免疫学与检验重要知识点汇总

免疫应答主要分为哪几个阶段？

1）识别阶段 2）活化和增值阶段 3）免疫效应

中枢免疫器官和外周免疫器官有哪些器官组成？各有什么功能？

1）中枢免疫器官：免疫细胞发生、分化、成熟的场所，如骨髓，胸腺2)外周免疫器官：免疫细胞产生应答的场所。如脾脏，淋巴结，黏膜，扁桃体等。 T细胞、B细胞和NK细胞的主要功能分别是什么？

1）T细胞： 介导细胞免疫，辅助体液免疫。2）B细胞： 产生体液免疫3）NK细胞：介导天然免疫，发挥细胞毒作用。

根据作用方式及其特点的不同，机体存在两类免疫简述各自的概念和特征？

1)先天性免疫或固有性免疫，是个体出生是就具有的天然免疫，可通过遗传获得，是机体在长期进化过程中逐渐建立起来的主要针对入侵病原体的天然防御功能。其主要特征是反应迅速，针对外来异物的范围较广，不针对某个特定异物抗原，也称非特异性免疫。2)适应性免疫，是个体出生后，接触到生活环境中的多种异物抗原，并在不断刺激中逐渐建立起来的后天免疫，也称获得性免疫。其主要特征是针对某个特定的异物抗原而产生免疫应答，开始的应答过程比较缓慢，一旦建立清除该抗原的效率很高，特异性很强，也称特异性免疫。 简述抗原抗体反应的原理。

答：抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原表位与抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性，这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的，它们之间的结合是抗原表位与抗体超变区沟槽分子表面的结合 简述抗原抗体反应的类型。 答：抗原抗体反应分为五种类型：①颗粒性抗原与相应抗体结合所产生的凝集反应；②可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应；③抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应；④细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应；⑤免疫标记的抗原抗体反应等。 什么是带现象?

答：在抗原抗体反应等价带前后，由于抗体或抗原过量(形成前带或后带)，上清液中可测出游离的抗体或抗原，形成的沉淀物少，不出现可见反应，这种现象在做血清学试验时称为带现象。

影响抗原抗体反应的环境条件有哪些?在实验中如何控制这些条件因素?

答：环境条件包括：电解质，酸碱度和温度。稳定条件：①电解质：常用O．85％氯化钠或各种缓冲液作抗原及抗体的稀释液及反应液；②酸碱度：pH过高或过低都将影响抗原与抗体的理化性质，抗原抗体反应一般在pH为6～8时进行；③温度：一般以15，

40℃为宜，最佳反应温度为37℃。

简述单克隆抗体制备技术的主要步骤。

单克隆抗体是应用B细胞杂交瘤技术进行制备的，其主要操作步骤包括抗原免疫、亲本细胞的选择和制备、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选和克隆化、杂交瘤细胞体内接种或体外增量培养、单克隆抗体的纯化与鉴定。 试述免疫血清应如何进行纯化。

免疫血清的纯化主要是指提纯免疫血清中的IgG并去除无关的杂抗体。提纯IgG类抗体的方法有：硫酸胺盐析法粗提、离子交换层析法和亲和层析法，采用亲和层析法提取IgG时，可使用纯化抗原或葡萄球菌蛋白A交联sephamse 4B制成层析柱。另外，还可通过吸附法获得单价特异性抗血清。方法是将不含特异性抗原的杂抗原与戊二醛等双功能试剂混合制成固相吸附剂，以吸附免疫血清中的杂抗体，或将杂抗原交联于sephamse 4B上，通过亲和层析去除杂抗体。 叙述杂交瘤技术的基本原理。

杂交瘤技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。这种杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性，即既能够分泌抗体又能在体外长期繁殖，经过克隆化后成为单个细胞克隆，分泌的抗体即为单克隆抗体。 简述间接血凝试验的基本原理。

间接血凝试验是将可溶性抗原(或抗体)吸附于人的0型红细胞或绵羊、家兔的红细胞制成抗原致敏的红细胞，与相应抗体(或抗原)作用，在有电解质存在的条件下，经过一定时间可出现肉眼可见的红细胞凝集现象，又称被动血凝试验

简述抗人球蛋白试验的原理(又称Coombs试验)、类型及其在临床上的应用。

Coombs试验又称抗人球蛋白试验，其原理是不完全抗体多半是7S的IgG类抗体，能与相应的抗原牢固结合，但在一般条件下不出现可见反应，利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体，可使红细胞凝集。 Coombs试验有二种类型：(1)直接Coombs试验：用于检测红细胞结合的不完全抗体。(2)间接Coombs试验：用于检测血清中游离的不完全抗体。 抗球蛋白试验主要应用于那些方面？

①输血：对于“危险”受体（指曾经输血、肌肉注射过血液制品或母子间血型不合的妊娠而可能产生免疫性血型抗体的人）的配血试验必须包括各种不完全抗体的检查，以抗球蛋白法最为可靠。②血型抗原抗体的检查：主要检查Rh— 者，其体内是否有抗-D抗体，应用抗球蛋白试验对外表为D 阴性的供体血液作常规检查。最可靠和灵敏的方法是将待检D 阴性的红细胞与高效价的不完全抗-D 血清混合，然后加抗球蛋白血清检查细胞上有无致敏抗体。③对新生儿溶血性贫血性疾病的诊断：母体产生的最常见的免疫性抗体为Rh 抗体和ABO 抗体，一般为7S 的IgG，可通过胎盘屏障，作用于胎儿红细胞，引起新生儿溶血性疾病，可借抗球蛋白试验检出而采取预防性措施。④对溶血性贫血的研究：获得性溶血性贫血患者大多数可借助该方法证实有自身红细胞的抗体存在。⑤对细菌或立克次体的不完全抗体的检查。

Coombs 试验还可采用专一性特异性的抗球蛋白的血清，如抗IgG 血清、抗IgM、抗IgA以及抗补体血清等，分析结合于红细胞上的不完全抗体免疫球蛋白的亚类。 什么是协同凝集试验？主要用于何种检测？

协同凝集试验与间接凝集反应的原理相类似，但所用的载体为金黄色葡萄球菌。这种细菌的细胞壁中含有A蛋白（SPA），SPA 能与特异性抗体IgG 的Fc段结合（IgG3除外）。抗体的F(abˊ)2 段暴露在葡萄球菌的表面，仍保持与相应抗原特异性结合的特性。当这种葡萄球菌与IgG抗体连接时，就成为抗体致敏的载体颗粒，若与相应抗原接触，即出现反向间接凝集反应。可用于细菌、病毒、毒素及各种可溶性抗原的检测。

何谓间接凝集反应？

将可溶性抗原（或抗体）先吸附或偶联于与免疫无关大小适当的颗粒表面，使之成为致敏载体颗粒，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质存在条件下，出现特异性的凝

集现象，称为间接凝集反应

间接凝集反应如何进行分类？各试验的原理是什么

根据致敏载体用的是抗原或抗体分为正向间接凝集试验和反向间接凝集试验；根据载体种类，分为间接血凝试验和胶乳间接凝集试验；根据反应方式分为间接凝集试验、间接抑制凝集试验和协同凝集试验。间接凝集试验是用抗原致敏载体检测标本中的相应抗体。将可溶性抗原与载体颗粒结合，再与标本中的抗体反应，通过抗体桥联，形成肉眼可见的凝集颗粒或凝集块，为阳性反应。反向间接凝集试验选用已知特异性抗体致敏载体检测标本中的相应抗原。用特异性抗体致敏颗粒，与样品中的待检抗原反应，通过抗原桥联，形成肉眼可见的凝集为阳性。临床上用于检测HbsAg、AFP 等。间接凝集抑制试验诊断试剂为已知抗原致敏的颗粒载体及相应的抗体，用于检测标本中与致敏抗原相同的抗原。将标本与抗体试剂相反应，然后加入致敏抗原，若出现凝集现象，说明标本中不存在相应抗原;如未出现凝集现象，则说明待检标本中含有相应抗原，凝集反应被抑制。同理，用抗体致敏载体颗粒及相应抗原作为诊断试剂，检测标本中的抗体，称为反向间接凝集试验。协同凝集试验与间接凝集反应的原理相似，但所用载体为金黄色葡萄球菌，该菌细胞壁上的SPA 能与特异性抗体的IgG 的Fc 段结合（IgG3除外），抗体的F(abˊ)2 段暴露在葡萄球菌的表面，仍能与相应抗原特异性结合。当这种葡萄球菌与IgG 抗体连接时，就成为抗体致敏的载体颗粒，若与相应抗原接触，即出现反向间接凝集反应。间接血凝试验是以红细胞作为载体的间接凝集试验，用已知的抗原或抗体致敏红细胞，然后与样品中的抗体或抗原在适宜条件下反应，出现红细胞凝集者为阳性。根据红细胞凝集的程度判断阳性反应的强弱。胶乳凝集试验是以聚苯乙烯胶乳微粒作为载体的间接凝集试验。

HAT培养基筛选杂交瘤细胞的机制是什么？

答：1.淋巴细胞：不能生长，5到7天死亡；DNA的主要合成途径被A阻断2.骨髓瘤细胞：不能生长，5到7天死亡；HGPRT缺乏，DNA合成的旁路途经受阻3.骨髓瘤细胞和脾细胞融合形成杂交瘤细胞，可长期生长繁殖。利用淋巴细胞的HGRT将Ｈ合成为嘌呤碱并最终与Ｔ一起合成ＤＮＡ从淋巴细胞获得产生某种抗体的遗传信息，从骨髓瘤细胞获得不断繁殖的能力

简述免疫系统的三个生理功能。

答：免疫系统的三个生理功能为免疫防御、免疫自稳、免疫监视 免疫防御：是机体排斥外来抗原性异物的一种免疫保护功能。该功能正常时，机体可抵御病原微生物及其毒性产物的感染和损害，即抗感染免疫；异常情况下，反应过高会引起超敏反应，反应过低或缺失可发生免疫缺陷。免疫自稳：是机体免疫系统维持内环境稳定的一种生理功能。该功能正常时，机体可及时清除体内损伤、衰老、变性的细胞和免疫复合物等异物，而对自身成分保持免疫耐受；该功能失调时，可发生生理功能紊乱或自身免疫性疾病。免疫监视：是机体免疫系统及时识别、清除体内突变、畸变细胞和病毒感染细胞的一种生理功能。该功能失调时，有可能导致肿瘤发生，或因病毒不能清除而出现持续感染。 决定抗原抗体最佳配比的方法有几种?

(1)抗原稀释法：将可溶性抗原作一系列倍比稀释，然后向各管中加入一定浓度的适量抗血清，37℃反应后，产生的沉淀量随抗原量变化而不同，以沉淀物最多的管为最适比例管。(2)抗体稀释法：是将恒定量抗原与不同倍比稀释的抗体反应，出现沉淀物最多的管为抗体最适比例管。(3)棋盘格法：亦称方阵法。抗原抗体同时稀释，可一次完成抗原和抗体的滴定，并找出抗原、抗体的最适比。是前二法的结合

简述单向免疫扩散试验的基本原理和技术要点。(1)原理：待测抗原从局部含有定量抗体的凝胶内自由向周围扩散，抗原抗体特异性结合，在两者比例合适的部位，形成白色沉淀环，沉淀环的大小与抗原的浓度呈正相关。(2)技术要点：将抗体和热融化琼脂(约50％)混合，倾注成平板。待凝固后在琼脂板上打孔，孔中加入已稀释的抗原液，和不同浓度的抗原标准品，置37~12温箱，24～48h后观察孔周围沉淀环。量取沉淀环直径，通过抗原标准品，计算待测抗原的浓度。 在双向免疫扩散试验中，如何判定结果?

双向免疫扩散中，出现沉淀线，表明存在相应的抗原、抗体，不出现沉淀线则表明缺乏抗原或抗体。沉淀线的形成是根据抗原抗体两者比例所致，沉淀线靠近抗原孔，提示抗体含量高；靠近抗体孔，提示抗原含量较多 免疫电泳技术的优点是什么?免疫电泳有哪些用途?

1)优点：免疫电泳技术是将免疫扩散和电泳相结合的一种免疫学分析技术，既有抗原抗体反应的高度特异性，又有电泳分离技术的快速、灵敏和高分辨力，广泛应用于牛物医学领域。(2)用途：①纯化抗原或抗体的成分分析，分析其纯度；②正常

及异常体液中蛋白质成分的分析，如无丙种球蛋白血症、冷球蛋白血症、多发性骨髓瘤、白血病、系统性红斑狼疮、肝病等病人的血清蛋白成分的分析，多发性骨髓瘤血清M蛋白的检测和鉴定；③免疫后不同抗体组分的动态变化研究 对流免疫电泳时，抗体为什么流向负极?

大部分蛋白质抗原在碱性溶液中带负电荷，电泳时从负极向正极泳动，而抗体IgG分子量大，暴露的极性基团较少，在缓冲液中解离的也少，向正极的泳动速度较慢，电泳时由电渗引向负极的液流速度超过了IgG向正极的泳动，带动抗体流向负极，使抗原和抗体定向对流并发生反应，出现肉眼可见的沉淀线。 简述火箭免疫电泳的原理和主要用途。

(1)原理：火箭免疫电泳是将单向免疫扩散和电泳相结合的技术。抗原在电场作用下，在含有适量抗体的琼脂糖凝胶中向正极泳动，逐渐形成梯度浓度，在抗原抗体比例适当时形成沉淀，随着抗原量的减少，沉淀带越来越窄，形成火箭峰样沉淀，峰形高低与抗原量呈正相关。用已知量标准抗原作对照，绘制标准曲线，根据检测样品沉淀峰的高度可算出待测抗原的含量。(2)主要用途：①抗原蛋白定量，如IgA、IgG、IgM和sIgA检测；②C3、C4及其裂解产物检测；③AFP等检测。 免疫浊度测定的基本原理是什么?有哪些类型?

(1)基本原理：免疫浊度测定是将液相内的沉淀试验与现代光学仪器和自动分析技术相结合的一项分析技术。当可溶性抗原与相应的抗体特异结合，在二者比例合适、并有一定浓度的电解质存在时，可以形成不溶性的免疫复合物，使反应液出现浊度。这种浊度可用肉眼或仪器测知，并可通过浊度推算出复合物的量，即抗原或抗体的量。(2)类型：按测量方式可分为透射免疫比浊法和散射免疫比浊法。按测定速度可分为速率比浊法和终点比浊法。 散射免疫比浊法的基本原理是什么?

沿水平轴照射的一定波长的光，在通过溶液时，光线可被其中的免疫复合物粒子颗粒折射，发生偏转，产生散射光。根据Rayle培h散射方程，散射光强度与粒子(免疫复合物)的浓度和体积成正比，通过测量散射光的强度，可计算出待测抗原的浓度。

速率散射比浊法中的“速率”是指什么?

所谓速率是指单位时间内抗原与抗体反应的速度。抗原与抗体结合形成免疫复合物的速度，在每个单位时间内是不相同的，在抗体过量的情况下，随着反应时问的延长，免疫复合物的总量逐渐增加，通常在25s时出现一个反应最快的速率峰。峰值与抗原量呈正相关。

免疫浊度测定的反应体系中，为什么必须始终保持抗体过量

抗原和抗体的比例是浊度形成的关键因素，抗原和抗体必须在一个适当的浓度才会出现最高结合率。当抗原过量时，由于钩状效应，形成的免疫复合物分子小，而且会发生再解离，使浊度下降，光散射减少。当反应液中抗体过量时，免疫复合物的

形成随着抗原量的增加而递增，光散射的强度也随之递增，因此，免疫浊度测定的反应体系中必须始终保持抗体过量，以保证免疫复合物的生成量与浊度的改变一致，这是免疫浊度测定的基本原则。 单向琼脂扩散试验有那些影响因素？

单向扩散试验有下列影响因素： ① 抗血清的亲和力、特异性、及效价。要求亲和力强，特异性好、效价高。注意存放的方法，防止效价下降。 ② 标准曲线必须在每次测定时同时制作，绝不可一次作成，长期应用。 ③ 测定时必须加测质控血清，以保证定量的准确性。 ④ 有时出现扩散环呈现两重的双环现象，这是出现了抗原性相同的两个组分，其扩散率不同，例如α重链病血清中出现的α重链和正常的 IgA两种成分并存，皆与抗IgA 抗体发生反应，就形成内外两重环。 ⑤ 在单扩试验时，有时回出现结果与真实含量不符，这主要出现在 Ig 测定中。如用单克隆抗体或骨髓瘤纯抗原免疫动物获得的抗血清，都存在单一结合价的现象，若用此作为单扩试剂测量正常人的多态性抗原，则抗体相对过剩，是沉淀圈直径变小，测量值降低。 ⑥ 测得假阳性升高现象与上面相反，如用多克隆抗体测定单克隆病，则抗原相对过剩（单一抗原决定簇） ，致使沉淀圈呈不相关扩大，从而造成某一成分的伪性增加。

沉淀反应可应用在那些方面？

沉淀反应主要应用于体液内包括血液、尿液、脑脊液、胸水、泪液、关节腔液等内的蛋白质（如MW10000~50000，标本浓度为 1mg/L~100g/L）测定，应用最广泛的是可以准确定量的免疫浊度法，也可用于药物的测定。 双向琼脂扩散试验的原理是什么？

双向琼脂扩散试验的原理为可溶性抗原和抗体在含有一定电解质的琼脂凝胶板的对应孔中各自向对方扩散，在最适当的比例处形成抗原抗体沉淀线，根据沉淀线的位置、形状及对比关系，可作出对抗原或抗体的定性分析 试对沉淀反应各类试验方法进行评价。

沉淀反应可分为单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、絮状沉淀试验、免疫浊度测定

等试验。 单向免疫扩散试验是一种稳定、简便、不需要特殊设备、一般试验室都可使用的常规方法。 双向免疫扩散试验简单易行，结果可靠，特异性高，分辨率高于对流免疫电泳，成本低廉，结果可经染色干燥后长期保存；缺点是敏感性较低、扩散缓慢，不能精确定量。

免疫浊度法①快速、②敏感，最小检出量可达 ng 水平。③检测范围广 ④缺点是所用抗血清质量要求高，仪器须装电脑，价格较贵。 絮状沉淀试验较实用、简便、不需要特殊设备一般试验室都可使用，但须稀释标本比较麻烦。 放射免疫分析技术有何应用？

答：放射免疫技术由于其测定的灵敏度高，特异性强，精密度好，而且可对半抗原

和抗原测定以及测定仪器设备条件要求不高，因此广泛用于生物医学检验。常用于各种激素、微量半抗原、肿瘤标志物、药物等微量物质的测定。 由于大多数检验项目均有 RIA 或 IRMA 试剂盒供应，目前仍是基层单位对超微量物质测定的主要手段。

试述放射免疫分析与免疫放射分析。

答：放射免疫分析（RIA）是放射免疫技术最经典的模式。它是以放射性核素标记抗原与反应系统中未标记抗原竞争性结合特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析方法。而免疫放射分析（IRMA）是用放射性核素标记的过量抗体与待检测抗原直接结合，采用固相免疫吸附载体分离结合与游离标记抗体的非竞争性放射免疫分析。二者的异同点如下： ①标记物 RIA 以放射性核素标记抗原；IRMA 则是标记抗体。 ②反应速率 IRMA 反应速度比RIA 快。 ③反应原理 RIA 为竞争抑制性结合，反应参数与待检抗原量成反相关；IRMA为非竞争结合，反应参数与待检抗原成正相关。 ④特异性 IRMA 特异性较RIA高。 ⑤灵敏度和检测范围 IRMA测定的灵敏度明显高于RIA， IRMA标准曲线工作范围较RIA宽1~2个数量级。 ⑥其他 RIA 所用抗体为多克隆抗体，对亲和力和特异性要求较高，但用量很少；IRMA 为试剂过量的反应，对抗体亲和力的要求不及 RIA，但用量大。此外，RIA 可以测量半抗原，但IRMA只能测定至少有两个以上表位的抗原。 试述用于标记的荧光素应具备什么条件?

DA用于标记的荧光素应符合以下要求：①应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基团，结合后不易解离，而未结合者易清除；②荧光效率高，与蛋白质结合后，仍能保持较高的荧光效率；③荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明；④与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫学性质；⑤标记方法简单、安全无毒；⑥与蛋白质的结合物稳定，易于保存。

试述荧光免疫显微技术基本原理。

DA荧光免疫显微技术是以荧光显微镜为检测工具，用荧光素标记特异性抗体或抗抗体，检测固定组织细胞上的抗原或血清中的抗体，常用于定性和定位检查的一门技术。

试述荧光免疫显微技术的临床应用。

DA临床常应用于：①血清中自身抗体的检测；②各种微生物的快速检查和鉴定；⑧寄生虫感染的诊断；④白细胞分化抗原的检测。 时间分辨荧光免疫测定法具有哪些优点?

DA时间分辨荧光免疫测定法具有特异性强，灵敏度高，标准曲线范围宽，分析速度快，标记物制备较简便、有效使用期长，无放射性污染等优点，因此是很有发展前途的超微量物质免疫分析技术。

目前临床检验中常用的荧光物质有哪些？

DA目前临床检验中常用的荧光物质有：四乙基罗丹明、异硫氰酸荧光素、四甲基异

硫氰酸罗丹明、Eu3+的螯合物等。

简述荧光抗体的制备及纯化方法。DA荧光抗体的制备方法纯化方法有透析法、凝胶过滤法、有撑搅拌法及透析法。

荧光抗体技术有哪些优缺点，在临床上有哪些应用？

荧光抗体技术的优点：（1）能做到快速、敏感、定位。（2）Ag 和Ab 的特异性与形态的检查结合在一起；缺点：⑴对组织细胞进行微细结构的观察做不到；⑵标本不能永久保存，荧光有自然消退现象，需及时观察及对照相；⑶有非特异性荧光的干扰。荧光抗体技术的应用：⑴病毒学方面：病毒鉴定和病毒在感染cell内的定位；⑵寄生虫学方面：用于寄生虫的诊断（鉴定、分型）；⑶免疫学方面：研究、用于自身免疫病的诊断；⑷细菌学方面：菌种鉴定和Ag结构的研究。 用于标记的酶应符合哪些要求?

DA(1)酶活性高，能对低浓度底物产生较高的催化反应率。(2)具有可与抗原、抗体共价结合的基团，标记后酶活性保持稳定，而且不影响标记抗原与抗体的免疫反应性。(3)酶催化底物后产生的信号产物易于判定或测量，且方法简单、敏感和重复性好。(4)酶活性不受样品中其他成分(内源性酶、抑制物)的影响；用于均相酶免疫测定的酶还要求当抗体与酶标抗原结合后，酶活性可出现抑制或激活。(5)酶、辅助因子及其底物均对人体无危害，理化性质稳定，且价廉易得。 简述酶免疫技术的分类。

DA(1)酶免疫技术按实际用途，分为酶免疫组化和酶免疫测定两大类。(2)按抗原抗体反应后是否需将结合的和游离的酶标记物分离，分为均相酶免疫测定和异相酶免疫测定，异相酶免疫测定又可分为固相酶免疫测定和液相酶免疫测定。 简述均相酶免疫测定的原理。

DA酶标抗原(AgE)与Ab结合形成AbAgE后，其中的酶(E)活性将减弱或增强。因此，不需对反应液中的AbAgE和AgE进行分离，直接测定反应系统中总酶活性的变化，即可推算出被测样品中Ag的含量。 简述双抗体夹心法的原理。

DA连接于固相载体上的抗体和酶标抗体，与待检抗原上两个不同的抗原决定基结合，形成固相抗体一抗原一酶标抗体复合物。由于反应系统中固相抗体和酶标抗体的量相对于待检抗原是过量的，因此复合物的形成量与待检抗原的含量成正比。测定复合物中酶作用于加入的底物后生成的有色物质量，即可确定待检抗原含量。 斑点-ELISA有哪些优点?

DA(1)NC膜吸附蛋白力强，微量抗原吸附完全，故检出灵敏度可较普通的EusA高6～8倍；(2)试剂用量较EusA省10倍；(3)操作简便，试验及结果判断不需特殊设备条件；(4)吸附抗原(抗体)或已有结果的NC膜可长期保存(-20℃可达半年)。 简述ELISA的基本原理、方法类型及应用。 DA(1)基本原理：抗原或抗体预先结合到某种固相载体表面；测定时，将受检样品(含

待测抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体起反应形成抗原或抗体复合物；反应终止时，固相载体上酶标抗原或抗体被结合量(免疫复合物)即与标本中待检抗体或抗原的量成一定比例；经洗涤去除反应液中其他物质，加入底物进行显色，最后通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量。(2)方法类型及应用：①双抗体夹心法：用于检测抗原，适用于检测两个或两个以上抗原决定基的多价抗原；②间接法：用于检测抗体；③竞争法：用于抗原和半抗原的定量测定，也可对抗体进行测定；④捕获法：用于血清中某种抗体亚型成分(如IgM)的测定。 简述酶增强免疫测定技术的原理。

DA具抗原及酶活性的Ag-E与Ab结合形成AgAb后，所标的酶(E)因与Ab接触

紧密，空间位阻影响了酶的活性中心，酶活性受到抑制。加入未标记抗原(标准或样品

中的Ag)后，Ag即与Ab叫竞争结合反应系统中限量的Ab形成AgAb复合物，从而使反应液中AgAb*(酶活性被抑制)的比例减少，具酶活性的游离AgE增多。最终测得的酶活性随着反应体系中未标记抗原(Ag)浓度升高而增强。 简述免疫印迹法的原理。

免疫印迹法由SDS-PAGE、蛋白质转印和酶免疫测定三项技术结合而成。抗原等蛋白样品经SDS处理后带负电荷，SDS-PAGE时从阴极向阳极泳动，分子量小者，泳动速度快；将凝胶中已经分离的蛋白质条带在电场作用下转移至硝酸纤维素膜上；将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用，加入能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色；根据电泳时加入的分子量标准，可确定各组分的分子量。

何谓金免疫测定技术?简述其技术类型及原理。

DA金免疫测定技术是指用胶体金颗粒作为标记物进行抗原抗体反应的一类免疫学测定技术，其主要技术类型有斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析试验。1)斑点金免疫渗滤试验：在以硝酸纤维素膜为载体并包被了抗原或抗体的渗滤装置中，依次滴加标本、免疫金及洗涤液，因微孔滤膜贴置于吸水材料上，故溶液流经渗滤装置时与膜上的抗原或抗体快速结合并起到浓缩作用，达到快速检测目的，阳性反应在膜上呈现红色斑点。2)斑点金免疫层析试验：是将胶体金标记技术和蛋白质层析技术相合的以硝酸纤维素膜为载体的固相膜免疫分析技术，滴加在膜一端的标本溶液受载体膜的毛细管作用向另一端移动，犹如层析一般，在移动过程中被分析物与固定于载体膜上某一区域的抗体或抗原结合而被固相化，无关物则越过该区域而被分离，然后通过胶体金的呈色条带来判读实验结果。 免疫溶血试验的原理和用途。

DA原理是补体能使已被抗体致敏了的红细胞发生溶血。免疫溶血试验所参与的成分有补体，抗原(SRBC)及抗体(溶血素)，这三种成分中如有两种是已知的就可测知第

三个成分，稀释该成分可测定其效价或含量。如溶血素的滴定，溶血空斑试验，CH50试验，补体结合试验，抗补体试验等。 如何进行补体单个成分的测定?

DA补体单个成分可测其溶血活性或含量。测定溶血活性应先制备缺乏该补体单个成分的“补体试剂\。而后利用免疫溶血试验的原理，将致敏红细胞与“补体试剂”混合，再加入待测血清，孵育后，溶血程度与待测血清中的该补体成分的溶血功能有关。测定含量可用已知抗体以单向琼脂扩散等方法进行。 血清免疫球蛋白测定方法有那些？

答：单向免疫扩散法：原理，优点：简单，条件要求低，但抗体需要高效价高特异性，灵敏度： mg/ml 免疫比浊法:原理，优点：检测结果准确，精密度高，耗时短，灵敏度高ug/ml

免疫球蛋白IgG、IgA、IgM测定有何意义？

答：IgG、IgA、IgM均升高则慢性疾病， IgG升高则多为细菌感染导致，新生儿血清IgM升高则常为 宫内感染。单一Ig显著升高则多为免疫增殖病：多发性骨髓瘤，重链病、恶性淋巴瘤。Ig降低则体液免疫缺陷或联合免疫缺陷。 某患者临床疑为细胞免疫功能缺陷，应做哪些检查以协助诊断？

答：从以下几个方面检测1)皮肤试验 ，显示有迟发超敏反应能力，表示受试验者细胞免疫功能完善2)T细胞及其亚群检测，常采用荧光抗体检测T细胞表面标志分子CD3，CD4等

3)T细胞功能检测，利用PHA刺激淋巴细胞增殖，转化来判断T细胞的功能 简述原发性吞噬细胞缺陷病的发病机制主要包括哪几种？

主要包括：①吞噬细胞趋化和（或）粘附功能障碍。②吞噬和杀菌功能障碍。③单核吞噬细胞的特殊异常，如IgG Fc受体缺陷。 简述AIDS的主要免疫学特征？

①免疫系统的CD4T淋巴细胞受HIV感染，使CD4T细胞受损而减少。②单核-巨噬细胞、滤泡树突状细胞和朗格汉斯细胞亦可受HIV 感染而受损。③进行性细胞免疫缺陷，继而体液免疫缺陷。④B淋巴细胞可克隆激活伴免疫球蛋白增多。 简述体液免疫缺陷的检测方法？

有①血清Ig 的测定，常用免疫扩散法和免疫比浊法。②分泌型IgA 的测定，用单向免疫扩散或ELISA 等。③同种血细胞凝集素测定。④特异性抗体产生能力测定，疫苗接种后抗体产生的测定。⑤抗IgA抗体的测定，测自身抗体。⑥SmIg测定，检测B细胞数量和其成熟程简述细胞免疫缺陷的检测方法？

有①迟发性皮肤过敏反应试验，常为初筛试验。②T细胞及其亚群的检测，为主要的试验测定CD3、CD4、CD8 分化抗原进行分类鉴定。③E 玫瑰花结试验，现常用CD2 测定所代替。④淋巴细胞增殖反应试验，为体外免疫功能试验，方法有形态法和同位素法。⑤T细胞分泌产物功能测定，测定激活的T细胞和单个核细胞分泌的细胞因

螯合物)标记抗体或抗原，检测标本中的相应抗原或抗体的荧光免疫测定技术 酶免疫技术：是指利用酶的高效催化和放大作用与特异性免疫反应结合而建立的 一种标记免疫技术。

封闭：是指在抗原或抗体包被ELISA板后，用1％～5％牛血清白蛋白或5％～20％小牛血清等再包被，以防止非特异性吸附。

异相EIA：是指在酶免疫测定中，抗原抗体反应后，需分离游离的和与抗原(或 抗体)结合形成复合物的酶标记物，然后对经酶催化的底物显色程度进行测定，再推算

出样品中待测抗原(或抗体)的含量。

包被：是指将抗原或抗体固相化的过程。

均相酶免疫测定：是指抗原抗体反应平衡后，无需分离F和B，直接根据反应前 后酶活性的改变进行待检物质的测定。

肿瘤抗原: 肿瘤在发生、发展中产生的或过度表达的抗原物质。

肿瘤相关抗原：非肿瘤细胞所特有的，正常组织或细胞也存在的抗原，含量在细胞癌变时明显增高。

肿瘤特异性抗原：肿瘤细胞所特有的，正常组织或细胞不存在的抗原。

封闭因子:一种小分子的多肽,可存在于肿瘤患者的血清中。体外培养时,它可抑制非特异性致有丝分裂因子,如植物血凝素或刀豆素A对淋巴细胞的转化

移植(transplantation)：指健康细胞、组织或器官从其原部位移植到自体或异体的一定部位、用以代替或补偿机体所丧失的结构和功能的现代医疗手段。 移植抗原：代表个体特异性的由MHC编码的HLA是引起排斥反应的同种抗原

移植排斥反应(transplantation rejection)：针对移植抗原产生的引起移植物功能或受者机体损害的免疫应答。

宿主抗移植物反应(host versus graft reaction, HVGR)：宿主针对供体组织或细胞的HLA抗原产生的移植排斥反应

移植物抗宿主反应(graft versus host reaction, GVHR)：一定条件下移植物中的过客（免疫）细胞针对移植物产生的排斥反应。

免疫缺陷(immunodeficiency):由遗传因素或其他原因导致的免疫系统发育或免疫应答障碍而导致的一种或多种免疫功能不全.

免疫缺陷病:由免疫缺陷所致的各种临床综合特征的疾病. 获得性免疫缺陷综合征 (AIDS)：，由HIV感染引起，因CD4+T细胞质和量的缺失，导致细胞免疫功能严重缺陷，临床上以反复机会感染、恶性肿瘤和中枢神经系统退行性变为主要特征。

流式细胞术：是指借助流式细胞仪，精确、快速地对生物细胞的理化特性和生物学特性进行多参数定量分析，并对特定细胞群体分选的新技术。 细胞分选：是指从细胞群体中将选定的细胞分离出来。

荧光补偿技术：是指利用已知标准样品或根据细胞样品的生物学意义，合理设置各荧光信号之间的相互补偿值。 M蛋白:单克隆免疫球蛋白，是B淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖所产生的一种在氨基酸组成及顺序上十分均一的异常单克隆免疫球蛋白； 冷球蛋白: 一组低温下发生沉淀，加温后又复溶的Ig。 本-周蛋白（bence-Jones）:尿中游离的免疫球蛋白轻连。 免疫增殖病（immunoproliferative disease）：LC异常增殖引起的疾病.

重链病(heavy chain disease):突变的浆细胞产生异常增多的重链或质量不能与L链装配的 Ig重链，血清和尿中H链过剩导致的疾病。

轻链病：异常的LC产生大量的Ig的L链在肾脏和内脏组织，导致肾损伤和淀粉样病变的疾病。

自身免疫机体免疫系统对自身成分发生免疫应答的现象，为生理性免疫应答的一部分。

自身免疫病（ AID）因机体免疫系统对自身成分发生免疫应答而导致的组织损伤或功能紊乱，属于病理性免疫应答。

抗核抗体（ ANA）：抗核酸抗原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分[脱氧核糖核蛋白（DNP）、DNA、可提取的核抗原（ENA）和RNA等]作为靶抗原的自身抗体的总称。

类风湿因子（ RF）：自身免疫病人体内表达的抗自身变性IgG的IgM类抗体。 隐蔽抗原：指体内在解剖位置上某些与免疫系统隔绝的成分，如眼组织、精子等。当外伤、手术和感染等情况下，释放并与机体免疫系统接触可以引起免疫应答，导致自身免疫病。

超敏反应：又称为变态反应，是指机体对某些抗原初次应答后，再次接受相同抗原刺激时，发生的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异性免疫应答。 变应原：是指能够选择性地激活CD4＋Th2细胞及B细胞，诱导产生特异性IgE抗体应答，引起变态反应的抗原性物质。

皮试：用少量抗原注射、挑刺或划痕等方法注入到受试者皮肤，用于变应原的检测。 1.免疫防御功能异常可导致(感染)和(免疫缺陷)疾病。 2.抗原抗体反应的特点有 特异性、比例性 、可逆性

3.抗原抗体反应的温度一般以15～40℃为宜，最适温度37℃ 3．影响抗原抗体反应的环境因素主要有电解质、pH、温度

4．某些特殊的抗原抗体反应对温度有一些特殊的要求，如冷凝集素在4℃左右与红细胞结合最好20％ 以上反而解离。

5．抗原抗体的结合分子间的引力包括静电引力、 范德华引力、氢键引力和疏水作用力

2.间接凝集反应的类型包括正向间接凝集、反应反向间接凝集反应、间接凝集抑制

反应和协同凝集反应四种类型。

3参与凝集反应中的抗原称为（凝集原）抗体称为(凝集素)试验有(玻片法)(试管法)(玻片法)常用的直接凝集

4．在间接凝集反应中正向凝集反应是用(抗原)致敏载体以检测标本中相应的(抗体)而反向间接凝集反应是用(抗体)致敏载体以检测标本中相应(抗原)

5．间接抗球蛋白试验可用已知抗原型红细胞检测血清中的(不完全抗体)可用于输血前的(交叉配血)试验。

1．免疫沉淀反应是（可溶性抗原）与（相应抗体）特异性结合

2．棋盘格法（抗原 ）和（抗体）同时稀释，可一次完成（抗原）和（抗体）的滴定

3．单向琼脂扩散是待测抗原从含有定量（抗体）的（凝胶）内自由向周围扩散，抗原抗体特异性结合，在两者比例合适的部位，形成（沉淀环）。

4．Maneini曲线适用于大分子抗原的测定，在一定范围内，沉淀环随时间延长而扩大，抗原浓度与（扩散环直径的平方）呈线性关系，常用（普通）坐标纸作图。 5．Fahey曲线适用于小分子抗原的测定，在一定范围内，沉淀环随时间延长而扩大，沉淀环直径与（抗原浓度的对数）呈线性关系，常用（半对数）坐标纸作图。 6.双向琼脂扩散试验可对抗原或抗体的存在、含量和相对分子量进行分析，沉淀线靠近抗原孔指示（抗体含量）较大；靠近抗体孔则指示（抗原含量较高）；不出现沉淀线则表明（无对应的抗原和抗体）

7.免疫电泳是将（电泳）与（双向免疫扩散）相结合的一种免疫化学分析技术。 8.火箭电泳是（电泳）与（单向免疫扩散）相结合的免疫技术。 9.对流免疫电泳是（电泳）与（双向免疫扩散）相结合的免疫技术。 10.对流免疫电泳中，抗体流向负极，是因为（抗体分子量大）（电泳 ）速度小（电渗）速度。

1l.免疫浊度测定的基本原理是抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成（免疫复合物），使反应液出现（浊度），并可根据其推算出抗原或抗体的量。

12.根据Rayleigh方程，散射比浊法中的散射光强度与入射光波长成（反）比，与粒子的浓度和体积成（正）比。

13.速率散射比浊法是测定单位时间内免疫复合物形成的（最快时间段）的散射信号值，此时的散射信号最强，速率散射信号值最大。

14.免疫胶乳浊度测定的原理与透射比浊法相似。载体为大小适中、均匀的胶乳颗粒其直径应稍（小于）入射光波长目前多用（200）nm的胶乳颗粒。

15.免疫浊度测定的基本原则之一是反应体系中必须始终保持（抗体）过量。 16.凝胶内沉淀试验包括（单向扩散试验）和（双向扩散试验）抗原抗体最适比的基本测定方法为（抗原稀释法）和（抗体稀释法）。 1．标记免疫技术的示踪物有(酶）、(放射性核素)、(荧光素)、(化学或生物发光

剂)(胶体金 )

2．放射免疫技术可分为(放射免疫分析)和(免疫放射分析)两种基本类型。 3.采用125I制备标记物的基本原理是以放射性碘原子置换被标记物分子中(酪胺酸或酪胺残基)或(组胺残基)上的氢原子。

1.荧光免疫技术的主要类型包括(荧光抗体染色技术)（荧光免疫测定技术)。 2．荧光物质有(荧光素)和(其他荧光素物质)。

3．荧光抗体染色技术可分为(荧光免疫显微技术)和（流式荧光免疫技术)。

4．镧系稀土元素标记物制备的螯合剂有(多羧基酸类螯合剂)、(B-二酮体类螯合剂)、(BCPDA)和(菲洛林)

5．荧光免疫测定根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的与游离的荧光标记物而分为(均相)和(非均相)两种类型。

6．非均相荧光免疫测定法包括(时间分辨荧光免疫测定)（荧光酶免疫测定)。 7．均相荧光免疫测定法包括(荧光偏振免疫测)和（底物标记荧光免疫测定)。 8．荧光素标记抗体的方法有(搅拌标记)和(透析标记法)。

l.膜载体酶免疫测定技术的类型主要有(斑点-ELISA免疫渗滤试验)、(免疫层析试验)、(免疫印迹法)

3.酶免疫组织化学技术常用的酶有(HRP )、(AP )和(GOD )。

4．EIJSA方法类型主要有(双抗体夹心法)、(间接法)、(竞争法)和(捕获法)。 5．ELISA中三种必要试剂是(固相的抗原或抗体)(酶标记的抗原或抗体)(酶的反应底物)。

6．制备酶结合物常用的方法有(戊二醛交联法)和(过碘酸盐氧化法)。 7．在稀释液和洗涤液中加入(吐温一20)，可以去除非特异性吸附。

8．均相酶免疫测定技术的类型主要有(酶增强免疫测定技术)(克隆酶供体免疫分析技术)。

9．非标记抗体酶免疫组织化学技术的类型主要有(酶桥法)、(PAP法)、(双桥PAP法) (APAAP法)。

10. (SDS-PAGE), (蛋白质转运)和(酶免疫测定)三项技术结合而成形成免疫印迹法。

11.常用于HRP标记抗( 戊二醛交联法 )和( 过碘酸钠法 )。 1.不受位阻效应影响,更易发挥生物素活性作用的是（BCNHS）。

2.用于标记蛋白质醛基的,适用范围较BHZ宽的活化生物素是（BCHZ）。

3.在一定波长的光照射下,光敏基团可转变为芳香基硝基苯而直接与腺嘌呤N7位氨基结合的是（光生物素）。

4.生物素化蛋白质衍生物有二类,一种是（生物素化的大分子生物活性物质）,另一种是（标记材料结合生物素后制成的标记物）。

5.用于亲和素标记的物质中,最常用的是（酶）, （异硫氰酸荧光素(FITC)）和（胶

体金 ）。

1.用丙酮做固定剂的抗原是（免疫球蛋白）；用1%聚甲醛做固定剂的抗原是（激素）；用10%甲醛做固定剂的抗原是（类脂质）；用95%乙醇做固定剂的抗原是（蛋白质）；用四氯化磺做固定剂的抗原是（酶）。

2.免疫染色对特殊标本的进一步处理常用 （冰冻切片）和（石蜡切片）法。 3.免疫组化染色后，阳性细胞的染色分布有三种类型，分别是（胞质型）、（细胞核型）和（细胞膜表面型）。

4.酶免疫组化技术中最常用的酶有（辣根过氧化物酶）（碱性磷酸酶）及（葡萄糖氧化酶）。

5.免疫电镜标本的制备主要有（非包埋法免疫染）（包埋前免疫染色）（包埋后免疫染色）

6.免疫组化中最常用的制片方法是（蛋白酶消化法）和（非特异吸附法）。

1．金免疫技术主要有(金免疫组织化学染色技术)和(金免疫测定技术)，前者包括(免疫金(银)光镜染色技术)和(免疫金电镜染色技术)；后者包括(斑点金免疫渗滤试验)和(斑点金免疫层析试验)等。

2．免疫金是指(胶体金与抗原(抗体))的结合物，在免疫组织化学染色技术中，习惯上称之为(金探针)

3．斑点金免疫层析试验方法学类型有(双抗体夹心法)(竞争法)和(间接法)。 4．渗滤装置是斑点金免疫渗滤试验试剂盒中主要组成部分之一，由(塑料小盒)、(吸水垫料 )和(点加了抗原或抗体的硝酸纤维素膜片)三部分组成。

5．斑点金免疫渗滤试验试剂盒由(渗滤装置)(胶体金标记物)和(洗涤液)组成。 6．用于电镜的免疫金法可分为(包埋前染色)和(包埋后染色)两大类。 7．免疫金电镜染色技术包括(标本包埋)、(免疫组化染色)两个主要步骤。

8．为了消除待测血清标本中(非特异性IgG)的干扰，斑点金间接免疫层析法测抗体常设计成（反流,免疫层析法 ）

1．PBMC包括（淋巴细胞）和（单核细胞 ）。

2．在反相溶血空斑试验中每一个空斑代表一个（分泌Ig的细胞）。 3．B细胞表面特异的标志是（SmIg）。

4．常用的测定淋巴细胞活力的方法是（台盼蓝染色法）。

5．淋巴细胞转化情况的判定方法有（形态学方法）、（H—TdR掺入法）和（ MTI\检测法 ）。

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6．淋巴细胞转化试验应用的同位素是（H ），细胞毒试验应用的同位素是（Cr） 7．分离外周血白细胞常用的方法是（自然沉降法）和（聚合物加速沉降法）。 8．去除白细胞悬液中残留红细胞的常用方法有（无菌蒸馏水低渗裂解法）和（0．83％氯化铵处理法）。

9．去除单个核细胞悬液中单核细胞的常用方法有（黏附去除法）和（羰基铁粉吞

噬去除法）。

10．检测T细胞数量的花环技术包括（E花环试验）（葡萄球菌花环法）和（抗体致敏红细胞花环法 ）；检测B细胞数量的花环技术主要有（EA花环试验）和（EAC花环试验）。

11.淋巴细胞和单核细胞的密度为 （1.077+0.001）。

12．外周血经Ficoll分离液离心后从上到下分为（血清）（PBMC ）（粒细胞、红细胞）层。

1．活化的TH1细胞产生的细胞因子主要有（IL2 ）（IFN）和（IL12 ），而TH2细胞主要产生的细胞因子为（IL4）（IL5）和（IL10）。

2.细胞因子常用的检测法包括（生物学检测法）（免疫学检测法）和（分子生物学检测法 ）。

3.ELISA 测定法测定细胞因子常用（双抗夹心法）。

1．补体参与的反应试验类型包括(免疫溶血试验)(补体结合试验)、(补体依赖的细胞毒验 )和(免疫黏附试验).

2．参与补体结合试验的试剂可分为(指示系统)和(反应系统)两个系统。 3．Ⅲ型变态反应疾病患者的血清中补体水平(降低)。 4．补体的最佳保存温度是(一20℃以下)。

5．CH50试验中有（ 绵羊红细胞)(溶血素 )和(人血清 )参与反应。 1．免疫球蛋白根据重链的不同可分为（IgM），(IgG ），（IgA），(IgE）和 （IgD ） 2．免疫固定电泳的特点是：（周期短）（敏感性高）(分辨清晰）（结果易于分析） 3．Ig 中k/λ比率正常范围是（1.2～2.4）

1．肿瘤抗原可分为（ 肿瘤相关抗原）和（肿瘤特异性抗原）两类。

2．肿瘤标志物检测的临床意义，归纳起来有（早期普查）（肿瘤诊断 ）和（监测病情）等 3．肿瘤标志物的检测对临床某些肿瘤有重要辅助诊断价值，如：AFP可辅助诊断（肝癌）可辅助诊断（结肠癌 ）PSA可辅助诊断（前列腺癌） 。

4．细胞免疫是抗肿瘤免疫的重要机制，参与抗肿瘤免疫的细胞主要有（T细胞 B细胞 NK 细胞 树突状细胞 )等。

5．根据肿瘤抗原分布的范围，可将其分为（肿瘤特异性抗原）和(肿瘤相关抗原）两大类。

1．宿主抗移植物反应根据临床出现症状情况一般分为（超急性排斥），（急性排斥 ）和（慢性排斥）三类。

2. ( HLA)是不同个体间进行器官或组织移植时发生排斥反应的重要成分。 3. HLA三类分子中Ⅰ、Ⅱ类分子是能发生移植排斥反应的首要抗原尤其是（HLA-DR ）位点。

4. HLA-A、B、C和HLA-DQ、DR抗原采用( 补体依赖的微量细胞毒)试验检测

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