流式检测上机前细胞处理流程与注意事项

流式检测细胞周期与凋亡样品处理流程

1.胰蛋白酶消化法收集细胞，做成单细胞悬液

2.1000r/min离心5min，收集沉淀。

3.沉淀用PBS洗2次，1000r/min离心5min，收集沉淀。

4.细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬，4℃过夜。即可送检。

备注：1.每个细胞样品细胞量需达到106（细胞沉淀要打散，避免细胞聚集），细胞量少可能测不出结果，或结果不太准确。

2.样品可在-20℃保存一个月

流式检测细胞DNA倍体样品处理流程

1.胰蛋白酶消化法收集细胞，做成单细胞悬液

2.1000r/min离心5min，收集沉淀。

3. 沉淀用PBS洗2次，加入相应种属的淋巴细胞或鸡红细胞做为内参，内参与

预检测细胞的比例为1：3

4. 1000r/min离心5min，收集沉淀。

5. 细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬，4℃过夜。即可送检。

备注：1.每个细胞样品细胞量需达到106（细胞沉淀要打散，避免细胞聚集），细胞量少可能测不出结果，或结果不太准确。

2.样品可在-20℃保存一个月

检测胞内蛋白上机前细胞处理流程

1.收集实验处理好的细胞，用PBS洗2次，2%多聚甲醛固定15min。

2.离心弃掉多聚甲醛，再用70%的冰乙醇固定过夜（4℃）。

3.离心弃掉乙醇，PBS洗一遍，加破膜剂0.5%TritonX-100 50ul/106个细胞

15min。

4.直接在0.5%TritonX-100中加一抗室温孵育30min，离心，用PBS洗一次，

加荧光标记二抗（需进口二抗,国内的效价比较低效果不好），总体系为100ul，总体系中应含0.25%（体积分数）的TritonX-100，室温孵育30min。

5.也可以直接加FITC直标的一抗。

6.离心，用PBS洗一次，用2%的多聚甲醛固定，4℃存放待测。

备注：1. 市面上的多聚甲醛多为4%的，可用PBS稀释。如果用两步标记，应做不加一抗，只加二抗的对照管

2. 未染色的新鲜标本贮存方法如下：10%二甲基亚砜，90%小牛血清，5

×106～1×107细胞在-70℃过夜，然后置液氮中可长期保存。

3.免疫染色未经固定的标本在4℃可保存48h。若需存放时间较长、或标本

具有传染性，应该用固定剂固定。常用的固定剂配方是：的多聚甲醛和

PBS或0.8%的生理盐水配成p H7.2的固定液；固定方法是：将经免疫

荧光染色的细胞离心沉淀，再加入固定液混匀，放在4℃温度保存。一

般来说，经固定处理的标本保存1周至1个月，多数样品的阳性细胞群

体比例及荧光强度增色能保持在正常范围之内。

4.每个细胞样品细胞量需达到106，细胞量少可能测不出结果，或结果不

太准确

检测细胞转染率上机前细胞处理流程

1.用胰蛋白酶消化法收集转染后的细胞，用PBS洗2次。

2.直接用2%多聚甲醛固定，4℃存放，待测。

备注：每个细胞样品细胞量需达到106，细胞量少可能测不出结果，或结果不太准确。

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