＂小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验＂方法的改进与研究

安徽农学通报， An h u i A . S c i . B u l 1 . 2 0 1 3, 1 9 ( 2 3 )

1 7

“小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验"方法的改进与研究顾曙余梁鲁晓雪 李莲张雪茜李静曹祥荣(南京师范大学生命科学学院，江苏南京 2 1 0 0 2 3 )

摘

要：连续3 d给小鼠腹腔注射淀粉液，诱导并激活巨噬细胞，使用鱼红细胞为吞噬物，替代细胞实验教材所用的

鸡红细胞、羊红细胞，探索和改进实验方法，以便更清晰、有效地观察， J、鼠腹腔巨噬细胞对外来异物的吞噬作用。取鼠腹腔液制备涂片并固定，用G i e ms a染色法进行染色，显微观察巨噬细胞对鱼红细胞的吞噬作用。结果显示，采

用鱼红细胞作为吞噬物，细胞染色清晰，吞噬结果明显，可清晰显示大量吞噬鱼红细胞的巨噬细胞，吞噬百分率高， 便于实验观察和计数，有助于学生对巨噬细胞吞噬作用的理解和掌握。关键词：巨噬细胞；鱼红细胞；实验方法；吞噬

中图分类号

G 6 4 2 . 0

文献标识码

A

文章编号

1 0 0 7— 7 7 3 1 ( 2 0 1 3 ) 2 3 - 1 7 - 0 2

Ex pe r i me n t I m pr o v e me nt f o r t he Pha g oc y t o s i s o f Mo us e Pe r i t o ne a l M ac r o pha g eGu S h u y u e t a 1 .

( C o l l e g e o f L i f e S c i e n c e s, N a n j i n g N o r ma l U n i v e r s i t y, N a n j i n g 2 1 0 0 2 3, C h i n a ) A b s t r a c t: T o i m p r o v e e x p e i r m e n t a l m e t h o d s i n t h e p h a g o e y t o s i s o f p h a g o c y t e s, m i c e w e r e i n j e c t e d w i t h i f s h r e db l o o d c e l l t h r e e t i me s i I 1 t h r e e c o n s e c u t i v e d a y s . i n s t e a d o f c h i c k e n o r s h e e p r e d b l o o d c e l 1 .T h e n t h e c e l

i a c l i q - u i d wa s s me a r e d a n d f i x e d o n t h e s l i d e s, wh i c h w e r e s t a i n e d w i t h Gi e ms a s t a i n i n g t o o b s e r v e t h e r e s u l t s wi t h t h e mi c r o s c o p e .T h e r e s u l t s h o w e d t h a t u s i n g is f h r e d b l o o d a s f o r e i g n ma t e ia r l s, he t mo r p h o l o g i c l s a t r u c t u r e o fp h a g o c y t e s, c e l l n u c l e u s, p l a s ma a n d p h a g o c y t o s e d f o r e i g n ma t t e r c o u l d b e d i s t i n g u i s h e d mo r e q u i c k l y, c l e a r a n d e f -

f e c t i v e l y .Cl e a r mo r p h o l o g i c a l s t r u c t u r e a n d o b v i o u s c o l o u r c h a r a c t e is r t i c s c a n b e o b s e r v e d .T h i s me t h o d i S u s e f u l f o r s t u d e n t s f u l l y u n d e r s t a n d i n g t h e p h a g o c y t o s i s . Ke y wo r d s: Ma c r o p h a g e s; F i s h r e d b l o o d c e l l; Ex p e ime r n t a l me t h o d s; P h a g o c y t o s e

高等动物体内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等多具有吞噬功能，均由骨髓干细胞分化而来，是机体非特异性免疫功能的重要组成部分。当病原微生物或其他异物侵入机体时，由于巨噬细胞具有趋化性，便向异物处聚集，巨噬细胞可将之内吞入胞质，形成吞噬泡，然后在胞内与溶酶体融合，将异物消化分解，这在机体非特异性免疫中具有重要意义。静息的巨噬细胞吞噬功能低下，只有活化状态下的巨噬细胞才具有较强的吞噬能力。现在所用细胞实验教材- - 1所编列吞噬实验

大多用鸡红细胞、羊红细胞、墨水、杆菌】、荧光

备用。

1 . 1 . 2 3%可溶性淀粉溶液的制备

称取可溶性淀粉 3 g,溶

于1 0 0 mL生理盐水中，混匀后 1 2 1￣ C高压灭菌 2 0 mi n备用。1 . 2方法

1 . 2 . 1 小鼠腹腔巨噬细胞的诱导

在实验前 3 d,连续 3 d定

时给小鼠腹腔注射 3%淀粉液。注射部位在腹部中央，持针以4 5 o斜角刺入，注意勿伤及内脏或注入肠内，注射后揉动腹部，分散淀粉粒，并观察注射后动物状态，以免小鼠死亡。

微球等作为吞噬物，本文首次使用鱼血细胞作为吞噬物，对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬效果进行了探索和研究，以期避免使用家禽作为实验材料，并进一步完善了实验方法。

1 . 2, 2鱼红细胞的注射及腹腔液的收集

实验时，小鼠腹腔

注射 1 0%鱼红细胞悬液 l mL,轻按小鼠腹部，使悬液分散。 6 0 m i n后，用颈椎脱臼法处死小鼠。将小鼠腹面朝上，于腹部中央用有齿尖镊夹起皮肤层，用剪刀剪一环口，撕开腹部皮肤，充分暴露腹膜。此时，向腹腔注射 l mL生理盐水，并轻

1材料与方法1 . 1材料

1 . 1 . 1鱼血红细胞稀释液的制备

从市场上购买鲫鱼，用注

揉腹部片刻。随后用剪刀剪开腹膜成一纵形口，用镊子将两边皮肤夹起来，以防腹腔液流出。把内脏推向一侧后，可用不装针头的注射器或吸管吸取腹腔液，小心操作，以免腹腔内血管破裂，吸取到小鼠腹腔外周血细胞。

射器尾静脉采血，或解剖后从鱼血窦或心脏抽取鱼血。抽取的鱼血，不添加抗凝剂，直接用无血清 L 1 5培养基 ( G i b c o, i n .v i t r o g e n C o r p o r a t i o n ),稀释 1 0倍。配成 1 0%鱼血红细胞悬液基金项目：国家基础科学人才培养基金( J 1 1 0 3 5 0 7 )。

作者简介：顾曙余 ( 1 9 7 0一 ),男，博士，高级实验师，从事细胞生物学的教学与研究工作。

收稿日期： 2 0 1 3— 1卜2 8

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/dcg1.html