霉菌的形态观察 - 图文

山东大学实验报告 年 月 日

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霉菌的形态观察

一. 实验目的

1．掌握配制马铃薯培养基（PDA）的一般方法。 2．学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。

3．了解并掌握四类霉菌（根霉、毛霉、曲霉、青霉）的基本形态。

二.实验原理 1.霉菌

霉菌是可产生复杂分枝的菌丝体，其菌丝分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。

霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约 3～10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。本实验采用毛霉、青霉，曲霉，根霉四种常见的霉菌作为菌种进行观察。 2.小室培养法

观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本次实验采用载玻片培养观察法（小室培养法）。 用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，沿琼脂边缘接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期的培养物。

三．实验器材 1.菌种

曲霉（Aspergillus sp.），青霉（Penicillium sp.），毛霉（ Mucor sp. ）和根霉（Rhizopus sp.）培养48h的马铃薯琼脂（PDA）斜面培养物。 2.培养基及试剂

马铃薯琼脂（PDA），20%甘油（无菌），乙醇。 3.仪器及其它用品

无菌操作台，解剖刀，镊子，无菌吸管，U型玻璃棒，普通光学显微镜，擦镜纸，绸布，酒精灯，载玻片，接种针，培养皿等。

四．操作步骤

1. 培养基的配制

按附录所示配方称取PDA各组分，先将马铃薯去皮，切成小块称取20g煮沸

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20min，然后先用1层纱布滤去未溶解的固体，再用6层纱布过滤，将滤液体积用无菌水调至100mL，然后再加入糖及琼脂，加塞后用牛皮纸包好，准备灭菌。 2. 培养基及装置的灭菌 （1）灭菌准备 准备12个平皿，在其中10个平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一U形玻棒，其上放一洁净载玻片和三块盖玻片，盖上皿盖后再与另外2个空平皿一起用牛皮纸包好；在100mL锥形瓶中用甘油配制20%的甘油，加塞包好；最后取2mL移液管两支并用牛皮纸包好。

（2）灭菌

将上述用牛皮纸包好的仪器与试剂连同配好的PDA培养基一并放入灭菌锅中110℃灭菌20~30min（由于培养基中有葡萄糖，为防止由于高温而使糖发生糊化而变质，灭菌温度不宜过高）。 3. 琼脂块制备

分别取已灭菌并溶化冷却至约50℃的马铃薯琼脂培养基6～7mL 注入两个灭菌空平皿中，使之凝固成薄层。在两个凝固后的平板背部用记号笔画下约1×1cm的方格，通过无菌操作，用解剖刀沿画下的方格线将其切成方形的琼脂块。（注：解剖刀使用前应先在酒精中浸泡，然后在酒精灯上灼烧，冷却后再进行切割操作） 4. 接种

在无菌操作台上，先用镊子将载玻片放于U型玻璃管上，然后用解剖刀取一小块儿琼脂块，置于载玻片上，用接种环分别从斜面培养物上挑取很少量的4种菌的孢子，分别接种于培养小室中琼脂块的边缘上，用无菌镊子将盖玻片覆盖在琼脂块上。最后用移液管在培养小室中的圆滤纸上加2mL 灭菌的20 %的甘油（用于保持平皿内的湿度 ) ，盖上皿盖并贴上标签，每一种菌接种两个小室（其中毛霉接种4个小室）。

5. 恒温培养

将接种后的平皿正置于28℃培养箱中恒温培养7天。 6. 镜检

在显微镜下直接观察小室培养后的载玻片，用低倍镜即可较为清晰的观察到霉菌的菌丝体及孢子，根据所学的四种菌的基本特征对四种菌进行观察比较与区分，必要时可以采用高倍镜对菌进行观察。

五．实验结果记录 1.四种霉菌的形态特征

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毛霉、根霉、青霉、曲霉的形态特征比较

菌形态特征 种 根菌丝无隔、多核、分枝状，有匍匐菌丝和假根。在假根的上方直立地生长霉 出一至数根孢囊梗，其顶端膨大成球形孢子囊。囊的基部有囊托，中间有球形或半球形囊轴。囊内产大量孢囊孢子，有性生殖时由不同性别的菌丝或匍匐菌丝上生出配子囊，配子囊双双异宗配合形成一接合孢子。 曲营养菌丝具有分隔；气生菌丝的一部分形成长而粗糙的分生孢子梗，顶端霉 膨大成球状顶囊，表面辐射出一层或两层小梗，小梗上着生成串的球形分生孢子。分生孢子梗生于足细胞上，并通过足细胞与营养菌丝相连。 毛菌丝无隔、多核、分枝状，无假根或匍匐菌丝。菌丝体上直接生出单生、霉 总状分枝或假轴状分枝的孢囊梗。各分枝顶端着生球形孢子囊，无囊托。 青菌丝有横隔，分生孢子梗亦有横隔，光滑或粗糙。基部无足细胞，顶端不霉 形成膨大的顶囊，其分生孢子梗经过多次分枝，产生几轮对称或不对称的小梗，形如扫帚，称为帚状体。小梗顶端有孢子。 2. 四种霉菌的图示

图1 根霉的形态（10×40）

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图2 黑曲霉的形态（10×10）

图3 黑曲霉的形态（10×40）

图4 黑曲霉足细胞（10×40）

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图5 毛霉的形态（10×40）

分生小梗 隔

图6 青霉的形态（10×40）

六、实验小结

通过本次实验，学会了小室培养培及马铃薯培养基的配制方法。另外，通过观察霉菌的形态并且有特别的关注不同霉菌的细节及不同之处，比如菌丝是否有隔，孢子囊形态等特征，细心比较各种霉菌细节状态的不同，掌握了霉菌的一些基本形态特征，扩展了视野。

七、思考题

1、黑曲霉和黑根霉在形态特征上有何区别？ ①菌丝：根霉无隔有假根，曲霉无隔有足细胞。

②孢子梗：根霉位于假根上，曲霉由气生菌丝分化而来。

③孢子囊形态：根霉孢子囊表面平滑，曲霉表面不平滑，呈絮状。

2、如果要求对某放线菌或霉菌不同发育时期（基内菌丝→气生菌丝→孢子丝或

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繁殖菌丝）进行连续观察，写出实验方案。

①选取对数期菌落进行同步培养，分化出处于同一生长阶段的菌。

②接种，若放线菌则在平皿上插上至少7个载玻片，霉菌则至少接五个小室。

③培养观察：在适宜条件下培养，每隔一天在相同时间内取出一个盖玻片进行观察记录。

附：马铃薯培养基配方（PDA） 马铃薯 200g 蔗糖（或葡萄糖） 20g 琼脂 22~25g 水 1000ml PH 自然

马铃薯去皮，切成块煮沸20~30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补足水至所需量，110℃灭菌20~30min。

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繁殖菌丝）进行连续观察，写出实验方案。

①选取对数期菌落进行同步培养，分化出处于同一生长阶段的菌。

②接种，若放线菌则在平皿上插上至少7个载玻片，霉菌则至少接五个小室。

③培养观察：在适宜条件下培养，每隔一天在相同时间内取出一个盖玻片进行观察记录。

附：马铃薯培养基配方（PDA） 马铃薯 200g 蔗糖（或葡萄糖） 20g 琼脂 22~25g 水 1000ml PH 自然

马铃薯去皮，切成块煮沸20~30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补足水至所需量，110℃灭菌20~30min。

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