LT-3 蛋白质化学 生物化学习题汇编

目录

第三章 蛋白质化学 ........................................................................................................ 2

一、填充题 ............................................................................................................... 2 二、是非题 ............................................................................................................... 6 三、选择题 ............................................................................................................... 8

四、问答题 ............................................................................................................. 16 五、计算题 ............................................................................................................. 24

第三章 蛋白质化学

一、填充题

1、氨基酸的结构通式为( )。

2、组成蛋白质分子的碱性氨基酸有( )、( )和( )。酸性氨基酸有( )和( )。

3、在下列空格中填入合适的氨基酸名称。

(1)( )是带芳香族侧链的极性氨基酸。

(2)( )和( )是带芳香族侧链的非极性氨基酸。 (3)( )是含硫的极性氨基酸。

(4)( )或( )是相对分子质量小且不含硫的氨基酸，在一个肽链折叠的蛋白质中它能形成内部氢键。

(5)在一些酶的活性中心中起重要作用并含羟基的极性较小的氨基酸是( )。

4、Henderson-Hasselbalch方程为( )。 5、氨基酸的等电点(pI)是指( )。

6、氨基酸在等电点时，主要以( )离子形式存在，在 pH >pI的溶液中，大部分以( )离子形式存在，在 pH ＜pI的溶液中，大部分以( )离子形式存在。

7、在生理条件下( pH 7.0 左右)，蛋白质分子中的( )侧链和( )侧链几乎完全带正电荷，但是( )侧链则带部分正电荷。

8、脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生( )色的物质，而其他氨基酸与茚三酮反应产生( )色的物质。

9、范斯莱克(Van Slyke)法测定氨基氮主要利用( )与( )作用生成( )。

10、实验室常用的甲醛滴定是利用氨基酸的氨基与中性甲醛反应，然后用碱(NaOH)来滴定( )上放出的( )。

11、通常可用紫外分光光度法测定蛋白质的含量，这是因为蛋白质分子中的( )、( )和( )三种氨基酸的共轭双键有紫外吸收能力。

12、寡肽通常是指由( )个到( )个氨基酸组成的肽。 13、肽链的形式有( )、( )和( )三种，其中以( )最常见。

14、在一些天然肽中含有( )、( )和( )等特殊结构。这些结构在蛋白质中是不存在的。很可能这些结构上的变化可使这些肽免受蛋白水解酶的作用。

15、1953年( )第一次用化学方法合成了具有生物活性的多肽——催产素，因而获得诺贝尔奖。

16、我国于( )年由( )、( )和( )等单位在世界上首次合成了具有生物活性的蛋白质——牛胰岛素。

17、人工合成肽时常用的氨基保护基有( )、( )、( )、( )。

18、人工合成肽时常用的活化羧基的方法有( )、( )、( )。保护羧基的方法有( )、( )。

19、人工合成肽时常用的缩合剂有( )。

20、1962年( )提出了固相合成肽的方法，因而获得1984年诺贝尔化学奖。

21、近年来的研究指出，肽也有构象。如脑啡肽是一个五肽，它有( )构象。但肽的构象易变，稳定性远不如蛋白质。

22、在糖蛋白中，糖可与蛋白质的( )、( )、( )或( )残基以O-糖苷键相连，或与( )残基以N-糖苷键相连。

23、用( )酶、( )酶、( )酶裂解蛋白质分子时，它们的专一性不如胰蛋白酶和溴化氰强。

24、一般来说，用嗜热菌蛋白酶水解蛋白质所得到的片段，要比用胰蛋白酶所得的片段( )。

25、常用的拆开蛋白质分子中二硫键的方法有( )法，常用的试剂为( )；( )法，常用的试剂为( )或( )。

26、蛋白质之所以出现各种内容丰富的构象是因为( )键和( )键能有不同程度的转动。

27、在蛋白质分子中相邻氨基酸残基的β-碳原子如具有侧链会使α螺旋不稳定。因此当( )、( )和( )三种氨基酸相邻时，会破坏α螺旋。

28、在α螺旋中C＝O和N-H之间形成的氢键最稳定，因为这三个原子以( )排列。

29、Pauling等人提出的蛋白质α螺旋模型，每圈螺旋包含( )个氨基酸残基，高度为( )。每个氨基酸残基沿轴上升( )，并沿轴

旋转( )度。

30、胶原蛋白是由( )股肽链组成的超螺旋结构，并含有稀有的( )与( )残基。

31、蛋白质的最低自由能构象，常常通过( )残基之间形成的共价键而稳定。

32、当蛋白质的非模性侧链避开水相时，疏水作用导致自由能( )。 33、当疏水侧链折叠到蛋白质分子内部时，环境中水的熵( )。 34、一般来说，球状蛋白质的( )性氨基酸侧链位于分子内部，( )性氨基酸侧链位于分子表面。

35、两条相当伸展的肽链(或同一条肽链的两个伸展的片段)之间形成氢键的结构单元称为( )。

36、维持蛋白质构象的化学键有( )、( )、( )、( )、( )和( )。

37、最早提出蛋白质变性理论的是( )。

38、血红蛋白(Hb)与氧结合的过程呈现( )效应，是通过Hb的( )现象实现的。

39、当溶液中盐离子强度低时，可增加蛋白质的溶解度，这种现象称( )。当溶液中盐离子强度高时，可使蛋白质沉淀，这种现象称( )。

40、DEAE-纤维素是一种( )交换剂，CM-纤维素是一种( )交换剂。

41、一个带负电荷的蛋白质可牢固地结合到阴离子交换剂上，因此需要一种比原来缓冲液 pH 值( )和离子强度( )的缓冲液，才能将此蛋白质洗脱下来。

42、胰岛素原转变为胰岛素的过程是在( ) (细胞器)进行。分泌颗粒中的胰岛素是通过( )离子与( )氨酸残基侧链上的氮原子配位，形成( )聚体。

43、测定蛋白质浓度的方法主要有( )、( )、( )和( )。

44、肌球蛋白本身具有( )酶的活性，所以当ATP释放能量时，就引起肌肉收缩。

45、酶蛋白的荧光主要来自( )氨酸与( )氨酸。 46、凝集素能专一地识别细胞表面的( )并与之结合，从而使细胞与细胞相互凝集。

47、蛋白质的生理价值可用下式表示：( )×100。

48、R. Yalow的主要贡献是建立了( )。 49、抗体就是( )球蛋白。

50、用( )试剂可区分丙氨酸和色氨酸。

51、利用蛋白质不能通过半透膜的特性，使它和其他小分子物质分开的方法有( )和( )。

52、利用分配层析的原理进行氨基酸分析，常用的方法有( )、( ) 、( )和( )等。

53、实验室中常用的测定相对分子质量的方法有( )、( )和( )等。

54、羧肽酶B专一地从蛋白质的C端切下( )氨基酸。

55、糖蛋白的糖基大多结合在蛋白质的( )残基、( )残基与( )残基上。

56、( )不是α-氨基酸，它经常改变肽链折叠的方式。

57、维持蛋白质构象的次级键主要有( )、( )、( )和( )。

58、羧肽酶A不能水解C端是( )残基、( )残基和( )残基的肽键。

59、常用的肽链N端分析的方法有( )法、( )法、( )法和( )法。C端分析的方法有( )法和( )法等。

60、多聚L-谷氨酸的比旋光度随 pH 值改变是因为( )，而L-谷氨酸的比旋光度随 pH 值改变则是由于( )。

61、胰岛素是胰岛β-细胞分泌的，它是由前胰岛素原经专一性蛋白水解，失去N端的( )成为( )。再经类胰蛋白酶和类羧肽酶的作用失去( )肽，形成具有生物活性的胰岛素。

62、影响血红蛋白与氧结合的因素有( )、( )、( )和( )等。

63、蛋白质的超二级结构是指( )，其基本组合形式为( )、( )、( )、( )、( )和( )等。

64、蛋白质的二级结构有( )、( )、( )、( )和( )等几种基本类型。

65、凝集素是一类能与( )相互作用的蛋白质。

66、许多钙结合蛋白都存在有( )图像，即它们的钙结合位点都由一个( )的结构单位构成。

67、确定蛋白质中二硫键的位置，一般先采用( )，然后用( )技术分离水解后的混合肽段。

二、是非题

1、天然氨基酸都具有一个不对称α-碳原子。 2、亮氨酸的疏水性比丙氨酸强。

3、蛋白质分子中所有的氨基酸(除甘氨酸外)都是左旋的。 4、自然界的蛋白质和多肽类物质均由L-型氨基酸组成。

5、只有在很高或很低 pH 值时，氨基酸才主要以非离子化形式存在。

6、当溶液的 pH 值大于某一可解离基团的pKa值时，该基团有一半以上被解离。 7、一个化合物如能和茚三酮反应生成紫色，说明这化合物是氨基酸、肽或蛋白质。 8、一个蛋白质样品经酸水解后，能用氨基酸自动分析仪准确测定它的所有氨基酸。 9、用纸电泳法分离氨基酸主要是根据氨基酸的极性不同。 10、组氨酸是人体的一种半必需氨基酸。 11、CNBr能裂解Gly-Met-Pro三肽。

12、用化学修饰法能使一个肽只在精氨酸和半胱氨酸残基处被胰蛋白酶水解。 13、Lys-Lys-Lys三肽的pI必定大于个别Lys的pKa值。

14、从理论上说，可用Edman降解法测定任何非封闭多肽的全部氨基酸顺序。 15、从某些微生物中分离得到的多肽抗菌素往往为环状肽链，并含有D-型氨基酸。 16、双缩脲反应是肽和蛋白质特有的反应，所以二肽也有双缩脲反应。 17、热力学上最稳定的蛋白质构象自由能最低。

18、测定焦谷-组-脯酰胺三肽的游离氨基与羧基时呈阴性。 19、可用 8mol/L 尿素拆开蛋白质分子中的二硫键。

20、如果多肽链C端的第二个氨基酸不是脯氨酸，则羧肽酶A或B中至少有一种能切下C端氨基酸。

21、在一次实验中，蛋白质顺序仪可测定肽链长度为200个氨基酸残基的氨基酸顺序。 22、脯氨酸不能参与α螺旋，它使α螺旋弯曲(bend)，在肌红蛋白和血红蛋白的多肽链中，每一个弯曲处并不一定有脯氨酸，但是每个脯氨酸却产生一个弯曲。

23、水溶液中蛋白质分子表面的氢原子相互形成氢键。

24、胰岛素的生物合成途径是先分别合成A、B两条链，然后通过S-S键相连。 25、维持蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键。 26、疏水蛋白质的折叠伴随着多肽链熵的增加。

27、大多数蛋白质的主要带电基团是由它N端的氨基和C端的羧基组成。 28、蛋白质的氨基酸顺序(一级结构)在很大程度上决定它的构象(三维结构)。 29、羧肽酶A的分子外部主要是α螺旋构象，分子内部主要是β折叠的构象。

30、蛋白质的亚基(或称亚单位)和肽链是同义的。

31、在水溶液中，蛋白质溶解度最小时的 pH 值通常就是它的等电点。

32、变性蛋白质溶解度降低是因为蛋白质分子的电荷被中和以及除去了蛋白质外面的水化层所引起的。

33、血红蛋白的α-链、β-链和肌红蛋白的肽链在三级结构上很相似，所以它们都有结合氧的能力。血红蛋白与氧的亲和力较肌红蛋白更强。

34、血红蛋白与肌红蛋白均为氧载体，前者是一个典型的别构(或变构)蛋白，因而与氧结合过程中呈现协同效应，而后者却不是。

35、生活在空气稀薄的高山地区的人和生活在平地上的人比较，高山地区的人血液中2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)的浓度较低。

36、测定别构酶的相对分子质量可以用十二烷基硫酸钠(SDS)—聚丙烯酞胺凝胶电泳。 37、胰岛素原(proinsulin)是信使核糖核酸(mRNA)翻译后的原始产物。

38、蛋白质所含的天冬酰胺及谷氨酰胺两种残基是生物合成时直接从模板中译读而来。 39、球蛋白与球状蛋白质是不同的。 40、等电点不是蛋白质的特征参数。

41、免疫球蛋白是一种糖蛋白，它由两条重链和两条轻链组成。

42、蛋白质的SDS—聚丙烯酰胶凝胶电泳和圆盘电泳是两种完全不同的技术。 43、在多肽分子中只存在一种共价键即肽键。 44、人绒毛膜促性腺激素(HCG)是一种糖蛋白。 45、血红蛋白和肌红蛋白的功能都是运输氧。

46、逆流分溶和纸层析这两个分离氨基酸的方法是基于同一原理。 47、溶液的 pH 值可以影响氨基酸的等电点。

48、在生理条件下，氧和二氧化碳均与血红蛋白血红素中的二价铁结合。

49、如用阳离子交换树脂分离D、K和M三种氨基酸，用 pH 7.0 的缓冲溶液洗脱时，先下来的氨基酸为D。

50、到目前为止，自然界发现的氨基酸为20种左右。 51、蛋白质分子的亚基与结构域是同义词。 52、转铁蛋白是一种糖蛋白。

53、一种非常稳定相对分子质量小的蛋白质的化学结构中，经常含有较多的二硫键。 54、某蛋白质在 pH 6 时向阳极移动，则其等电点小于6。

55、多数寡聚蛋白质分子其亚基的排列是对称的，对称性是四级结构蛋白质分子的最重要的性质之一。

56、疏水作用是使蛋白质空间结构稳定的一种非常重要的次级键。

57、在蛋白质和多肽分子中，连接氨基酸残基的共价键除肽键外，还有二硫键。

三、选择题

(一)下列各题均有五个备造答案，试从其中选出一个 1、下列氨基酸中，哪个含有吲哚环?( )

(A)甲硫氨酸 (B)苏氨酸 (C)色氨酸 (D)缬氨酸 (E)组氨酸 2、下列有关氨基酸的叙述，哪个是错误的?( ) (A)酪氨酸和苯丙氨酸都含有苯环 (B)酪氨酸和丝氨酸都含羟基 (C)亮氨酸和缬氨酸都是分支氨基酸 (D)脯氨酸和酪氨酸都是非极性氨基酸 (E)组氨酸、色氨酸和脯氨酸都是杂环氨基酸

3、下列氨基酸溶液除哪个外都能使偏振光发生旋转?( )

(A)丙氨酸 (B)甘氨酸 (C)亮氨酸 (D)丝氨酸 (E)缬氨酸 4、下列哪一类氨基酸完全是非必需氨基酸？( ) (A)碱性氨基酸 (B)含硫氨基酸 (C)分支氨基酸 (D)芳香族氨基酸 (E)以上四种答案都不对

5、一个谷氨酸溶液，用5ml 1mol/L NaOH来滴定，溶液的 pH 值从1.0上升到7.0.下列数值中哪一个接近于该溶液中所含谷氨酸的毫摩尔数?(pKa1=2.19，pKa2＝4.25，pKa3＝9.67)( )

(A)1.5 (B)3.0 (C)6.0 (D)12.0 (E)18.0

6、在 pH 10.0时，下列所示谷氨酸结构中哪一种占优势”? (pKa1=2.19，pKa2＝4.25，pKa3＝9.67)( ) (A) (C) (E)

(B) (D)

7、图3-1为一个常见生化物质的滴定曲线，下列关于这图的叙述中除哪个外都是正确的?( )

(A)这化合物有两个可解离基团 (B)这化合物是一个简单的氨基酸

(C)这化合物在 pH 5 到 7 之间显示最大缓冲能力 (D)A代表按基的解离范围

(E)A点和B点分别代表一个酸性基团和一个碱性基团的pKa 8、下列蛋白质组分中，哪一种在280nm具有最大的光吸收?( ) (A)色氨酸的吲哚环 (B)酪氨酸的酚环 (C)苯丙氨酸的苯环 (D)半胱氨酸的硫原子 (E)肽键

9、下列哪种氨基酸有米伦(Millon)反应？( )

(A)色氨酸 (B)酪氨酸 (C)苯丙氨酸 (D)组氨酸 (E)精氨酸 10、下列氨基酸中除哪种外都是哺乳动物的必需氨基酸?( )

(A)苯丙氨酸 (B)赖氨酸 (C)酪氨酸 (D)亮氨酸 (E)甲硫氨酸 11、下列哪一种氨基酸侧链基团的pKa值最接近于生理 pH 值?( ) (A)半胱氨酸 (B)谷氨酸 (C)谷氨酰胺 (D)组氨酸 (E)赖氨酸 12、肽键在下列哪个波长具有最大光吸收？( )

(A)215nm (B)260nm (C)280nm (D)340nm (E)以上都不是

13、有一多肽经酸水解后产生等摩尔的Lys，Gly和Ala。如用胰蛋白酶水解该肽，仅发现有游离的Gly和一种二肽。下列多肽的一级结构中，哪一个符合该肽的结构?( ) (A)Gly-Lys-Ala-Lys-Gly-A1a (B)Ala-Lys-Gly (C)Lys-Gly-Ala (D)Gly-Lys-Ala (E)Ala-Gly-Lys

14、下列关于多肽G1u-His-Arg-Val-Lys-Asp的叙述，哪个是错的?( ) (A)在 pH 12 时，在电场中向阳极移动 (B)在 pH 3 时，在电场中向阴极移动 (C)在 pH 5 时，在电场中向阴极移动 (D)在 pH 11 时，在电场中向阴极移动 (E)该多肽的等电点大约在 pH 8

15、测定小肽氨基酸序列的最好方法是( )

(A)2,4-二硝基氟苯法(FDNB法) (B)二甲氨基萘磺酰氯法(DNS-Cl法) (C)氨肽酶法 (D)苯异硫氰酸法(PITC法) (E)羧肽酶法

16、用下列方法测定蛋白质含量，哪一种方法需要完整的肽、肽键?( ) (A)双缩脲反应 (B)凯氏定氮 (C)紫外吸收 (D)茚三酮反应 (E)奈氏试剂 17、下列哪组反应是错误的?( ) (A)葡萄糖——莫利希(Molisch反应)

(B)胆固醇——李-伯(Libermann-Burchard)反应

(C)色氨酸——圾口(Sakaguchi)反应 (D)氨基酸——茚三酮反应 (E)多肽——双缩脲反应 18、Sanger试剂是( )

(A)苯异硫氰酸(异硫氰酸苯酯) (B)2,4-二硝基氟苯 (C)丹磺酰氯 (D)对氯汞苯甲酸 (E)β-巯基乙醇 19、典型的α螺旋是( )

(A)2.610 (B)310 (C)3.613 (D)4.015 (E)4.416 20、下列有关α螺旋的叙述哪个是错误的?( ) (A)分子内的氢键使α螺旋稳定

(B)减弱R基团间不利的相互作用使α螺旋稳定 (C)疏水作用使α螺旋稳定

(D)在某些蛋白质中，α螺旋是二级结构中的一种类型 (E)脯氨酸和甘氨酸残基使α螺旋中断 21、每分子血红蛋白所含铁离子数为( ) (A)1 (B)2 (C)3 (D)4 (E)6 22、每分子血红蛋白可结合氧的分子数为( ) (A)1 (B)2 (C)3 (D)4 (E)6 23、血红蛋白的辅基是( )

(A)血红素A (B)铁原卟啉Ⅵ (C)铁原卟啉Ⅸ (D)铁原卟啉Ⅹ (E)吡啶核苷酸 24、生理状态下，血红蛋白与氧可逆结合的铁离子处于( ) (A)还原性的二价状态 (B)氧化性的三价状态

(C)与氧结合时是三价，去氧后成二价 (D)与氧结合时是二价，去氧后成三价 (E)以上说法都不对

25、血红蛋白的氧合曲线呈( )

(A)双曲线 (B)抛物线 (C)S形曲线 (D)直线 (E)钟罩形 26、血红蛋白的氧合曲线向右移动是由于( )

(A)O2分压的减少 (B)CO2分压的减少 (C)CO2分压的增加 (D)N2分压的增加 (E) pH 值的增加

27、前胰岛素原中信号肽的主要特征是富含哪些氨基酸残基?( ) (A)碱性 (B)酸性 (C)羟基 (D)疏水性 (E)亲水性 28、为了充分还原核糖核酸酶，除了应用β-巯基乙醇外，还需( )

(A)过甲酸 (B)尿素 (C)调 pH 值到碱性 (D)调 pH 值到酸性 (E)加热到50℃ 29、免疫球蛋白是一种( )

(A)糖蛋白 (B)脂蛋白 (C)铁蛋白 (D)铜蛋白 (E)核蛋白 30、下列有关肌球蛋白的叙述哪个是正确的?( )

(A)它是一种需要锌离子的酶 (B)它是一个球形的对称分子

(C)它是一种cAMP的磷酸二酯酶 (D)它是一种与肌动蛋白结合的蛋白质 (E)它的α螺旋含量较低

31、下列氨基酸中哪一个是在前体分子合成后才出现于多肽链中?( ) (A)脯氨酸 (B)赖氨酸 (C)羟脯氨酸 (D)谷氨酰胺 (E)丝氨酸

32、蛋白质的糖基化是翻译后的调控之一，糖基往往与肽链中哪一个氨基酸残基的侧链结合？( )

(A)谷氨酸 (B)赖氨酸 (C)酪氨酸 (D)丝氨酸 (E)甘氨酸 33、煤气中毒主要是因为煤气中的一氧化碳( ) (A)抑制了巯基酶的活性，使巯基酶失活

(B)抑制了胆碱酯酶的活性，使乙酰胆碱堆积，引起神经中毒的症状 (C)和血红蛋白结合后，血红蛋白失去了运输氧的功能，使患者因缺氧而死 (D)抑制了体内所有酶的活性，使代谢反应不能正常进行 (E)以上说法都不对

34、分离纯化下述活性肽：焦谷-组-色-丝-酪-甘-亮-精-脯-甘酰胺的有效方法之一为( ) (A)羧甲基(CM-)纤维素层析

(B)二乙氨基乙基(DEAE-)纤维素层析 (C)葡聚糖G-100凝胶过滤 (D)酸性酒精沉淀 (E)硫酸铵沉淀

35、SDS凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量是根据各种蛋白质( ) (A)在一定 pH 值条件下所带净电荷的不同 (B)分子大小不同 (C)分子极性不同 (D)溶解度不同 (E)以上说法都不对

36、下列哪种方法可得到蛋白质的“指纹”图谱?( ) (A)酸水解，然后凝胶过滤

(B)彻底碱水解并用离子交换层析测定氨基酸的组成 (C)用氨肽酶降解并测定被释放的氨基酸的组成 (D)用胰蛋白酶降解，然后进行纸层析和纸电泳 (E)用2,4-二硝基氟苯处理蛋白质

37、血红蛋白别构作用的本质是其中的铁离子( ) (A)价态发生变化 (B)自旋状态发生变化

(C)与卟啉环氮原子连接的键长发生变化 (D)以上说法都对 (E)以上说法都不对

38、蛋白质一级结构与功能关系的特点是( ) (A)相同氨基酸组成的蛋白质，功能一定相同 (B)一级结构相近的蛋白质，其功能类似性越大 (C)一级结构中任何氨基酸的改变，其生物活性即消失 (D)不同生物来源的同种蛋白质，其一级结构相同 (E)以上都不对

39、在生理 pH 值条件下，具有缓冲作用的氨基酸残基是( ) (A)Tyr (B)Trp (C)His (D)Lys (E)Gly

40、下列氨基酸分子中含有两个不对称碳原子的氨基酸是( ) (A)Pro (B)Tyr (C)Ser (D)Arg (E)Thr 41、维持蛋白质三级结构主要靠( )

(A)氢键 (B)离子键 (C)疏水作用 (D)范德华力 (E)二硫键

42、蛋白质用硫酸铵沉淀后，可选用透析法除去硫酸铵。硫酸铵是否从透析袋中除净，选用下列哪一种试剂检查?( )

(A)茚三酮试剂 (B)奈氏试剂 (C)双缩脲试剂 (D)Folin-酚试剂 (E)斐林试剂 43、将抗体固定在层析柱的载体上，使抗原从流经此柱的蛋白质样品中分离出来，这技术属于( )

(A)吸附层析 (B)离子交换层析 (C)分配层析 (D)亲和层析 (E)凝胶过滤 44、在中性条件下，HbS与HbA相比，HbS的净电荷是( ) (A)增加+2 (B)增加+l (C)不变 (E))减少+2 (E)减少+1

45、一个蛋白质的相对分子质量为70000，由两条α螺旋肽链构成，其分子长度为( ) (A)50nm (B)100nm (C)47.7nm (D)95.4nm (E)36.5nm

46、若用电泳分离Gly-Lys、Asp-Val和Ala-His三种二肽，在下列哪个 pH 值条件下电泳最

为合适?( )

(A) pH 2以下 (B) pH 2~4 (C) PH 7~9 (D) pH 10~12 (E) pH 12以上 47、进行疏水吸附层析时，以下哪种条件比较合理( ) (A)在有机溶剂存在时上柱，低盐溶液洗脱 (B)在有机溶剂存在时上柱，高盐溶液洗脱 (C)低盐条件下上柱，高盐溶液洗脱

(D)高盐溶液上柱，按低盐，水和有机溶剂顺序洗脱 (E)低盐缓冲液上柱，低盐洗脱

48、对一个富含His残基的蛋白质，在使用离子交换层析时应优先考虑( ) (A)严格控制蛋白质上样液的浓度 (B)严格控制盐浓度 (C)严格控制NaCl梯度 (D)严格控制洗脱液的 pH 值 (E)严格控制洗脱液的体积

49、下列有关β折叠的叙述哪个是错误的？( ) (A)球状蛋白质中无β折叠的结构 (B)β折叠靠链间氢健而稳定

(C)它的氢健是肽链的C＝O与N—H间形成的 (D)α-角蛋白可以通过加热处理而转变成β折叠的结构 (E)β折叠有平行的β折叠和反平行的β折叠

50、人工合成肽时，采用下列哪种方法可以活化氨基?( )

(A)加入三乙胺 (B)甲酰化 (C)乙酰化 (D)烷基化 (E)酸化

51、为了测定蛋白质中的二硫键位置，常采用对角线电泳法，问点样时样品应点在滤纸的下列哪个位置?( )

(A)右上角 (B)左上角 (C)右下角 (D)左下角 (E)中央

(二)下列各题均有四个备选答案，其中一个或几个是正确的，回答时以A、B、C、D、E表示。

1、下列氨基酸中，哪些是蛋白质的组分?( )

(1)(2)

(3)(4)

2、下列氨基酸中哪些具有分支的碳氢侧链?( ) (1)缬氨酸 (2)组氨酸 (3)异亮氨酸 (4)色氨酸

3、在生理 pH 值情况下，下列氨基酸中的哪些带负电荷?( ) (1)半胱氨酸 (2)天冬氨酸 (3)赖氨酸 (4)谷氨酸

4、下列关于蛋白质中L-氨基酸之间形成的肽键的叙述，哪些是正确的？( ) (1)具有部分双键的性质 (2)比通常的C-N单键短 (3)通常有一个反式构型 (4)能自由旋转

5、下列关于谷胱甘肽结构的叙述哪些是正确的?( ) (1)有一个α-氨篡 (2)有一个与通常肽键不同的γ-肽键

(3)有一个易氧化的侧链基团 (4)由谷氨酸、胱氨酸和甘氨酸组成的三肽 6、下列有关 PH e-Leu-Ala-Val- Phe-Leu-Lys的叙述哪些是正确的?( ) (1)是一个六肽 (2)是一个碱性多肽 (3)对脂质表面无亲和力 (4)等电点大于8 7、下列哪些是结合蛋白质?( )

(1)黏蛋白 (2)细胞色素C (3)血红蛋白 (4)清蛋白 8、下列哪些蛋白质具有四级结构?( )

(1)血红蛋白 (2)烟草斑纹病毒外壳蛋白 (3)乳酸脱氢酶 (4)肌红蛋白 9、下列关于蛋白质结构的叙述哪些是正确的？( ) (1)二硫键对稳定蛋白质的构象起重要作用

(2)当蛋白质放入水中时，带电荷的氨基酸侧链趋向于排列在分子的外面 (3)蛋白质的一级结构决定高级结构

(4)氨基酸的疏水侧链很少埋在蛋白质分子的内部 10、含有卟啉环的蛋白质是( )

(1)血红蛋白 (2)肌红蛋白 (3)细胞色素 (4)过氧化氢酶 11、下列蛋白质中哪些含有铁离子?( )

(1)细胞色素C (2)血红蛋白 (3)肌红蛋白 (4)过氧化物酶 12、下列有关肌红蛋白的叙述，哪些是正确的？( )

(1)肌红蛋白是由一条多肽链和一个血红素连接而成的紧密球状结构 (2)多肽链含有高比例的α螺旋构象 (3)血红素位于二个组氨酸残基之间

(4)大部分非极性基团位于此球状结构的外部 13、下列图示中的哪些是氢键？( )

(1)(2)

(3) (4)

14、蛋白质变性是由于( )

(1)氢键破坏 (2)肽键断裂 (3)亚基解聚 (4)破坏水化层和中和电荷

15、镰刀形红细胞贫血病患者血红蛋白β-链上第六位的谷氨酸被缬氨酸取代后，将产生哪些变化？( )

(1)在 pH 7.0 电泳时，增加了异常血红蛋白向阳极移动的速度 (2)导致异常脱氧血红蛋白的聚合作用 (3)增加了异常血红蛋白的溶解度 (4)一级结构发生改变

16、下列有关血红蛋白运输氧的叙述哪些是正确的?( ) (1)四个血红素基各自独立地与氧结合，彼此之间并无联系 (2)以血红蛋白结合氧的百分数对氧分压作图，曲线呈S形 (3)氧与血红蛋白的结合能力比一氧化碳强

(4)氧与血红蛋白的结合并不引起血红素中铁离子价数的变化 17、下述原因中哪些会导致血红蛋白与氧亲和力的下降？( ) (1)提高红细胞内2,3-二磷酸甘油酸的水平 (2)酸中毒

(3)提高CO2的水平

(4)一分子氧和脱氧血红蛋白分子四个结合位中的一个结合 18、下列关于γ-免疫球蛋白的叙述哪些是正确的?( ) (1)每一个免疫球蛋白作为抗体分子含有两个与抗原结合的部位

(2)多发性骨髓瘤患者排泄的尿中含有不完整的免疫球蛋白〔本琼氏蛋白)

(3)免疫球蛋白重链和轻链的C端氨基酸序列是恒定的，而N端的氨基酸序列是可变的 (4)使免疫球蛋白肽链连接的惟一化学键具有非共价键的性质

19、图3-2所示的是免疫球蛋白被木瓜蛋白酶水解后形成的两个A片段和一个B片段，就

A片段而言，下列哪些叙述是正确的？( )

(1)含有抗体结合部位 (2)是本琼氏(Bence-Jones)蛋白 (3)含有高变区序列 (4)是重链

20、下列方法中的哪些可使IgG的重链与轻链分开?( ) (1)乙醇胺 (2)胃蛋白酶 (3)木瓜蛋白酶 (4)巯基乙醇 21、打开蛋白质分子中的二硫键( ) (1)可用8mol/L尿素处理 (2)用HCOOH处理 (3)用水解的方法 (4)用HSCH2CH2OH处理 22、蛋白质的别构效应( ) (1)是蛋白质分子普遍存在的现象 (2)总是和蛋白质的四级结构紧密联系的 (3)和蛋白质的四级结构关系不大

(4)有时与蛋白质的四级结构有关，有时无关。

23、实验室合成多肽除了化学合成外，还可以利用酶催化进行酶促合成。目前酶促合成所用的酶类是( )

(1)氨基转移酶 (2)羧基转移酶 (3)蛋白激酶 (4)蛋白水解酶 24、下列有关相对分子质量测定的各项，哪些是正确的?( )

(1)用超离心法测相对分子质量过程中，沉降系数大一倍，相对分子质量也大一倍 (2)多糖类一般没有固定的相对分子质量

(3)从蛋白质的氨基酸组成无法推测蛋白质的相对分子质量 (4)SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳测得的是亚基的相对分子质量

四、问答题

1、某氨基酸溶于 pH 7 的水中，所得氨基酸溶液的 pH 值为6，问此氨基酸的pI是大于6、等于6还是小于6？

2、某氨基酸溶于 pH 7的水中，所得氨基酸溶液的 pH 值为8，问此氨基酸的pI是大于8、等于8还是小于8?

3、根据氨基酸的pK值，指出Gly、Asp、Lys和His在：(1) pH 1.0；(2) pH 2.1；(3) pH 4.0；(4) pH 10 时可能带的静电荷(用-、0或+表示)。

4、(1)一个Ala、Ser、 PH e、Leu、Arg、Asp和His的混合液在 pH 3.9 时进行纸电泳。指出哪些氨基酸向阳极移动?哪些氨基酸向阴极移动?

(2)带相同电荷的氨基酸如Gly和Leu在纸电泳时常常稍能分开，解释其原因。

(3)假如有一个A1a、Val、Glu、Lys和Thr的混合液，在 pH 6.0进行电泳，然后用茚三酮显色。画出电泳后氨基酸的分布图。分别标明向阳极或阴极移动、停留在原点和分不开的氨基酸。

5、以正丁醇：乙酸：水体系为溶剂( pH 4.5)，对下列氨基酸进行纸层析分离，指出下列各组中氨基酸的相对移动速度。(1)Ile、Lys；(2) PH e、Ser；(3)Ala、Val、Leu；(4)Pro、Val；(5)Glu、Asp；(6)Tyr、Ala、Ser、His。

6、用阳离子交换树脂分离下列氨基酸对，用 pH 7.0 的缓冲液洗脱时那种氨基酸先被洗脱下来?

(1)Asp和Lys (2)Arg和Met (3)Glu和Val (4)Gly和Leu (5)Ser和Ala

7、Lys、Arg、Asp、Glu、Tyr和Ala的混合液在高 pH 值时，加到阴离子交换树脂上，用连续递减的 pH 值溶液洗脱时，预测这些氨基酸的洗脱顺序。 8、有一个五肽，它的一级结构式是DRVYH。 (1)正确命名此肽。

(2)请在下列结构式中按该肽的一级结构顺序填上氨基酸残基的侧链结构。

9、比较下列各题两个多肽之间溶解度的大小 (1)[G1y]20和[Glu]20，在 pH 7.0时 (2)[Lys-Ala]3和[ Phe-Met]3，在 pH 7.0 时 (3)[Ala-Ser-Gly]5和[Asn-Ser-His]5，在 pH 9.0 时 (4)[Ala-Asp-Gly]5和[Asn-Ser-His]5, 在 pH 3.0 时

10、以正丁醇：乙酸：水体系为溶剂( pH 4.5)，对下列肽或氨基酸对进行纸层析分离，指出各肽或氨基酸对的相对移动速度(用大于、小于或相近表示)。 (1)Lys-Lys; Lys (2)Leu-Leu-Leu; Leu

(3)Trp-Ile- PH e；Arg-Ile- PH e (4)Cys-Cys-Ser;Ala-Ala-Ser

11、分析下列肽段在 pH 1.9， pH 3.0， pH 6.5和 pH 10.0 下进行纸电泳时的移动方向(分别用下列符号表示：不动[O]，移向阴极[C]，移向阳极[A])。 (1)Lys-Gly-Ala-Gly (2)Lys-Gly-Ala-Glu (3)His-Gly-Ala-Glu (4)Glu-G1y-Ala-Glu (5)Gln-Gly-Ala-Lys

12、如果上题中五个肽的混合物，在Dowex-1(一种阴离子交换树脂)的离子交换柱上以 pH 值从10到1.0连续变化的缓冲系统作洗脱，试分析每种肽洗脱的相对次序。 13、分别指出下列酶能否水解与其对应排列的肽，如能，则指出其水解部位。

肽

(1) Phe-Arg-Pro (2) Phe-Met-Leu

(3)Ala-Gly- Phe (4)Pro-Arg-Met

酶 胰蛋白酶 羧肽酶B

胰凝乳蛋白酶 胰蛋白酶

14、当一种四肽与FDNB反应后，用 6mol/L HCl 水解得 DNP-Val及三种其他氨基酸。当这种四肽用胰蛋白酶水解时形成二种碎片。其中一种碎片用LiBH4 还原后再进行水解，水解液中发现有氨基乙醇和一种与重氮苯磺酸反应生成棕红色的氨基酸。试问在原来的四肽中可能存在哪几种氨基酸，它们的序列怎样？

15、某一肽经酸水解组成分析为5种氨基酸，该肽的N端非常容易环化。经溴化氰处理后得一游离碱性氨基酸，Pauly反应阳性。若用胰蛋白酶作用则得两个肽段：其一为坂口反应阳性，另一个在280nm有强的光吸收，并呈Millon阳性反应。求此肽的氨基酸序列，并指出它的等电点应该是大于、等于或小于?

16、假定有1mmol的五肽，酸水解生成 2mmol谷氨酸，1mmol赖氨酸，没有能够定量回收其他氨基酸。将原来的五肽用胰蛋白酶水解成两个肽段，在 pH 7.0 进行电泳，一个肽段移向阳极，另一个则移向阴极。用 FDNB 处理胰蛋白酶水解的一个肽段，再用酸水解，生成DNP-谷氨酸。用胰凝乳蛋白酶处理原来五肽生成两个肽段及游离谷氨酸。试从上述实验结果写出该五肽的氨基酸序列。

17、用酸水解一种六肽，定量回收得到甘氨酸及另一种氨基酸。用胰蛋白酶处理该肽生成的产物，在不同的层析和电泳系统中均只有一个单一的斑点，但是迁移率与未经处理的六肽不同。用胰凝乳蛋白酶水解原来的六肽，生成的产物中有一游离氨基酸并具有紫外吸收，试从上述实验结果排出该六肽的氨基酸序列。

18、某一多肽抗菌素：(1)彻底酸水解并随后进行氨基酸分析知含有等摩尔的Leu、Orn、 Phe、Pro和Val；(2)此肽的相对分子质量大约为1200；(3)当用羧肽酶处理该肽时，该肽不被水解；(4)该肽用2,4-二硝基氟苯处理，随后完全水解并进行层析仅仅得到游离氨基酸和DNP-δ-Orn

(5)该肽部分水解，随后层析分离并进行序列分析得下列二肽和三肽：Leu- PH e, pH e-Pro, pH e-Pro-Val，Val-Orn-Leu，Orn-Leu, Val-Orn, Pro-Val-Orn。根据以上实验结果推出该肽的氨基酸序列，并说明其理由。

19、根据以下实验结果推断一多肽链的氨基酸序列。

(1)酸水解和氨基酸组成为Ala2，Arg，Lys2，Met， Phe，Ser2。 (2)羧肽酶A水解得一氨基酸为Ala。

(3)胰蛋白酶水解得四个肽段，其氨基酸组成如下：

①A1a，Arg ②Lys， PH e，Ser ③Lys ④Ala，Met，Ser。 (4)溴化氰水解得两个肽段，其氨基酸组成如下： ①Ala, Arg, Lys2, Met, phe, Ser ②Ala, Ser.

(5)嗜热菌蛋白酶水解得两个肽段，其氨基酸组成如下： ①Ala，Arg，Ser ②Ala，Lys2，Met， Phe，Ser。

20、根据以下实验结果排出该肽的氨基酸序列。

(1)氨乙基化后用胰蛋白酶水解得以下肽段，其氨基酸组成分别如下： ①Ala，Arg，Gly，Met， Phe ②2(A E Cys)(A E代表氨乙基) ③A1a，AE Cys， Phe ④Asp，Lys，Tyr。 (2)溴化氰裂解得一肽段，其氨基酸组成如下： Ala2，Asp，Arg，Cys3，Gly，Lys，Met， Phe2，Tyr

(3)胰凝乳蛋白酶水解得三个肽段，其氨基酸组成分别如下：①Ala，Gly，Lys，Met， Phe；②Asp，Cys，Tyr； ③Ala，Arg，Cys2， Phe。

(4)溴化氰加胰蛋白酶处理后得三个肽段，其氨基酸组成分别如下：①Gly，Met ②Ala，Asp，Cys3，Lys， Phe，Tyr； ③Ala，Arg， Phe 21、一个多肽还原后生成两条肽链，序列如下： 链1：Ala-Cys- Phe-Pro-Lys-Arg-Trp-Cys-Arg-Arg-Val-Cys 链2：Cys-Tyr-Cys- Phe-Cys

用嗜热菌蛋白酶水解二硫键完整的天然肽，得到下列肽段：(1)Ala，Cys2，Val；(2)Arg, Lys, phe, Pro；(3)Arg2，Cys2，Trp，Tyr；(4)Cys2, Phe。试定出此天然肽中二硫键的位置。 22、用下列哪种试剂最适合完成以下工作：溴化氰、尿素、β-巯基乙醇、胰蛋白酶、过甲酸、丹磺酰氯(DNS-Cl)、6mol/L 盐酸、茚三酮、苯异硫氰酸(异硫氰酸苯酯)、胰凝乳蛋白酶。 (1)测定一段小肽的氨基酸序列。 (2)鉴定小于10g 肽的N端氨基酸。

(3)使没有二硫键的蛋白质可逆变性。如有二硫键，应加何种试剂？ (4)水解由芳香族氨基酸羧基形成的肽键。 (5)水解由甲硫氨酸羧基形成的肽键。 (6)水解由碱性氨基酸羧基形成的肽键。

23、有一球状蛋白质，在 pH 7 的水溶液中能折叠成一定的空间结构，通常非极性氨基酸侧链位于分子内部形成疏水核，极性氨基酸侧链位于分子外部形成亲水面。

问：(1)Val, Pro, Asp, Lys, Ile和His中哪些氨基酸侧链位于分子内部?哪些氨基酸侧链位于分子外部?

(2)为什么球状蛋白质分子内部和外部都可发现Gly和Ala？

(3)虽然Ser、Thr、Asn和Gln是极性的，为什么它们位于球状蛋白质的分子内部? (4)在球状蛋白质分子的内部还是外部能找到Cys(半胱氨酸)，为什么？

24、血红蛋白(Hb)是由两个α亚基和两个β亚基组成的四聚体，它的α和β亚基的结构很类似于肌红蛋白(Mb)。但是Mb中许多亲水残基在Hb中却被疏水残基取代。

问：(1)这种现象怎样与疏水残基折叠到分子内部的原则相一致？(2)在维持Hb四级结构的作用力方面，你能得出什么结论?

25、一系列球状的单体蛋白质，相对分子质量从10000到100000，随着相对分子质量的增

-7

加，亲水残基与疏水残基的比率将会发生什么变化？

26、人血浆中有三种相对分子质量相近的蛋白质，已用物理方法知道了它们的天然状态。一种是单体，分子呈雪茄形；另一种也是单体，分子接近球状；还有一种是由相同亚基组成的四聚体中的一个亚基；它们的氨基酸组成如表3-1所示。你能根据氨基酸组成推断哪种氨耳酸组成对应于哪种形状的蛋白质吗？为什么?

表3-1 三种血浆蛋白质的氨基酸组成

氨基酸 极性残基 Arg Asn Asp Cys Gln Glu His Lys Ser Thr Trp Tyr 每分子的残基数 蛋白质1 蛋白质2 蛋白质3 12 9 14 7 8 11 4 22 20 15 2 7 4 6 5 2 7 4 2 6 8 5 3 7 7 5 9 6 6 6 4 15 21 11 3 6 氨基酸 非极性残基 Ala Gly Ile Leu Met PH e Pro Val 每分子的残基数 蛋白质1 蛋白质2 蛋白质3 14 9 5 3 7 9 8 16 28 9 16 19 11 15 13 29 25 8 9 7 9 11 10 21 27、有三种未知的蛋白质A、B、C。一种蛋白质主要是α螺旋构象。另一种主要是β折叠构象。还有一种是三股螺旋的胶原蛋白。用氨基酸分析仪测定了每种蛋白质的氨基酸组成。结果如表3-2所示．你能指出哪种蛋白质相应于哪种构象吗？为什么？

表3-2 三种蛋白质的氨基酸组成(摩尔百分数)

蛋白质 Ala Arg Asp Cys Glu Gly His Hypro Ile

A 29.4 0.5 1.3 - 1.0 44.6 0.2 - 0.7

B 5.0 7.2 6.0 11.2 12.1 8.1 0.7 - 2.8

C 10.7 5.0 4.5 - 7.1 33.0 0.4 9.4 0.9

蛋白质 Leu Lys Met PH e Pro Ser Trp Tyr Val

A 0.5 0.3 - 0.5 0.3 12.2 0.2 5.2 2.2

B 6.9 2.3 0.5 2.5 7.5 10.2 1.2 4.2 5.1

C 2.4 3.4 0.8 1.2 12.2 4.3 - 0.4 2.3

28、从热力学上考虑，一个多肽的片段在什么情况下容易形成α螺旋，是完全暴露在水的环境中还是完全埋藏在蛋白质的非极性内部？为什么？

29、α螺旋的稳定性不仅取决于肽链内部的氢键、而且还与氨基酸侧链的性质有关。室温下，在溶液中下列多聚氨基酸哪些能形成α螺旋?哪些能形成其他有规则的结构?哪些能形成无

规则的结构？并说明其理由。

(1)多聚亮氨酸 pH =7 (2) 多聚异亮氨酸 pH =7 (3) 多聚精氨酸 pH ＝7.0 (4) 多聚精氨酸 pH ＝13.0 (5) 多聚谷氨酸 pH ＝1.5 (6) 多聚苏氨酸 pH ＝7.0 (7) 多聚羟脯氨酸 pH ＝7.0

30、假定蛋白质是在 pH 7.0 低离子强度的溶液中，下述蛋白质的哪些氨基酸残基能形 成：(1)α螺旋；(2)β折叠；(3)无规则卷曲；(4)二硫键。

31、不同 pH 值时测定二种多聚氨基酸的旋光度，结果如图3-3所示。(1)解释旋光度急剧

变化的原因。(2)旋光度和二级结构有什么关系?

32、假设某蛋白质含有羧基和氨基各10个，pK1的平均值为2.5。pK2的平均值为8.5。假设10个羧基和10个氨基都能生成盐键，用图表 pH 值和盐键的关系。

33、假设某蛋白质含有10个羧基，平均pK为3.5；2个咪唑基，平均pK为6.0；14个NH3，平均pK为10.0。从 pH 1 开始用Na0H 滴定，试问达到等电点时应有多少个H+ 被滴定掉?画出蛋白质的滴定曲线，并标明等电点的位置。

34、图3-4是由末端没有封闭的一条多肽链组成的蛋白质滴定曲线。(1)列出该蛋白质中所有

+

可能的滴定基团和相应的 pKa 值。(2)估计该蛋白质分子中每一种可滴定的基团有多少？(假设每分子蛋白质中有36个可滴定的基团，而所有的半胱氨酸残基均包含在二硫键中)。(3)

估计这个蛋白质的相对分子质量，并简述理由。

35、有A、B、C三种不同蛋白质，在 pH 7进行电泳，结果如图3-5所示。

若在 pH 7 用中性盐沉淀这三种蛋白质，哪种蛋白质首先沉淀?哪种次之?哪种最后? 36、一些异常血红蛋白(HbD、HbJ、HbN、HbC)和正常血红蛋白(HBA)仅仅是一个氨基酸的

差异。

将上述四种异常血红蛋白与正常血红蛋白在 pH 8.6条件下进行电泳，电泳迁移率如下：

问：a带、b带、c带和d带分别代表哪种异常血红蛋白？ 37、正常人血红蛋白(HbA)的β-链经胰蛋白酶水解可得一肽段为：

Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-Glu-Lys

镰刀状贫血病血红蛋白(HbS)的β-链经胰蛋白酶水解可得一肽段为：

Val-His-Leu-Thr-Pro-Val-Glu-Lys

试讨论：

(1)在 pH 5.0 和 8.0 时，这两个八肽的电泳行为。

(2)若正常的八肽被一个六肽取代，N端的5个氨基酸不变，在 pH 8.0 时，此六肽在电场中不移动，问C端是什么氨基酸才会有这种电泳行为。

各解离基团的pK值如下：末端-NH3+ 7.0，末端-COOH 3.4，咪唑基 6.0，γ-COOH 4.0，ε-NH3+ 10.8。

38、在体外，用下列方法处理，对血红蛋白与氧的亲和力有什么影响? (1) pH 值从7.0增加到7.4

(2)CO2分压从 1000 Pa 增加到 4000Pa (3)O2分压从 6000Pa 下降到 2000Pa

(4)2,3-二磷酸甘油酸的浓度从8×10-4 mol/L 下降到 2×10-4 mol/L (5)α2β2解聚成单个亚基

39、在下面指出的 pH 值，下述蛋白质在电场中将向哪个方向移动?即向阳极(A)、阴极(C)或不动(O)。(1)卵清蛋白，在 pH 5.0；(2)β-乳球蛋白，在 pH 5.0和 7.0; (3)胰凝乳蛋白酶原，在 pH 5.0，9.5和11.

40、下列蛋白质的混合物在什么 pH 值时电泳，分离最为有效?(1)血清清蛋白和血红蛋白；(2)肌红蛋白和胰凝乳蛋白酶原；(3)卵清蛋白、血清清蛋白和脲酶。

41、指出下列蛋白质在分离范围为 5000~400000的凝胶过滤柱上洗脱下来的先后顺序。肌红蛋白、过氧化氢酶、细胞色素C、肌球蛋白、胰凝乳蛋白酶原和血清清蛋白。

42、若细胞色素C，β-乳球蛋白，一种未知蛋白质和血红蛋白用凝胶过滤分离时，其洗脱液体积分别为118、58、37与24ml，试问未知蛋白质的相对分子质量。(假定所有蛋白质都是球形的，相对分子质量都在凝胶过滤的分级分离范围内。)

43、用增加盐离子强度的方法，从指定的离子交换柱上洗脱下列蛋白质，指出它们被洗脱下来的先后顺序，并说明其理由：(1)细胞色素C，溶菌酶，卵清蛋白，肌红蛋白(阴离子交换柱)：(2)细胞色素C，胃蛋白酶，脲酶，血红蛋白(阳离子交换柱)。

44、扼要解释为什么大多数球状蛋白质在溶液中具有下列性质。(1)在低 pH 值时沉淀。(2)当离子强度从零逐渐增加时，其溶解度开始增加，然后下降，最后出现沉淀。(3)在一定的离子强度下，达到等电点 pH 值时，表现出最小的溶解度；(4)加热时沉淀。(5)加入一种可和水混溶的非极性溶剂减小其介质的介电常数，而导致溶解度的减小。(6)如果加入一种非极性强的溶剂、使介电常数大大地下降会导致变性。

45、凝胶过滤和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳这两种分离蛋白质的方法均建筑在分子大小的基础上，而且两种方法均采用交联的多聚物作为支持介质，为什么在凝胶过滤时，相对分子质量小的蛋白质有较长的保留时间，而在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳时，它又“跑”得最快? 46、在一抽提液中含有三种蛋白质，其性质如下：

蛋白质 相对分子质量 等电点 A B C

20000 21000 5000

8.5 5.9 6.0

试设计一个方案来分离纯化这三种蛋白质。

47、有一蛋白质，在某组织内含量较低，很难分离纯化。现已知其相对分子质量，并已有该蛋白质的抗体，问哪些实验方法可以初步证实组织内的确含有该蛋白质?

五、计算题

1、计算下列溶液的 pH 值：(1) 0.1mol/L Gly与0.05mol/L NaOH 的等体积混合液。(2) 0.1mol/L Gly与0.05mol/L HCl 的等体积混合液.

2、(1)欲配制100ml pH 2.4，0.3mol/L 甘氨酸-HCl 缓冲液，需多少质量的甘氨酸(相对分子质量 75.07。pKa1＝2.4，pKa2＝9.6)和多少体积的 1mol/L HCl?

(2)欲配制 100ml pH 9.3，0.3mol/L 甘氨酸-NaOH缓冲液，需多少质量的甘氨酸和多少体积的 1mol/L NaOH?

3、制备 1L pH 3.2，0.1mol/L 甘氨酸缓冲溶液, 需0.1mol/L 甘氨酸盐酸盐(Cl-+H3N-CH2-COOH)和0.1mol/L 甘氨胺(+H3N-CH2-COO-)各多少?

4、应该加多少克 NaOH 到500ml 已经完全质子化的 0.01mol/L 组氨酸溶液中，才能配成 pH 7.0 的缓冲液?(咪唑基 pK＝6.0，NaOH 相对分子质量为40)

5、(1)赖氨酸ε-氨基的 pKa 为10.5，在 pH 9.5 的赖氨酸稀溶液中，ε-氨基中有多少被质子化？(以百分数表示)

(2)谷氨酸γ-羧基的 pKa 为4.3，在 pH 5.0 的谷氨酸稀溶液中，γ-羧基中有多少去质子化?(以百分数表示)

6、根据氨基酸的 pK 值，计算Ala，Glu和Lys 的pI。

7、从袋鼠尾巴的胶原蛋白中分离得到—些脯氨酸的γ-位的氢被某些基团取代的化合物，它们的结构式和各解离基团的 pKa 值如下，计算每种氨基酸的 pI。

氨基酸

基团

pKa

+

α-COOH 2.0

羟脯氨酸

α-NH2

10.5

γ-COOH 3.8 α-COOH 1.9 α-NH2+ γ-NH3+ α-NH2+

氨基脯氨酸

9.8 10.0

α-COOH 1.9

9.9 9.9

巯基脯氨酸

8、0.1mol/L 的谷氨酸溶液处于它的等电点 (1)计算主要等电形式的的谷氨酸的近似浓度。 (2)计算完全质子化形式的谷氨酸的近似浓度。

γ-SH

(3)在溶液中甚至浓度小到几乎没有的，共有多少种形式?

9、将丙氨酸溶液 400ml 调到 pH 8.0，然后向该溶液中加入过量的甲醛。当所得溶液用碱反滴定至 pH 8.0 时，消耗 0.2mol/L NaOH 溶液250ml。问起始溶液中丙氨酸的含量为多少克？

10、一种仅含L-异亮氨酸和L-苯丙氨酸的溶液，在25cm长的旋光管中，25℃测得旋光度为-1.97°。当取此溶液 100ml，调 pH 值至 8.0，并且用过量的甲醛处理后，需要用 0.5mol/L NaOH 66.8ml 方能滴回到 pH 8.0。问原溶液中异亮氨酸和苯丙氨酸的摩尔浓度各为多少? 11、计算下列肽的等电点：

(1)天冬氨酰甘氨酸(末端-COOH pK=2.10，末端-NH3+ pK=9.07，β-COOH pK=4.53) (2)谷胱甘肽(Glu末端-COOH pK=2.12，Gly α-COOH pK=3.53，末端-NH3 pK=8.66，-SH pK=9.62)。

(3)丙氨酰丙氨酰赖氨酰丙氨酸(末端-COOH pK=3.58，末端-NH3+ pK=8.01，ε-NH3+ pK=10.58)。

12、计算 pH 7.0 时，下列十肽所带的净电荷。

Ala-Met- PH e-Glu-Tyr-Val-Leu-Trp-Gly-Ile

13、计算一个大肠杆菌细胞(含 10 个蛋白质分子)中所含的多肽链长度(以nm为单位)。假设每个蛋白质分子平均相对分子质量为40000，并且假设所有的分子都处于α螺旋构象。 14、某一蛋白质的多肽链在一些区段为α螺旋构象，在另一些区段为β构象。该蛋白质的相对分子质量为240000，多肽链外形的长度为 5.06×10cm。试计算α螺旋体占分子的百分之多少?

15、氨基酸残基的平均相对分子质量为120，可溶性蛋白质的平均密度为1.33g/cm3.计算：(1)可溶性蛋白质的平均比容。(2)含有270个氨基酸的蛋白质，其单个分子的质量。(3)这种蛋白质的单个分子所占有的体积。(4)这种蛋白质的一个分子能否放在 10nm 厚的细胞膜内?假设该分子为球形。

16、已知牛血清白蛋白含色氨酸0.58％(按质量计)，色氨酸相对分子质量为204。(1)计算最低相对分子质量(2)用凝胶过滤测得牛血清白蛋白相对分子质量大约为7万，问牛血清白蛋白分子中含几个色氨酸残基？

17、测得一种蛋白质含0.426％铁，计算其最低相对分子质量。一种纯酶按质量算含亮氨酸1.65％和异亮氨酸2.48％，试计算其最低相对分子质量。

18、如果某一纯蛋白质溶液，浓度为1％，在等电点 pH 值时，于0℃测得渗透压力46nm水柱，计算该蛋白质的相对分子质量(假定蛋白质溶液是理想溶液)。

19、大肠杆菌长 2μm，直径 1μm。当它们生长在有乳糖的培养基上，就能合成β-半乳糖苷酶(Mr＝450000)。大肠杆菌细胞的平均密度为1.2g/ml，总质量的14％是可溶性蛋白质，可溶性蛋白质的1％是β-半乳糖苷酶。计算生长在乳糖培养基上的一个大肠杆菌细胞中β-半乳糖苷酶分子的数目。

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