表达猪2型圆环病毒ORF2基因的重组伪狂犬病病毒的构建及鉴定

【目的】以伪狂犬病病毒为载体,构建表达猪2型圆环病毒ORF2基因的重组病毒,并研究其生物学特性。【方法】将猪2型圆环病毒ORF2基因插入到伪狂犬病病毒gG缺失通用转移载体中,构建猪2型圆环病毒-伪狂犬病病毒重组中间转移质粒,然后将该质粒与伪狂犬病病毒TK^-／gG^-／ORF2^+基因组共转染IBRS-2细胞,待发生细胞病变后收集病毒液进行重组病毒的筛选及生物学特性测定。【结果】利

维普资讯

中国农业科学

2 0,98:7 612 0 63() 1-7 2 1

S i n i rc l r i ia c e t Ag iu t aS n c a u

表达猪 2型圆环病毒 O F因的重组伪狂犬病病毒的 R 2基构建及鉴定琚春梅，陈焕春，郗鑫，刘正飞，曹胜波(中农业大学动物医学院，武汉 40 7)华 30 0

摘要：目的l以伪狂犬病病毒为载体，构建表达猪 2【型圆环病毒 0F基因的重组病毒，并研究其生物学特 R2性。【方法 l将猪 2型圆环病毒 0F基因插入到伪狂犬病病毒 g R2 G缺失通用转移载体中，构建猪 2型圆环病毒一 伪狂犬病病毒重组中间转移质粒，然后将该质粒与伪狂犬病病毒 T一 G Lc因组共转染 IR一细胞， K g一 aZ//基 BS2待发生细胞病变后收集病毒液进行重组病毒的筛选及生物学特性测定。结果 l【利用检测 PV F基因和 Lc基因的 PR C2 R 2 O aZ C方法筛选到重组病毒 T一 G 0 F,同时用 Suh r 1t ig证实外源基因 PV R2已成功插入到 K/一 R2 g/ o ten bo tn C 2 0F T一 G Lc K g一 aZ//亲本株的基因组中。间接免疫荧光试验 (F )和 W senbo tn结果显示重组病毒中 PV R2 IA e tr lt ig C2 F 0基因获得了成功表达。对重组病毒的生物学特性研究表明，重组病毒与其亲本株在不同细胞上的增殖滴度相当，

且重组病毒对小鼠无致病性，免疫小鼠后可诱导机体产生抗 0F蛋白的特异性抗体。【 R2结论l重组伪狂犬病毒构建成功，且表达的 0 F R 2蛋白具有免疫原性。 关键词：猪 2型圆环病毒；0 F因；伪狂犬病毒；T一g 0 F R 2基 K/ G/ R 2;鉴定

Co s r c in a d Ien ic t fa Re omb n n eu Or be n tu t n d t ia i o c o f On ia tPS d a iS Vi s Ex r s ig O 2 Gen f r p e sn RF u e o cn r o i sT p Por ie Ci v r y e 2 c uJ Ch nm e, U u - iCHE Hu n c u, n LI Z e g fiCAO h n - o N a -h n XI Xi, U h n -e, S e gb

( ol eo e r ayMe i n, ah n g iu

ua nvri, u a 3 0 0 C l g t i r dc eHu zo gA r l rl i sy W h n4 0 7) e fV e n i ct U e t

Ab t c:[ bet e ntipp rarcmbn n vrs x rsigO F eeo C 2uigpe d rbe i s s etr sr t O jci]I s ae, o iat i pes R 2g n f V s su oais r co. a v h e ue n P n v av u[ to T e R 2gn f oc e i o i sy e2w s net t e nv r lrnf etr e t gg o e d rb s Me d h F eeo ri r vr p a sr di ot ies ase vco l i G f su oai h I O p n cc u t i e n hu at r d en p ev r s og n r t er c mb n n a se ls d T eg n mi i e e a et e o i a t r n frp a mi . h e o cDNA f R TK。 G’ c sr i n g u t h t o V P// Z tan a dp GORF r O i f c e g La 2 wee C -n e t d

it I R - cl . hnte eo iat i s K/G。 F s e ce di ilgcl hrc rt a aue . R sl no B S2 el T e cmbn n r 。/ s hr v u T g OR 2 wa l td n s oo i aat ii w s se a tb ac e sc mesrd[ eut]T e r c mb n t i swa ee t d b h e o i a r s s lc e y PCR wi n vu t ORF e e a d L c g n rme sr s e t ey a d t e P h 2 g n n a Z e e p i r e p c i l n h CV2 ORF e e h d v 2g n a

b e n e e t e g n m eo K/ G/ a Z sri d n i e y S uh r l t n . h e ut fi d r c e n i s r d i o t e o fT g L c t n h t n i e t d b o t e n b ot g T e r s l o i ti a i f i s n e mmu o l o e c n n f rs e e u

asy( A) dWet nbo igid a dta t

eO F e e s x rse cesul. rp gt no e eo iat i sn sa I a s r ltn i t th R 2gn pesds csfl Po a a o f cmbn r F n e nceh wa e u y i h t r n vu ic l s c re p n i g t e p r n tan An ma e p rme t h we h tt e r c mb n n i sTK/ G/ e l wa o r s o d n o t a e t s i . i l x e i n s s o d t a h e o i a tv r s h r u g ORF wa a e t 2 s s f o

mi d o l i uete p c cat o i g isepesdO F rt n[ o cui] T er o iat su oa i i s c a ud n c ei ni de a a t x rs R 2poe . C n ls n en c d hs f i b s n e i o h c mbn n ped rbe vr e s uwa o sr c e u c s f l, d t ee p e s d ORF r t i a mmu o e i i . s n t td s c e su l a x r s e c u yn h 2 p o en h d i n g nc t y Ke r s P r i ec r o i s y e2 ORF e e Ps u o a i s i s T/ G。 ywo d: o c n i v r p ; c u t 2 g n; e d r b e r; K’ v u g/ ORF I e t c to 2; d n i ai n i f

0引言t研究的重要意义 1猪圆环病毒 ( oc e本 p ri n收稿日期：2 0.92:接受日期：2 0.21 040—1 0 51.2基金项目：国家“6” 83高技术研究发展计划 (0 1 A2 35 ) 2 0A 10 1

c cvrsP V) i o i, C是近年来兽医界广泛关注的新发现的 r u病毒之一。该病毒基因组为环状单链D NA,大小约为

1 b病毒粒子无囊膜，呈二十面体对称，直径约为 .k, 7

作者简介：琚春梅 (96 ) 17一，女，湖北枣阳人，博士研究生.研究方向为动物病毒的分子生物学。E m ijcume72@13tm,通讯作者陈焕春 - al uh n i 5 6.: 6 o(9 3),北恩施人，教授，博士生导师，究方向为动物重大疫病的疫苗及诊断方法。Tl0 782 20

; a: 2—78 75E m i 15一，男湖研 e:2—78 68F x 0 782 19; . al: havt ul .hh . zu e@p biw .b a c c

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/dp61.html