流式检测上机前细胞处理流程与注意事项

更新时间:2023-05-01 00:04:01 阅读量: 综合文库 文档下载

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流式检测细胞周期与凋亡样品处理流程

1.胰蛋白酶消化法收集细胞,做成单细胞悬液

2.1000r/min离心5min,收集沉淀。

3.沉淀用PBS洗2次,1000r/min离心5min,收集沉淀。

4.细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬,4℃过夜。即可送检。

备注:1.每个细胞样品细胞量需达到106(细胞沉淀要打散,避免细胞聚集),细胞量少可能测不出结果,或结果不太准确。

2.样品可在-20℃保存一个月

流式检测细胞DNA倍体样品处理流程

1.胰蛋白酶消化法收集细胞,做成单细胞悬液

2.1000r/min离心5min,收集沉淀。

3. 沉淀用PBS洗2次,加入相应种属的淋巴细胞或鸡红细胞做为内参,内参与

预检测细胞的比例为1:3

4. 1000r/min离心5min,收集沉淀。

5. 细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬,4℃过夜。即可送检。

备注:1.每个细胞样品细胞量需达到106(细胞沉淀要打散,避免细胞聚集),细胞量少可能测不出结果,或结果不太准确。

2.样品可在-20℃保存一个月

检测胞内蛋白上机前细胞处理流程

1.收集实验处理好的细胞,用PBS洗2次,2%多聚甲醛固定15min。

2.离心弃掉多聚甲醛,再用70%的冰乙醇固定过夜(4℃)。

3.离心弃掉乙醇,PBS洗一遍,加破膜剂0.5%TritonX-100 50ul/106个细胞

15min。

4.直接在0.5%TritonX-100中加一抗室温孵育30min,离心,用PBS洗一次,

加荧光标记二抗(需进口二抗,国内的效价比较低效果不好),总体系为100ul,总体系中应含0.25%(体积分数)的TritonX-100,室温孵育30min。

5.也可以直接加FITC直标的一抗。

6.离心,用PBS洗一次,用2%的多聚甲醛固定,4℃存放待测。

备注:1. 市面上的多聚甲醛多为4%的,可用PBS稀释。如果用两步标记,应做不加一抗,只加二抗的对照管

2. 未染色的新鲜标本贮存方法如下:10%二甲基亚砜,90%小牛血清,5

×106~1×107细胞在-70℃过夜,然后置液氮中可长期保存。

3.免疫染色未经固定的标本在4℃可保存48h。若需存放时间较长、或标本

具有传染性,应该用固定剂固定。常用的固定剂配方是:的多聚甲醛和

PBS或0.8%的生理盐水配成p H7.2的固定液;固定方法是:将经免疫

荧光染色的细胞离心沉淀,再加入固定液混匀,放在4℃温度保存。一

般来说,经固定处理的标本保存1周至1个月,多数样品的阳性细胞群

体比例及荧光强度增色能保持在正常范围之内。

4.每个细胞样品细胞量需达到106,细胞量少可能测不出结果,或结果不

太准确

检测细胞转染率上机前细胞处理流程

1.用胰蛋白酶消化法收集转染后的细胞,用PBS洗2次。

2.直接用2%多聚甲醛固定,4℃存放,待测。

备注:每个细胞样品细胞量需达到106,细胞量少可能测不出结果,或结果不太准确。

本文来源:https://www.bwwdw.com/article/dn9e.html

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