有关PCR习题

一、选出一个最符合题意的答案（最佳答案）。 1．以下哪种物质在PCR反应中不需要（ ）

A．Taq DNA聚合酶 B．dNTPs C．Mg2+ D．RNA酶 E．合适pH缓冲液 2．以下哪种酶可耐高温（ ）

A．Taq DNA聚合酶 B．Hind Ⅲ C．T4连接酶 D．RNA酶 E．Klenow片段 3．PCR反应正确过程应为（ ）

A．退火→变性→延伸 B．变性→退火→延伸 C．退火→延伸→变性 D．变性→延伸→退火E．延伸→变性→退火

4． PCR技术的本质是（ ）

A． 核酸杂交技术 B． 核酸重组技术C． 核酸扩增技术 D． 核酸变性技术 E． 核酸连接技术 5．Taq DNA聚合酶酶促反应最适温度为（ ）

A．37℃ B．50℃～55℃ C．70℃～75℃ D．80℃～85℃ E．94℃～95℃ 6．能在细胞内进行PCR扩增的PCR仪为（ ）

A．普通PCR仪 B．梯度PCR仪 C．原位PCR仪 D．荧光PCR仪 E．实时PCR仪 7．在下列哪种PCR仪扩增样品可以了解样品中DNA原始拷贝数（ ）

A．普通PCR仪 B．梯度PCR仪 C．原位PCR仪 D．荧光实时PCR仪E．定性PCR仪 8．PCR基因扩增仪最关键的部分是（ ）

A．温度控制系统 B．荧光检测系统 C．软件系统 D．热盖 E．样品基座 9．“位置的边缘效应”是指（ ）

A．温度的准确性欠佳 B．温度的均一性欠佳 C．边缘升降温速度快 D．边缘升降温速度慢 E．梯度模式和标准模式温度不一致

10．PCR扩增仪升降温速度快有很多优点，以下哪一项应除外（ ）

A．缩短反应时间 B．提高工作效率 C．消除位置的边缘效应 D．缩短非特异性反应时间 E．提高反应特异性

11、PCR技术扩增DNA,需要的条件是( )

①目的基因 ②引物 ③四种脱氧核苷酸 ④DNA聚合酶等 ⑤mRNA ⑥核糖体 A、①②③④ B、②③④⑤ C、①③④⑤ D、①②③⑥

12、镁离子在DNA或RNA体外扩增反应的浓度一般为（ ）

A、0.3-1mmol/L B、0.5-1mmol/L C、0.3-2mmol/D、0.5-2mmol/L

13、多重PCR需要的引物对为（ ） A、一对引物 B、半对引物 C、两对引物 D、多对引物

14、PCR是在引物、模板和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应，其特异性决定因素为（ ）

A、模板 B、引物 C、dNTP D、镁离子

15、在PCR反应中，下列哪项可以引起非靶序列的扩增的扩增( ) A、TaqDNA聚合酶加量过多 B、引物加量过多 C、A、B都可 D、缓冲液中镁离子含量过高 16、PCR技术是一种DNA的扩增技术。在一定条件下，加入模板DNA、DNA聚合酶、dATP、dCTP、dGTP、dTTP可以实现DNA的扩增。据此判断不合理的是 A．dATP在DNA扩增中可以提供能量，同时作DNA合成的原料 B．dTTP完全水解后产物有胸腺嘧啶、磷酸、核糖

C．DNA扩增过程未加解旋酶，可以通过先适当加温的方法破坏氢键，使模板DNA解旋 D．CTP水解脱去两个磷酸基后是组成RNA的基本单位之一

17、多聚酶链式反应（PCR）是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历下述三十多次循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。下列有关PCR过程的叙述中不正确的是：（ ）

A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现

B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成

C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸 D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高

18、下列有关PCR技术的叙述，不正确的是：（ ） A．PCR技术经过变形、复性、延伸三个阶段 B．PCR技术可用于基因诊断，判断亲缘关系等

C．PCR技术需在体内进行 D．PCR技术是利用碱基互补配对的原则

19、在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸460个）放入PCR仪中扩增4代，那么，在PCR仪中放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数至少应是 A．640 B．8100 C．600 D．8640

20、对禽流感的确诊，先用PCR技术将标本基因大量扩增，然后利用基因探针，测知待测标本与探针核酸的碱基异同。下图P表示禽流感病毒探针基因在凝胶的电泳标记位置，M、N、Q、W是四份送检样品在测定后的电泳标记位置， 哪份标本最有可能确诊为禽流感 （ ）

A．M B．N C．Q D．W

21、某考古学家在西伯利亚泰加林地区的冰中，发现了一种冰冻的已灭绝的巨大动物的肌肉。他想了解该巨型动物的DNA与现今印度大象的DNA的相似性，于是做了如下检测工作，其中正确的操作步骤及顺序是

①降低温度，检测处理后形成的杂合DNA双链区段 ②通过PCR技术扩增巨型动物和大象的DNA ③把巨型动物的DNA导入大象的细胞中 ④在一定的温度条件下，将巨型动物和大象的DNA水浴共热 A.②④③ B.②④③① C.③④① D.②④① 22、 PCR的发明人是

A. Mullis B. 牛顿 C.Kenny D. James

23、 退火温度一般比引物的熔解温度（Tm）低多少合适 A. 7℃ B. 10℃ C. 5℃ D. 2℃ E. 20℃ 24、引物的最佳浓度为

A. 0.1-0.5 μM B. 1-2μM C. 5-10μM D. 100μM E. 200μM 25、专门用于制备单链DNA的PCR技术是

A、对称PCR B、反向PCR C、RT－PCR D、不对称PCR E、嵌套PCR 26、PCR变性温度一般为

A． 96℃ B. 85℃ C. 72℃ D. 55℃ E. 100℃

27、pre-mRNA 内含子的5'-末端一般为 （ ）A、AU B、GU C、AG D、CG E、AC 28、在大肠杆菌的DNA损伤修复时，对于填补缺口可能最重要的酶是

A、DNA聚合酶Ⅰ B、DNA聚合酶Ⅱ C、DNA聚合酶Ⅲ D、RNA聚合梅 E、以上都不是 29、 可用于扩增未知序列的PCR方法是（ ） A、 对称PCR B、 反向PCR C、 RT-PCR D、不对称PCR E、 嵌套PCR 30、在聚合酶链反应（PCR）中最常用的DNA聚合酶是 A．T4 DNA连接酶 B．T7 DNA聚合酶 C． Taq DNA聚合酶 D．E. coli DNA聚合酶I E．E. coli DNA聚合酶II 31、下列关于PCR引物设计的说法错误的是（ ）

A．设计引物时应考虑使3’端引物和5’端引物具有相似的Tm值 B．每条引物自身不应有稳定的发夹结构

C．上下游引物之间不宜形成稳定的二聚体结构 D．引物的5’和3’端必须和模板严格配对结合 E．引物与非特异扩增区的序列无同源性

32、Taq DNA聚合酶可以不依赖模板在dsDNA的3’末端加上一个碱基为（ ） A. G B. A C. T D. C E. I

33．PCR反应中，所设计引物的长度一般为（ ）

A．5～10核苷酸 B. 15～30核苷酸 C. <50个核苷酸 D.长度任意 E. 以上答案均不对 34．引物设计时G＋C含量在引物中一般占（ ）

A. 20～40﹪ B. 30～60﹪ C. 45～55﹪ D.越高越好 E.含量随意 35．以下说法错误的是（ ）

A引物中的碱基组成应该尽可能的随机分布。 B 引物自身不应该存在互补序列

C 设计引物时应考虑使3‘端引物和5‘端引物具有相似的Tm值 D 引物的5‘和3’端必须和模板严格配对结合

E 引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70﹪ 36．下列说法正确的是（ ）

C. PCR反应常用的缓冲液为10－50mmol/L的Tris-HCl（室温 PH 8.3－8.8） D. 10mmol/L的KCl能促进引物的退火 E. 加入的BSA有利于破坏模板的二级结构 F.二甲基亚砜有利于保护TaqDNA酶的活性。 E. Mg2+能降低Taq DNA聚合酶的活性。

37. TaqDNA聚合酶活性需要以下哪种离子（ c ） A．K+ B. Na+ C. Mg2+ D. Ca2+ E. Cl-

38．适用于DNA序列中单个碱基突变的检测的方法是：( d ) A．筑巢PCR B. 多重PCR C. 锚定PCR D. LCR

39．以下哪种PCR技术广泛应用于组织胚胎学和肿瘤学的研究（ a ） A．原位PCR B．差异显示PCR C．不对称PCR D．反向PCR

40.已知一段设计好的引物的序列为GTGGATCCATGGCTCCTCTGAAGATTC,其Tm值为（ A. 78 B. 80 C. 82 D. 84 E. 无法计算 41．以下关于dNTP的说法错误的是（ ）

B.dNTP具有较强的酸性，使用时应将pH调至7.0-7.5

C.PCR反应中，四种dNTP必须按比例配制，以减少反应的错配率。 D.dNTP的浓度过高会增加碱基的错配率

E.dNTP的浓度低，反应速度下降，但特异性提高

42. TaqDNA聚合酶可以不要模板在ds DNA的末端加上一个( )碱基. A. dGTP B. dCTP C. dATP D. dTTP 43. 有关PCR的描述哪个不对( ) A.是一种酶促反应

B.引物决定扩增的特异性 C.扩增的对象是DNA序列 D.扩增的对象是氨基酸序列 44. 催化PCR的酶是 ( ) A.RNA聚合酶 B.DNA聚合酶 C.Taq DNA聚合酶

）D.反转录酶

45. PCR产物具有特异性是因为( ) A.Taq DNA酶保证了产物的特异性 B.合适的变性,退火,延伸温度 C.选择特异性的引物 D.引物的Tm值不同.

46．LCR的说法正确的是 ( ) A.体系中采用DNA聚合酶 B.须设计一对引物

C.反应需经过变性,复性,连接

D. LCR中,酶将dNTP加到引物的3-OH端 E. LCR具有高度敏感性 二、多项选择题

1．下列关于退火温度说法正确的是（ ） A. 合适的退火温度应低于引物Tm值5℃左右。 B. 引物与模板的退火温度一般在45－55℃之间

C. 在Tm值允许的范围内，选择偏低的退火温度可以提高PCR反应的特异性。 D. 退火时间至少需要一分钟。

2．进行PCR实验时以下措施有助于防止污染和结果的假阳性（ ） B.隔离不同的操作区

C.分装试剂，减少重复取样所致的污染 D.严格实验操作 E.设立实验对照

3．适用于扩增3‘或5‘端未知序列的PCR技术是（ ） A．反向PCR B. 锚定PCR C. 多重PCR D.不对称PCR 4． 以下关于PCR技术应用说法正确的是（ ）

B.筑巢PCR和共享引物PCR有利于增强PCR反应的特异性，适用于模板含量极少的样品的检测 C.不对称PCR可以大量制备单链DNA，可用于DNA的序列测定 D .彩色PCR适用于基因诊断和自动化DNA序列测定 E .定量PCR可用于基因表达和调控的研究

F.差异显示PCR可用于筛选和克隆受发育，突变等各种因素影响下差异表达的基因 5. 关于引物设计说法正确的是（ ）

B.为保证PCR反应的特异性，所设计的引物长度一般>30个核苷酸 C.引物设计时G＋C含量在引物中一般为45～55﹪

D.按经验，引物自身存在的连续互补序列一般不超过3个碱基 E.两个引物之间不应存在互补序列，尤其避免3‘端的互补重叠 F.引物的3‘端可以游离而不影响PCR反应的进行 6. 以下关于PCR的说法正确的是（ ） A.PCR的模板可以是DNA也可以是RNA B.PCR的模板必须从组织细胞中分离出来

C.PCR反应的特异性取决于引物和模板DNA的结合位点。 D.PCR反应初期，目的DNA片断的增加呈指数扩增。 E.PCR反应一般需要含102－105拷贝的模板 7．以下关于PCR反应条件错误的是（ ）

B.PCR缓冲液中加入二甲基亚砜有利于破坏模板的二级结构，提高反应的特异性。

C.Mg浓度过高会降低TaqDNA酶的活性，Mg浓度过低又会使酶催化非特异性扩增增强。

D.4种dNTP应以等摩尔浓度配制，以减少错配误差。 E.引物浓度一般为0.5-1umol/L

8. PCR反应时应设立哪种对照（ ） A.阴性对照 B.阳性对照 C.试剂对照

D.以上答案都正确

9. 逆转录反应体系包括（ ） B. RNA模板，四种dNTP C. RNA酶抑制剂 D.合适的缓冲液体系 E.逆转录酶

F.寡聚胸腺嘧啶核苷酸引物

10. 有关PCR的模板说法正确的是 ( ) A.模板可以是DNA也可以是RNA

B.大多数PCR反应中对DNA模板纯度要求不高 C.模板用量低

D.标本处理的基本要求是除去杂质

11. 以下有关RT-PCR反应的说法你认为正确的有( ) A. 反应体系一般有20μl

B.反应体系中有缓冲液, 四种dNTP, MgCl2, DTT, 牛血清白蛋白, Oligo(dT)引物RNA模板和逆转录酶 C.逆转录于42℃进行,随后即进行PCR

D. RT-PCR的最终反应过程依然是以DNA为模板的PCR反应 12. PCR的产物累积的特征是( ) B.反应初期,目的DNA片断呈指数扩增

C. PCR进行到一定时间出现反应中的停滞效应

D.到达平台期的的PCR循环数取决于反应体系中酶的耗竭程度 E. PCR平台期的出现多数不可避免

F.到达平台期时若扩增目的DNA片断不足,可继续加入模板,酶和缓冲液进行PCR反应 13. 有关Mg2+在PCR中的作用说法不正确的是( ) A. Taq DNA 酶的活性维持需要Mg2+

B. Taq DNA酶的活性与反应体系中的Mg2+总浓度有关 C. Mg2+过低,酶催化非特异性扩增增加 D. Mg2+过高会降低酶的活性

E.总量应低于dNTP的量, 常用1.5mmol/L 14. PCR中使用的底物dNTP应该是( ) A.使用前应将pH值调至7.0-7.5

B. dNTP浓度高可以加快反应速度,但却增加了出错率 C.降低反应速度可以提高反应特异性

D. PCR中, 4种 dNTP必须按一定比例配制

E. Mg2+会与dNTP结合,应注意二者浓度之间的关系 15. Taq DNA酶的特点是( ) A. 75-80℃时具有最高的聚合酶活性 B.活性的维持需要Mg2+的参与

C. Taq DNA酶和klenow片断一样具有校正功能 D. Taq DNA酶的忠实性很高

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