实 验 分子荧光法测定硫酸奎宁的含量

实 验 分子荧光法测定硫酸奎宁的含量

一、实验目的

1．了解仪器的性能与结构；熟悉仪器的操作步骤； 2．学会绘制激发光谱和荧光谱图：（即确定最大的激发λEX和发射λEm） 3．定量测定硫酸奎宁的含量（标准曲线法）

二、实验原理

硫酸奎宁，是喹啉类衍生物，能与疟原虫的DNA结合，形成复合物抑制DNA的复制和RNA的转录，从而抑制原虫的蛋白合成。适用于氯喹和耐多种药物虫株所致的恶性疟。

硫酸奎宁分子量：782.96。分子式：(C20H24N2O2)2·H2SO4·2H2O

它是强荧光物质，有两个激发波长250 nm和350 nm，荧光发射峰在450 nm。在低浓度时，荧光强度与荧光物质量浓度呈正比：If=kC

三、实验内容 1.仪器与试剂 仪器：

日本日立公司F-4600 荧光分光光度计。 试剂：

（1）10μg·mL-1硫酸奎宁标准储备液：准确称取0.1000 g硫酸奎宁，用0.05 mol·L-1 H2SO4溶液溶解，全部转移至l00ml容量瓶中，用0.05 mol·L-1 H2SO4溶液稀释至刻度，摇匀。取此溶液1.0mL于100 mL容量瓶中，用0.05 mol·L-1H2SO4溶液稀释至刻度，摇匀。

（2）0.05 mol·L-1 H2SO4溶液1000mL：取浓H2SO4 2.717mL用纯净水定容于1000mL容量瓶中,即得。(浓硫酸溶质质量分数为百分之98,密度=1.84g/cm^3)

四、实验步骤

1．系列标准溶液的配制

取5只25mL的容量瓶，分别加入10.0μg·mL-1硫酸奎宁标准溶液0.00，

-1

1.00、2.00、3.00、4.00mL，用0.05 mol·L H2SO4溶液稀释至刻度，摇匀。分别为标0，标1，标2，标3，标4，标0做空白试剂。

2．仪器操作步骤

（1）检查仪器所有电源开关处于关闭状态，然后通电； （2）打开主机开关，电脑开关等； （3）通过电脑进入分析程序

3.绘制激发光谱和荧光发射光谱：（以1.2μg/mL的标样找最大λEm和λEX） （1)仪器正常后设定试验参数，更改实验名称等；

（2）进行预扫后，开始对所有标液及样品扫描；画出标准曲线

A)将λEX固定在350 nm,选择合适的实验条件,在400～600 nm范围内扫描即得

荧光发射光谱(可排除λEX的干扰)，从谱图找出最大λEm值；

B)将λEM固定在450 nm,选择合适的实验条件,在200～400 nm范围内扫描即得荧光激发光谱(可排除λEM的干扰)，从谱图找出最大λEX值.

C) 绘制标准曲线

将激发波长λEX固定在350 nm（或250 nm）左右处，荧光发射波长λEM固定在450 nm左右处，在选定条件下，测量系列标准溶液的荧光强度。

D）未知试样的测定

取1只25mL的容量瓶，加入10.0μg·mL-1硫酸奎宁标准溶液2.5mL,用0.05 mol·L-1H2SO4溶液稀释至刻度，摇匀。在标准系列溶液同样条件下，测量试样的荧光发射强度。

E) 绘制荧光强度If对硫酸奎宁溶液浓度C的标准曲线，并由标准曲线求算未知试样的浓度Conc (μg/mL)。

4.扫描完数据存盘后上传至网盘；

5.退出分析程序，关机，关电源，取出比色皿，洗净保存所有玻璃器皿，实验结束。

6.实验报告由网盘中下载数据写出。 五、注意事项

硫酸奎宁溶液必须当天配制、避光保存。

六、思考题

1．能用0.05 mol·L-1 HCl来代替0.05 mol·L-1 H2SO4稀释溶液吗？为什么要同时测定硫酸的空白溶液？

2．哪些因素可能会对硫酸奎宁荧光产生影响？ 3.荧光分光光度计为什么要设两个单色器？

4.荧光分光光度计和紫外分光光度计有哪些不同点？

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/czd5.html