3］

。现代医学对发热的认识，比较一致的观点是EP 作用于体温调节中枢，导致中枢发热

介质的释放，

最终使下丘脑体温调节中枢调定点上移而引起体温升高。醒脑开窍及通腑泄热治疗发热和现代医学脑

－肠轴学说之间可能存在密切关联，脑和肠两者间可能具

有某些共同的、客观的、量化的物质基础。

多种神经肽与体温调节有关，业已证明VIP 参与体温调节反应。本实验表明：脑肠同治的清开通灌肠液对脑肠组织及血浆中的VIP 含量与对照组及造模组比较有显著性差异（P ＜0．05），表明VIP 参与了体温的调节。可使脑肠组织中脑肠肽分子VIP 释放减少，可能是开窍通腑法治疗发热的有效机制之一。说明了呈现脑肠双重分布的脑肠肽在发热中的作用，

提供了脑肠同治治疗发热的实验依据。肽类分子对于脑、肠功能影响及对免疫的调控机制研究已引起人们的重视。肠道免疫防御体系庞大且紧密相连、相互作用，共同维系肠道的正常结构和功能状态，是人

体的主要防御体系，是当今免疫学研究的热点［4］。肠道出现便秘或腹泻时，可破坏肠免疫屏障，进而影响全身免疫功

能。开窍通腑治疗发热可能与免疫密切相关。本课题通过

检测IL －2说明，清开通灌肠液解热效应机制可能与IL －2释放减少有关，这可能是IL －2致热作用减弱和其免疫功能调节综合作用的结果。

温病最怕表气郁闭，热不得越；更怕里气郁结，秽浊阻塞；尤怕热闭肠腑，传导不通。清开通灌肠液是由吴鞠通《温病条辨》中的牛黄承气汤改良而成，此方既泄热通腑，又开通心窍，为开上、通下并治之法。有莲子心、水牛角、冰片、菖蒲、郁金、黄连、黄芩、栀子、大黄组成。莲子心善清心热。水牛角入血分，有凉血解毒之功。菖蒲、郁金、冰片芳香开窍。黄连泻心火，黄芩泻胆、肺之火，栀子泻心与三焦之火，

三药合用，苦寒直折。热邪壅闭，郁热难出，以大黄攻下，下窍得开，气机疏通，而邪热亦随之外泄。全方体现了清凉开窍，宣散郁结；通腑畅气，邪有出路，从而使人体气机升降有序，达到脏腑气安的目的。通过肠道给药，将药液迅速转输而上，布散全身，起到通窍启闭、清热祛邪之功。参考文献

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退热效应及免疫调控作用研究［J ］．山东中医药大学学报，2009，33（1）：66．

［2］Mertz HR．Overview of functional gastrointestinal disorders ：dys-function of the brain －gut axis ［J ］．Gastroenterology Clinics of North America ，2003，32：463－476．

［3］张莉华，方步武．脑肠轴及其在胃肠疾病发病机制中的作用

［J ］．中国中西医结合外科杂志，2007，13（2）：199－201．［4］刘冬妍．肠道免疫防御［J ］．国外医学·流行病学传染病学

册，

2005，32（3）：184．6322

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/dsy1.html