细胞生物学研究方法

一、 填空题

1.透射电子显微镜由 、 、 三部分所组成。

2.在酵母人工染色体制备过程中，要使用酶脱去酵母的细胞壁，使之成为 ，并且 进行观察和计数。 3.观察贴壁生长的培养动物细胞可用 。

4.电子显微镜使用的是 透镜，而光学显微镜使用的是 透镜。

5.物质在紫外光照射下发出的荧光可分为 和 两种，其中 需要将被照射的物质进行染色。

6.用紫外光为光源观察物体比用可见光的分辨率要高，这是因为 。

7.相差显微镜与普通显微镜的区别是用 替代可变光阑，用 代替普通物镜。 8.倒置显微镜与普通显微镜的不同在于其 。 9.显微镜的分辨本领是指能够 能力，用 来表示。 10.电子染色是用 来增强电子的散射能力。

11.在光学显微镜下见到的结构称为 ，在电子显微镜下见到的结构称为 。

12.细菌质膜的多功能性主要表现在:具有 的呼吸作用，具有 的分泌作用，具有 的信号传导作用。

13.显微镜的分辨率约等于光波长的 ，通常把这一数值看成是光学显微镜分辩力的 。

14.在同位素追踪技术中，用于研究DNA的同位素标记的前体物是 。 15.单克隆抗体技术是将 与无限繁殖的肿瘤细胞杂交的技术。 16.可用 技术来研究质膜结构的不对称性。 17.乙醇沉淀DNA的主要原理是 。

18.动物细胞培养所用的合成培养基中除含多种 、 和 外，一般还需加入 。

19.用荧光显微镜观察细胞时，经吖啶橙染色的细胞中的DNA发 荧光，而RNA发 荧光。

20.适于观察活细胞的光学显微镜有 、 和 等。 21.分辨率是指人的肉眼或显微镜在25cm处能够分辨到的相邻两个物体间最近距离的能力。人眼为 ，普通光学显微镜为 ，透射电子显微镜为 ，扫描隧

道显微镜为 ，以紫外光为光源的光学显微镜为 。 22.光学显微镜的组成主要分为 、 和 三大部分，光学显微镜的分辩率由 、 和 三种因素决定。 23.用紫外光为光源观察物体比用可见光的分辨率要高，这是因为 。 24.荧光显微镜是以为 光源，而电子显微镜则以 作为光源。 25.电子显微镜按工作原理和用途的不同可分为 和 。 26.利用超速离心机对细胞组分进行分级分离的常用方法有 和 。 27.DNA/RNA、DNA/DNA杂交的分子基础是 和 。 28.对染色体上特异DNA序列进行分析的方法是 。 二、判断题

1.透射或扫描电子显微镜不能用于观察活细胞，而相差或倒置显微镜可以用于观察活细胞。 2.扫描隧道显微镜是具有原子显像力的显微镜。

3.在等密度梯度离心中蔗糖或甘油的梯度的作用与移动区带离心中梯度原理是不同的，在移动区带离心中梯度的惟一目的是减少样品的扩散，即使是在离心管的底部，颗粒的密度也达到与本身密度相同的密度区时就会停留在该区域。 4.以蔗糖为介质的密度梯度离心又叫差速密度梯度离心。 5.CsCl密度梯度离心又称等密度梯度离心。

6.CsCl密度梯度离心法分离纯化样品时，样品要和CsCl混匀后分装。离心时，样品中不同组分因重力的不同而停留在不同区带。

7.提高显微镜的分辨率，可通过缩短波长，或给标本染色。

8.在光学显微镜下观察到的细胞结构称为亚显微结构，在电子显微镜下观察到的结构称为超微结构。

9.为了使光学显微镜或电子显微镜标本的反差增大，可用化学染料对标本进行染色。 10.亲和层析法按分子内在电荷分离分子。

11.贴壁生长的细胞呈单层生长，且有接触抑制现象。 12.癌细胞的培养，也是单层生长，但没有接触抑制现象。

13.生物样品的电镜分辨率通常是超薄切片厚度的l/1O，因而切得越薄， 照片中反差也越强。

14.用Triton等去垢剂可以抽提细胞中的微管、微丝等蛋白质结构。 15.淋巴细胞在体外培养时是以贴壁的方式进行生长。

16.相差显微镜可用来观察活细胞和未经染色的标本。

17.细胞匀浆离心时，较小的细胞器经受较小的摩擦，因而比更大的细胞器更快沉淀。 18.光学显微镜和电子已微镜的差别在于后者的放大倍数远远大于前者，所以能看到更小的细胞结构。

19.电子显微镜的镜筒中是真空的，其目镜与光学显微镜的目镜也有很大区别。 20.在电子显微镜下观察细胞核时用碱性品红染色，染色质被染成红色。 21.用免疫荧光技术可显示与酶解过程有关的酶是否结合在微管上。

22.用带有标记的特定核酸分子作探针，测定与之互补的染色体 DNA区段的位置，称为原位杂交。

23.Western blotting是体外分析 RNA的技术。

24.进行流式细胞术时，所用的细胞需染色，而且还需对组织块中的细胞进行分散处理。 三、选择题

1.通过选择法或克隆形式从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的细胞群体称作 ( )。

A.细胞系 B.细胞株 C.细胞库 D.其他 2.观察活细胞的显微结构时，最好用( )。

A.荧光显微镜 B.相差显微镜 C.扫描电镜 D.透射电镜 3.研究DNA在细胞中的代谢，常用的同位素标记物有 ( )。

A.14C-戊糖 B.32P-磷酸 C.15N-鸟嘌呤

4.在细胞培养的研究中，已知细胞培养液与未知细胞培养液的主要区别是 ( )。

A.未知培养液是细胞培养研究中最近才发展起来的技术 B.未知培养液完全是人工制造的

C.已知培养液包括血清、淋巴因子和其他来自生物体的流质体 D.已知培养液不含血清、淋巴因子和其他来自生物体的流质体 5.使用氯化铯密度梯度离心法，其目的是 ( )。

A.通过密度梯度来维持重力的稳定性，防止物质对流 B.用来分离生物分子和细胞亚显微结构 C.防止生物大分子凝聚沉淀 D.以上都不对

6.在凝胶电泳中，示踪染料的移动速度 ( )。

A.比各种不同分子样品移动得慢 B.与各种不同分子样品移动速度相同 C.比各种不同分子样品移动得快 D.以上都不对 7.细胞融合是一个复杂的过程，在此过程中 ( )。

A.PEG可以诱导融合 B.用灭活的仙台病毒可以促融合 B.不会形成异核体 D.只有同类细胞才能融合 8.提高一般光学显微镜的分辨能力，常用的方法有( )。

A.利用高折射率的介质（如甘油） B.调节聚光镜，加红色滤光片 C.用荧光抗体示踪 D.将标本染色 9.下列关于杂交瘤技术的描述中，最正确的一项是 ( )。

A.B淋巴细胞与B淋巴瘤细胞融合，目的是抑制瘤细胞无限生长

B.在培养基中加入氨基蝶呤可选出杂交细胞 C.氨基蝶呤可抑制瘤细胞的蛋白质合成 D.氨基蝶呤能导致B淋巴细胞无限分裂

10.如果你想要在细胞内部寻找一个含高浓度Ca2+的区域，下列哪一种显微技术可以选择？（ ）

A.荧光显微技术 B.偏光显微技术 C.相差显微技术 D.透射电镜显微技术 11.细胞融合的诱导剂主要有 ( )。

A.PEG(聚乙二醇) B。TMV(烟草花叶病毒) C.亚硝酸 D。PHV(植物凝集素)

12.流式细胞仪或流式细胞分选仪能快速测定细胞的下列哪些参数？（ ） A.DNA含量 B.RNA含量 C.蛋白质含量 D.细胞体积 13.在包埋-去包埋超薄切片电镜技术中，( )不正确。 A.不用重金属染色 B.分辨率高

C.没有包埋剂存在 D.要用 Triton去包埋 14.下列最不可能成为原代细胞培养的细胞来源是 ( )。 A.胚胎组织 B.活跃生长的恶性肿瘤组织 C.成年鼠脑组织 D.植物原生质体

15.单个植物细胞在体外经过诱导并培养成为完整小植株的实验证明了 ( )。 A.细胞是构成有机体的基本单位 B.一切有机体均来自于细胞 C.细胞是有机体生长发育的基础 D.细胞具有遗传的全能性

16.光学显微镜有一个放大率为40的物镜和放大倍数为1O的目镜，成像的总放大倍数是 ( )。 A.40× B.50× C.400× D.450× 17.下列哪项与显微镜能达到的分辨率无关？（ ）

A.光波波长 B.物镜的放大倍数 C.标本和透镜之间的物质的折射率 D。透镜的数值孔径 18.基因枪是 ( )。

A.一种将DNA包被片打入细胞的枪

B.用闪电速度的酶来合成重组DNA的新技术

C.一种利用重组DNA技术制造的用于战争的大杀伤性武器 D.以上都不对

19.为什么聚合酶链式反应要求用从嗜热性细菌中提取的热稳定性DNA聚合酶？ A.只有这种热稳定形式能辨认四脱氧核苷 B.这种酶能在一个合理的时间内扩增DNA C.实际上这种酶是最易得到的一种DNA聚合酶

D.只有这种酶才能具有足够的稳定性来耐受DNA变性解链所要求的高温

20.核酸杂交可被用来衡量不同物种间进化的亲缘关系，有关相关物种DNA，下列表述正确的是 ( )。

A.较近亲缘关系的物种在较低的解链温度下形成杂交DNA B.较近亲缘关系的物种在较高的解链温度下形成杂交DNA C.在DNA杂交解链温度与物种间的亲缘关系之间无相关性 D.在较近亲缘关系的物种的DNA之间无法形成DNA杂交分子

21.利用不同性质的有机染料可对细胞中不同成分进行选择性染色，下列哪种结果有误？（ ） A.碘液可使口腔上皮细胞的细胞质和细胞核呈深浅不同的棕黄色 B.吉姆萨染液可使细胞核或染色体呈紫红色或橘红色 C.甲基绿可使RNA分子呈蓝绿色 D.派洛宁可使RNA分子呈红色

22.在下列哪种情况下，物体在显微镜下的能见性最差？（ ）

A.物体与介质有同样的折射 B.物体和背景屈光不同

C.物体衍射了部分但非全部的射在它上面的光线

D.物体吸收了部分但非全部的射在它上面的光线 23.关于X射线衍射技术，下列哪项有误？（ ）

A.是测定生物大分子结构的一项适用技术 B.可测定蛋白质结晶分子中原子的空间排布 C.X射线是波长较短的电磁辐射，比电子的穿透力强 D.该技术能检测较薄的含水标本

24.关于共聚焦激光扫描显微镜，下列哪项叙述有误？（ ）

A.以单色激光作为光源

B.激光变成点光源后聚焦到标本成为点照明 C.图像信息要经电脑三维重建处理 D.所用标本须经超薄切片

25.分别使用光镜的低倍镜和高倍镜观察同一细胞标本相，可发现在低倍镜下 ( )

A.相较小，视野较暗 B相较大，视野较亮 C.相较大，视野较暗 D.相较大，视野较亮

26.现有匀浆的和已经过各级离心的鼠肝细胞溶液，下列哪一组分含有的线粒体最少？（ ） A.进行离心之前的整个匀浆溶液

B.第一次低速离心后的上清液 C.经过高速超速离心后的上清液

D.以上的任何组分都没有线粒体 27.为什么透射电镜的照片没有颜色？（ ）

A.细胞内部结构无颜色，都为灰白色的暗影 B.彩色显微照片太昂贵了 C.影色胶片尚未发明

D.照相的底片接受的是穿过样品的电子，而不是决定了颜色的各种波长的光

28.在电镜下面发现了一种新的细胞器，但却不能肯定是真的还是技术问题造成的人为现象，下列哪一项可证实推测？（ ）

A.在若干个相同来源的相同制备样品中找这一结构 B.在若干个不同来源的相同制各祥品中找这一结构 C.在不同染色方法制各的样品中找相同结构

D.在不同的(或)无固定剂条件下制备的样品中找相同结构

29.氚的半衰期为12年，那么保存了24年的氚的放射性是最初的 ( )。

A.12% B.25% C.75% D.已不存在 30.光镜与电镜比较，下列各项中 ( )是不正确的。 A.电镜用的是电子束，而不是可见光

B.电镜样品要在真空中观察，而不是暴露在空气中 C.电镜和光镜的样品都需要用化学染料染色

D.用于电镜的标本要彻底脱水，光镜则不必

31.在递增细胞匀浆液的离心转速过程中最先沉淀下来的是 ( )。 A.核糖体 B.线粒体 C.未破碎的细胞核 D.微体

32.为了解某细胞培养物是否处于DNA合成时期，在具有放射性胸苷存在的情况下培养细胞，下列哪种方法是探测该标记脱氧核苷酸是否存在于核DNA中的最佳方法？（ ）

A.放射自显影 B.聚丙烯酰胺凝胶电泳 C.琼脂糖凝胶电泳 D.双向凝胶电泳

33.一般光学显微镜 (用蓝色滤光片)，当物镜镜口率 (NA)为1.4时，其分辨率极限和放大倍数分别为( )。

A.0.4um，5OO倍 B.0.2um，10OO倍 C.0.2um，5OO倍 D.0.4um，1O00倍 34.提高显微镜的分辨率最好的办法是 ( )。

A.增加放大倍数 B.缩短波长 C.增加波长 D.给标本染色 35.人胚肺成纤维细胞体外培养大约能传代 ( )。

A.20次左右 B.150次左右 C.40－60次 D.无数次 36.在细胞分级抽提方法中，为了溶解膜系统，应选用（ ）

A.Triton X-100 B.Tween40 C.脱氧胆酸钠 D. 0.25mol/L硫酸钠

37.假设你对重建生活细胞的有丝分裂过程中染色体的三维形态感兴趣，你将选择哪种显微技术？（ ）

A.冰冻断裂显微术 B.共聚焦扫描术 C.光学显微术 D.扫描电子显微术 38.下列关于基因敲除实验的表述中，不正确的一项是 ( )。 A.需要胚胎干细胞作为转化受体 B.需要体外构建重组体 C.敲除后，靶基因不再存在

D.一般说来，要经多次传代才能表现出敲除基因的缺陷表型

39.在Southern印迹法中应用的DNA片段和DNA探针相当于Northern印迹法中的( ) A.DNA片段和RNA探针 B.RNA片段和RNA探针 C.RNA片段和DNA探针 D.蛋白质片段和DNA探针 40.在动物细胞培养过程中要用( )来进行观察。

A.相差显微镜 B.荧光显微镜 C.倒置显微镜 D.普通光学显微镜 41.关于放射自显影技术，下列哪项错误？（ ）

A.利用放射性同位素探测细胞内生物大分子动态变化的一种方法 B.包括宏观自显影、光镜自显影和电镜自显影等三种类型 C.具有灵敏度高和操作简便、无污染等优点

D.自显影时常用的感光材料，包括X射线胶片和原子核乳胶等

42.人眼的分辨率为1O5nm，光学显微镜的分辨力能使人眼的分辨力提高 ( )。 A.100倍 B.500倍 C.1000倍 D.5000倍 43.小鼠骨髓细胞染色体标本一般制备成细胞的（ ）。 A.滴片 B.切片 C.涂片 D.印片

44.不能用于研究膜蛋白流动性的方法是（ ）技术。

A.荧光抗体免疫标记 B.荧光能量共振转移 C.光脱色恢复 D.荧光标记细胞融合 45.激光共焦点扫描显微术的特点是能（ ）。

A.进行光学切片 B.进行激光切割 C.检测自发荧光 D.产生微分干涉差 46.激光共焦点扫描显微镜可用于（ ）。

A.获得细胞不同切面的图像 B.观察活细胞

C.定量分析细胞中的化学成分 D.观察细胞表面的立体形貌 47.关于电子显微镜，下列（ ）有误。

A.组织或细胞观察切片均需超薄切片 B.分为透射式和扫描式两种 C.在荧光屏上成像 D.利用电子束作为照明源 48.用电子显微镜在细胞中观察不到微粒体，其原因是（ ）。

A.微粒体太小，无法用电子显微镜观察 B.它们是匀浆和离心后的人造产物 C.电子能够完全穿透它们 D.只有通过显微摄影才能看到

49.研究酵母菌在无氧和有氧条件下生长时，其线粒体形态结构变化的技术是（ ）。

A.电镜超薄切片技术 B.电镜负染色技术

C.扫描隧道显微镜技术 D.非细胞体系技术

50.观察腺病毒核壳体表面的亚单位——衣粒形态与排列方式的技术是（ ）。

A.荧光显微镜技术 B.激光共焦点扫描显微镜技术 C.冷冻蚀刻技术 D.电镜负染色技术， 51.冰冻蚀刻技术主要用于（ ）。

A.电子显微镜 B.光学显微镜 C.原子力显微镜 D.扫描隧道显微镜 52.用（ ）研究线粒体中F0－F1－ATP酶、泛素依赖性蛋白水解酶复合体的结构。

A.电镜三维重构技术 B.免疫荧光技术 C.细胞融合技术 D.流式细胞术

53.体外培养细胞，从G1期到S期，用（ ）技术研究细胞表面形态结构的变化。

A.超薄切片 B.扫描电镜 C.负染色 D.放射自显影 54.分离细胞内不同细胞器的主要技术是（ ）。

A.超速离心技术 B.电泳技术 C.层析技术 D.光镜技术 55.利用差速离心法可从动物组织匀浆中分离出下列哪种细胞器（ ）。

A溶酶体 B.细胞核 C.线粒体 D.质膜

56.Feulgen反应是一种经典的细胞化学染色方法，常用于细胞内（ ）。

A.蛋白质的分布与定位 B.脂肪的分布与定位 C.DNA的分布与定位 D.RNA的分布与定位 57.PAS反应可用来测定下列物质中的（ ）。

A.多糖 B.脂肪 C.蛋白质 D.核酸

58.研究表皮生长因子受体在细胞分布的部位可用（ ）。

A.原位杂交技术 B.显微操作技术 C.免疫电镜技术 D.细胞融合技术 59.要探知细胞内某一蛋白质的表达水平，可以通过（ ）实现。

A.Southern blot B.Nothern blot C.Western blot D.in situ hybroldlzatlon

60.细胞内特异DNA或RNA序列的定性与定位通常采用的技术是（ ）。

A.杂交瘤技术 B.显微放射自显影 C.原位杂交 D.胶体金技术 61.已克隆了人的rDNA，用（ ）确定rDNA分布在入的哪几条染色体上。

A.单克隆抗体技术 B.免疫荧光技术 C.免疫电镜技术 D.原位杂交技术 62.已克隆了鸡卵清蛋白的基因，用（ ）技术证明在雏鸡的输卵管中该基因不转录而在产

卵母鸡输卵管中则活跃地转录。

A.Southern blot B.Western blot C.Northern blot D.免疫荧光技术 63.下面（ ）实验方法不能告诉你基因的表达与否

A.Southern blot B.Northern blot C.Western blot D.免疫荧光技术 64.流式细胞术可用于测定（ ）。

A.细胞的大小和特定细胞类群的数量 B.分选出特定的细胞类群 C.细胞中DNA，RNA或某种蛋白的含量 D.以上三种功能都有、

65.某种抗癌药物的作用机制是阻止肿瘤细胞的DNA复制还是阻止蛋白质合成，用（ ）证

明。 A.电镜负染色技术 B.放射自显影技术 C.免疫荧光技术 D.免疫电镜技术 66.氖标注的尿嘌呤核苷可用于检测细胞的（ ）。

A.蛋白质合成 B.DNA复制 C.RNA转录 D.糖原合成 67.下面哪一种实验方法可以检测DNA和蛋白质的相互关系（ ）。

A.凝胶延滞实验 B.凝胶过滤 C.甘油梯度离心 D.聚丙烯酸胺凝胶电泳 四、问答题

1.使用普通光学显微镜时应如何掌握有效放大与物镜镜口率的关系？ 2.比较放大率和分辨率的含义。

3.与光镜相比，用于电子显微镜观察的生物样品有什么特殊的要求？ 4.为什么电子显微镜不能完全代替光学显微镜？ 5.何谓电镜三维重构技术？ 6.扫描隧道显微镜只有哪些特点？ 7.比较差速离心和密度梯度离心。

8.简述放射自显影技术的基本原理和步骤。

9.假设已有质粒中含有rRNA基因克隆的大肠杆菌菌株，如何显示rRNA基因存在于小鼠的哪些染色体上？

10.核酸分子杂交技术的基本原理。

11.比较透射电子显微镜和扫描电子显微镜。 12.PCR技术原理及应用。

13.共焦点激光扫描显微镜技术与一般光学显微镜有什么突出优点和用途？ 14.暗场显微镜在细胞生物学研究中有什么应用？

15.相差显微镜在细胞生物学研究中有什么应用？ 16.荧光显微镜在细胞生物学研究中有什么应用？

17.微分干涉显微镜的特点及在细胞生物学研究中的应用。 18.流式细胞术及其应用。 19.扫描电镜的特点及应用。

20.密度梯度离心的方式主要有哪些？ 21.印迹杂交的类型。

22.冷冻蚀刻技术的方法步骤。

23.氯化绝密度梯度离心的原理及应用。 24.荧光抗体技术的应用。

25.简述冰冻蚀刻术的原理和方法。 26.单克隆抗体技术的基本原理是什么？ 27.电子显微镜为何不能观察活标本？ 28.克隆基因组DNA与克隆cDNA的区别。 29.何谓原代培养、细胞株和细胞系？ 30.动物体细胞克隆有什么意义？ 31试述超薄切片的制备过程。

32.光学显微镜技术有哪些新发展？它们各有哪些突出优点？

33.已知动物细胞中含有actin基因，如何证明蚕豆细胞基因组中是否存在actin基因？ 若存在，如何证明该基因在染色体上的位置？

34.用什么方法追踪细胞中蛋白质合成与分泌过程？包括哪几个步骤？ 35.如何从组织中分离出不同类型的细胞？ 五、实验设计与分析

1.进行细胞组分的分离时，实验方案设计的一般原则是什么？ 2.解决下列问题可分别采取何种技术？

(1)证明在犯罪现场找到的头发中的DNA与被告犯罪嫌疑人的DNA是吻合的； (2)鉴定分泌到细胞外的糖蛋白激素，其糖基是在细胞的哪一部分被加上去的； (3)寻找新的、便宜的而且丰富的人类生长激素来源，以便用于治疗生长激素缺乏患者； (4)确定酶蛋白中关键氨基酸的方法。 3.如何进行差速离心？

4.用什么方法追踪活细胞中蛋白质合成与分泌过程？包括哪几个步骤？ 六、名词释义

1.显微分辨率 (microscopic resolution) 2.电子显微术 (electron microscopy) 3.放射自显影技术 (autoradiography) 4.细胞培养 （cell culture）

5.核酸杂交 (nucleic acid hybridization) 6.荧光显微镜 (fluorescence microscope)

7.扫描电子显微镜 (scanning electron microscope，SEM) 8.显微结构 (microscopic structure) 9.超微结构 (supper-microscopic structure) 10.共聚焦显微镜 (confocal microscope) 七、拓展

1.试述方法和工具对细胞生物学发展的重要性。 2.试述细胞重要结构的发现与哪些方法技术有关？

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