《白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测

《白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测定方法液相色谱-串联质谱法》

地方标准编制说明

一、标准制定背景

我院从2010年来承担了我省每年的白酒风险监测和监督抽查工作，发现生产企业违规添加甜味剂的检出率在2%左右，小作坊的检出率更高，白酒中滥用甜味剂已成为行业潜规则。一些白酒生产企业为迎合消费者需求，在白酒中加入甜味剂以增加白酒的甜味和回甜感来改善口感，从而赚取高额利润。在实际检测工作中发现现有国家标准针对不同甜味剂采用不同的检测方法，检测效率低，前处理较繁琐，且容易出现假阳性。据报道目前我国白酒中甜味剂的添加呈现出多样少量的特点，企业加到白酒中的甜味剂仅需微量甚至痕量即可改善白酒的口感，因此传统的色谱法并不能有效地对白酒中的微量甜味剂进行监控。本标准拟建立高效液相色谱-串联质谱法同时检测白酒中四种甜味剂，该检测手段拥有灵敏度高、特异性好等优点，通过同时检测改善目前检测工作繁琐低效的现状，大大提高工作效率，减少误判，准确定量。

2013年贵州省卫生厅组织了食品安全地方标准审评委员会专家组召开了评审会议，通过了《白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测定方法液相色谱-串联质谱法》地方标准的立项，项目批准文号为：黔卫函【2014】26号。

二、主要工作过程

（一）标准起草小组的成立

《白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测定方法液相色谱-串联质谱法》地方标准任务下达后，我院于2014年2月成立了以贵州省产品质量监督检验院、贵州茅台酒厂（集团）习酒有限责任公司两家单位组成的标准起草小组，对职责进行分工，确定工作计划，由贵州省产品质量监督检验院负责起草。

（二）收集资料及市场调研

标准起草小组按标准的编制计划，组织技术人员对白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测定方法液相色谱-串联质谱法进行了方法资料查找收集，了解了目前我省白酒的生产情况，主要香型为酱香型白酒居多，同时生产的还有浓香型白酒、兼香型白酒、少量清香型白酒和普通白酒。在实验方案设计的时候，为了覆盖全面，我们用五种香型的白酒都做了回收率试验。

（三）试验形成标准草案

根据计划，贵州省产品质量监督检验院组织了技术骨干进行了多次的试验，2014年2月-2014年5月经过三个月实验室的条件摸索，确定了最终方法的色谱质谱条件和样品前处理方法，进行了方法学的验证工作。

1质谱条件的确定:目前已有标准中甜蜜素的检测方法有SN/T1948-2007《进出口食品中环己基氨基磺酸钠的检测方法液相色谱-质谱/质谱法》，我们参照该标准确定了甜蜜素的母离子和子离子，该化合物只找到一个子离子，同时对质谱参数进行了优化。糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖目前只有液相色谱的检测标准，没有液相色谱-质谱联用的检测方法标准，于是我们查找并参考相关文献确定了这三种物质的母离子和子离子及质谱参数，即糖精钠为和,其中这对离子响应比较灵敏及稳定，故作为定量离子对；同理安赛蜜为和,其中为定量离子，三

氯蔗糖也只找到一个碎片离子，但是由于该化合物带有三个氯原子，所以我们选择了他的同位素峰作为另外一对离子，为和,其中为定量离子。

2 色谱条件的确定：四种化合物极性相差较大，我们采用了梯度洗脱保证四种化合物能够灵敏快速的检出，流动相的选择我们试验了水-甲醇、水-乙腈、乙酸铵-甲醇、乙酸铵-乙腈系统，结果发现纯水和有机相作为流动相时，四种化合物的保留比较弱且保留时间容易偏移，尤其对前面出峰的安赛蜜和糖精钠影响较大，峰形较差；采用缓冲盐水溶液后保留增强保留时间稳定，峰形尖锐重现性好。考虑到四种被测物极性较强，故采用反相C-18柱分离，且流动相的洗脱能力不宜过强，最终我们选择了乙酸铵水溶液-甲醇流动相系统，通过优化梯度洗脱程序，最终使四种化合物在10min内完成分离。

3 样品前处理方法的确定:最初我们参照了SN/T1948-2007的方法对白酒直接进样测定，结果发现回收率只有30%左右，估计是白酒本身的基质效应。后来我们采用了取10mL白酒水浴挥干后用纯水定容10mL进样，回收率良好，所以确定白酒本身的基质对测定是有影响的，但该法比较麻烦。最后我们采用了取5g酒样，用纯水定容至50mL后进样，通过水的稀释，白酒的基质效应大大减弱，回收率良好，操作简单方便。

确定了方法后，我们进行了方法验证，精确量取适量的四种甜味剂标准工作液用水稀释成浓度分别为mL、 ng/mL、 ng/mL、 ng/mL、 ng/mL、 ng/mL、ng/mL、 ng/mL、 ng/mL浓度系列标准工作溶液，供液相色谱-串联质谱检测。将固定浓度的标准系列工作液按照浓度由低到高进样，测定相应的信号响应值，以标准工作液和内标的相对浓度为横坐标，以相对峰面积为纵坐标，绘制标准

曲线，计算出回归方程和相应系数。检出限（LOD）采用向空白样品中逐级降低加标浓度的方法来确定。以3倍信噪比（S/N=3）对应的目标物浓度作为检出限（LOD）。

在酱香型白酒、浓香型白酒、兼香型白酒、清香型白酒和普通白酒五种样品中进行添加回收试验，在优化的色谱和质谱条件下分析。在低、中、高三种添加水平下四种甜味剂的平均回收率在%%之间，相对标准偏差（RSD,n=6）在%%之间。方法的回收率和精密度符合GB/T 27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》对回收率和精密度的要求。

2. 实验室间验证结果

2014年6月-2014年7月试制了阳性样品分别送到四川省质检院、贵州省药检所、贵州省进出口检验检疫局三家实验室进行了比对，统计比对结果，比对结果满意。

（四）、形成标准征求意见稿

根据试验方法的确定，组织编制人员及技术人员就标准的结构、技术要求、检验方法等进行了多次探讨，达成一致意见，形成标准征求意见稿。

三、标准编制原则

本标准为首次制定，主要技术参数是质谱色谱条件的确定和样品前处理方法的摸索。

（一）标准编制原则

为保证白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的准确定性

定量，在制定本标准的过程中，汲取国内同类相关先进的检测标准及编制的先进经验和方法，力求以实事求是的原则使本标准具有较强的科学性、先进性、可靠性和可操作性。

（二）主要技术内容确定的依据

在进行大量实验室研究的基础上，对白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的液相色谱-串联质谱方法进行了试验摸索，确定了具体的、可操作的、快速高效的检测方法，确定实验室间误差在10%以内。考虑到贵州省白酒产业的情况，我们选用了目前贵州省内的主要五种香型的白酒进行了方法确认。

四、采纳国内外先进标准情况

本标准在制定过程中参考了SN/T 1948-2007《进出口食品中环己基氨基磺酸钠的检测方法液相色谱-质谱/质谱法》、GB/T 《食品中糖精钠的测定》、GB/T 《饮料中乙酰氨基磺酸钾的测定》。本标准在编制中无重大分歧意见，本标准完全符合现行法律法规和强制性标准，不存在与现行法律、法规和强制性标准相违背之处。

五、制订标准的意义

本标准的制定，建立了白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的液相色谱-串联质谱检测方法，拥有灵敏度高、特异性好等优点，能够同时检测白酒中的四种甜味剂，可大大提高工作效率，减少误判，准确定量。六、标准是否强制的有关建议

建议将本标准定为推荐性地方标准。

标准起草小组

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/cz3q.html