ELISA法检测HIV抗体弱阳性外部对照室内质控血清的制备和保存

ELISA法检测HIV抗体弱阳性外部对照室内质控血清的制备和保存

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现代检验医学杂志第２４卷第５期２００９年９月ＪＭｏｄＬａｂＭｅｄ，Ｖ０１．２４，Ｎｏ．５。Ｓｅｐｔｅ．２００９

表明，ＨＣＶｃｏｒｅ区ＤＮＡ疫苗的免疫反应与机体的保护性免疫密切相关。所以我们认为，ＨＣＶ核心蛋白基因可以作为ＨＣＶ预防和治疗性疫苗研制的首选靶基因进行研究。参考文献：

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收稿日期：２００９－０７—２２修回日期：２００９—０８一１９

ＬａｇｇｉｎｇＬＭ，ＭｅｙｅｒＫ，ＨｏｆｔＤ，ｅｔａ１．Ｉｍｍｕｎｅ

ｓｐｏｎｓｅ

ｔＯ

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Ｃ

ＥＬＩＳＡ法检测ＨＩＶ抗体弱阳性外部对照室内质控血清的制备和保存

周炳烨（郑州市第三人民医院检验科，郑州４５００００）

摘

要：目的

制备ＥＬＩＳＡ法检测ＨＩＶ抗体室内质控血清并探讨其保存方式。方法

对ＨＩＶ抗体阳性混合血清进行倍比

两种保存方式的

稀释，选Ｓ／ＣＯ值２～３之间的稀释度制备室内质控，分装后分别保存于４℃和一２０℃冰葙中备用。结果

质控血清连续测定３ｍｏ并绘制质控图，一２０℃冻存质控品结果稳定，４℃保存质控品，第一月稳定，第二、三月出现明显失控。结论

自制ＨＩＶ抗体弱阳性血清作为室内质控是可行的。

关键词：Ｅｌ。ＩＳＡ；ＨＩＶ；室内质控；外部对照；倍比稀释

中图分类号：Ｒ４４６

文献标志码：Ａ

文章编号：１６７１—７４１４（２００９）０５—００８—０２

ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉＳＳＩＩ．１６７１—７４１４．２００９．０５．００３

１．２．２用ＨＩＶ抗体阴性健康人血清对少量ＨＩＶ抗体阳

性混合血清进行倍比稀释并对不同稀释度血清进行双份平

应用第三代ＥＬＩＳＡ试剂盒对ＨＩＶ抗体进行检测是初筛及确证实验室的常用方法，该法以基因重组和多肽抗原包被和标记，有良好的特异度和敏感度。实际工作中，为保证检测质量，实现试剂的高特异度和高敏感度，提高检测结果的重复性，消除和减少随机误差，必须在检测过程中加入适当的外部对照室内质控品。我院ＨＩＶ初筛实验室根据经验和实际需要进行自制，取得了满意的效果。１材料与方法１．１材料

行检测，选取Ｓ／Ｃ０值为２～３的稀释度为最适稀释度。

１．２．３

根据最适稀释度和年需求量进行配制，分装和保

存。其中一２０６Ｃ保存分装量为３～５ｄ用量，４℃保存分装量

为一个月使用量。

１．２．４严格按照操作规程对制备好的质控血清进行２０次重复测定，求其均值（＿），标准差（ｓ）和变异系数（ＣｑＺ％），作

为绘制质控图的初始数据。

１．２．５将分装好的室内质控品分别保存于一２０℃和４℃环境中，每天随日常工作对两种质控品分别做双份测定，求均值绘制质控图并根据实际情况对数据进行修正。２结果①对不同稀释度血清进行检测后发现其Ｓ值有

良好的浓度梯度，在１：４０００

１：８

１．１．１试剂盒：上海科华人类免疫缺陷病毒抗体（１＋２）诊断试剂盒（双抗原夹心酶联免疫法），上海科华生物工程股

份有限公司，批号：２００８０６２３，有效期：２００９．０６．２２。

１．１．２仪器：芬兰雷勃ＷｅｌｌｓｃａｎＫ３酶标仪，郑州安图生物工程公司ａｎｔｈｏｓｆｌｕｉｄｏ洗板机．

１．２１．２．１

’

０００稀释度范围内，Ｓ／

方法ＣＯ值在１．７３～３．２６范围内，根据情况选定１：７０００作为最适稀释度。②稀释完成后，对其进行２０次重复测定，其

ｓ／ｃＯ值为２．１６～２．９２，均值（ｊ士ｓ）为２．５６３土０．２０６，批内

收集无污染、溶血、黄疸和脂血的新鲜ＨＩＶ抗体阳

性血清１０份和ＨＩＶ抗体阴性健康人血清足量，５６℃灭活

３０ｍｉｎ，３０００

ｒ／ｒａｉｎ离心１５ｍｉｎ，去除纤维蛋白沉淀物后

ＣＶ（％）为８．０３，符合质控需要．⑨对两种保存条件下的室内质控品进行三个月的连续测定并绘制Ｌｅｖｅｙ—Ｊｅｎｎｉｎｇｓ质

备用。

作者简介：肭ＪＪ：ｇ＃（１９７９－－）．男，检验师，专业方向：免疫学技术ｔＴｅｌ：１５８３８２８５８０８，Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｈｕｂｉｎｇｙｅ００１（鱼１６３．ｃｏｍ．

ELISA法检测HIV抗体弱阳性外部对照室内质控血清的制备和保存

现代检验医学杂志第２４卷第５期２００９年９月ＪＭｏｄＬａｂＭｅｄ。Ｖ０１．２４，Ｎｏ．５ Ｓｅｐｔｅ．２００９９

控图如图ｌ，图２。两图均以第三月质控图数据即由全部测定数据所得出的ｉ，ｓ，ＣＶＶｏ值作图，其两组数据分别为：一２０’Ｃ：第一月牙＝２．５５７，５＝０．２１８，ＣＶ＝８．５４％；第二月Ｚ－

＝２．５５１，５＝０．２１７，ＣＶ＝８．５１％；第三月ｉ＝２．５４，５＝

０．２１９，ＣＶ＝８．６３％。４＂Ｃ：第一月ｉ＝２．５１９，ｊ＝０．１９４，ＣＶ

＝７．６８％；第二月ｉ＝２．３６６，５＿－－＝０．２９９，何＝１２．６４％；第三

月孟＝２．１８４，ｓ＝０．４３５。Ｃ矿＝１９．９％，见图１．图２。

２．９９７

２．７７４

２．５５ｌ２．３２８２．１０５１．８８２

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ｉ±２．５４，ｓ＝０．２１９，Ｃｐ＇／ｏ＝８．６３

图１—２０＂Ｃ保存ＨＩＶ抗体阳性血清三个月质控图

３．０５５２．６２２．１８５１．７５

１＿３１５０．８８

１

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图２

３讨论

３．１

４℃保存ＨＩＶ抗体阳性血清三个月质控图

２０℃保存质控品，稳定性良好，而４℃保存质控品第一个月稳定，第二、三月ｓ／ｃｏ值呈不断下降趋势，说明其稳定性不断下降。其原因可能有：①血清在４℃冰箱中长时间保存会导致ＩｇＧ发生聚合，从而使可监测到的ＨＩＶ抗体量减少；②４℃保存时分装量较大，反复温度变化及频繁打开包装，容易使血清中成分发生变化，同时增加了受污染的几率；⑧制备过程中器具消毒不彻底，４℃长时间保存不能有

效阻止细菌等微生物的繁殖，血清变质腐败。

引入弱阳性外部对照室内质控血清的意义

法检测ＨＩＶ抗体过程中，要保证结果的准确可靠，引入适

当的外部对照室内质控是必要的。外部对照室内质控是与待检标本基质相同或相似的稳定的弱阳性血清，应用在日常工作中，通过绘制质控图、设置结果灰区值，可有效地对检测过程进行监测，提高灵敏度和特异度，降低弱阳性标本的漏检率。

３．２

外部对照室内质控血清制备过程中应注意的问题

参考文献：

［１］

尚

①ＨＩＶ抗体阴性健康人血清须一次足量收集；②所有收集的血清特别是ＨＩＶ抗体阳性血清灭活一定要彻底；③稀释过程中每一步都必须进行充分的混匀；④制备过程中所使用的所有容器都必须无菌。⑤稀释时稀释度的选择要根据收集到的阳性标本情况进行确定。

３．３

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试刺对制备质控品的影响不同厂家试剂之同因检

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测原理、检测限、包被物质和标记物等不尽相同，会有一定范围内变异；而同一厂家的试剂也因工艺所限，也有一定范围的批内批间变异。质控品能够反映出这些变异，同样这些变异过多的存在也会影响质控品的制备。为减少这些影响ｔ制备出合格的质控品，在制备过程中及使用评价的前几个月，应尽量使用同一厂家同～批号试剂。

３．４保存温度对质控品的影响从质控图可以看出，一

质控探讨［Ｊ］．中国医学检验杂志，２００９，１０（３）：１５３—

１５４．

［４］谢益君．ＥＬＩＳＡ法检测ＨＩＶ的室内质量控制［Ｊ］．浙

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收稿日期：２００９—０８—１２修回日期：２００９．０９．０６

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/dpm1.html