紫外作业指导书

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北京@@@@@@@作业指导书

紫外可见分光光度计

第1版 ZKGX-YQ-SOP-010

编制人/日期： 审核人/日期：

批准人/日期：

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UV2600型紫外分光光度计操作规程

一、开机

1. 打开仪器电源。

2. 打开电脑，点击UV Analyst 进入光谱分析软件。

3. 将仪器端口设置为“Com3”，点击“联机”，软件与仪器联机成功。 二、选择测试模式

根据实验需求选择测试模式。仪器提供的测试模式有“定量测试”、“定性测试”、“动力学测试”、“多波长测试”、“标准曲线”、“脱氧核糖核酸/蛋白质测试”。

【定量测试】在190-1100nm范围内选择所需的测试波长，测定试样在某一波长的吸光度和透射比。 1.参数及设置范围

2.测试步骤

a.在应用程序菜单下，选择“定量测试”，单击。 b.设定测试波长，单击确定。

c.在样品槽内放入参比，单击OA/100%T快捷键。 d.设定标样浓度，按提示放入标样，单击确定。

e.在样品槽内放入待测试样，单击测试键，可在右侧的资料区显示测试结果。 f.完成测试后，可根据需要打印、存盘。

参数 测试波长 标样浓度 浓度因子

测试方式（二种方式任选一种） 样品槽

设置范围 190-1100nm 标准样品的浓度值 吸光度转换为浓度的因子 并行测试、连续测试 全选或任选

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【定性测试】在190-1100nm范围内选择所需的波长范围进行试样的吸光度、透射比或能量方式的波长扫描。可根据需要选择所需的扫描次数、扫描精度、起始波长、终止波长和纵坐标的上下限。完成光谱扫描后，可在屏幕操作界面选择所需的功能，对所获得的测试资料进行分析、处理。 1.其主要功能有：

a.测定波峰和波谷的波长及其相应的吸光度和透射比。 b.显示测试波长范围内所有波长的吸光度（透射比）值资料。 c.将扫描得到的光谱图转换成1-4阶导数光谱。 d.进行光谱的迭加和四则运算。 e.对光谱进行平滑。

f.进行图谱坐标的标尺变换或将显示部分图谱放大。 g.将测试波长范围内的吸光度或透射比资料存盘保存。 h.打印所扫描的光谱或数据。 2.波长扫描参数及设置范围 扫描参数 扫描方式 可从三种方式中任选一种 设置范围 Abs（吸光度） %T（透射比) 能量方式（放大倍数1-6倍） 扫描次数 可选择试样的扫描次数 1-8次

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扫描精度 起始波长 终止波长 坐标下限 坐标上限

3.测试步骤

可选择相邻二次测定的波长间隔 在所建基线波长范围内设置扫描的起始波长 在所建基线波长范围内设置扫描的终止波长 设置吸光度、透射比的坐标下限 设置吸光度或透射比坐标上限 供选择的有0.1, 0.2, 0.5, 1, 2, 5nm 6档 190-110nm 190-110nm 吸光度 -0.1——3.0 透射比 -05——200 吸光度 -0.1——3.0 透射比 -05——200 a.在“应用程序”菜单下单击“定性测试”。

b.设置扫描参数：通过扫描参数设置操作界面，设置扫描方式、扫描次数、 扫描精度、起始波长、终止波长、坐标下限和坐标上限，单击确定键。 c.建立基线：在光度计的样品槽内放入参比，在“附属功能”的菜单下单击 “建立仪器基线”（或单击界面的Scan Baseline键），在对话框内输入起

始波长和终止波长值，单击确定键。

d.在定性分析图谱操作界面，选择A/T及所需的扫面信道，单击。 e.在样品槽内放入待测试样，单击扫面键，即可得到相应的扫描光谱图。 f.待光谱扫描完成后，可根据需要采用相应的功能，对测试资料进行分析处 理，也可存盘打印。

g.如需停止扫描，可按“停止”键，如需返回参数设置界面可按“RESET参 数”键。 4.测试资料的分析处理

a.波峰和波谷吸光度或透射比值测定

用鼠标单击Peak/Vally快捷键。将光标移至波峰位置，单击左键，即可 显示波峰的波长值及相应的吸光度（透射比）值（黄色）。

用鼠标将光标移至波谷位置，单击右键，即可显示波谷的波长值及相应的 吸光度（透射比）值（蓝色）。

注：仪器不会自动识别波峰/谷，打印出来的报告中只根据左右键来区分波峰/谷。

b.数据表

单击该键时，可显示测试波长范围内所有波长相应的吸光度或透射比值。 c.导数光谱

用鼠标将光标移至“数学功能”菜单，单击，再将光标移至“导数光谱”

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单击，然后选择导数光谱的阶数，单击，即可将光谱转换成相应阶数的导数光谱。 d.光谱运算：

用鼠标将光标移至“数学功能”菜单，单击，再将光标移至光谱运算，单击。选择“图谱迭加”，单击，在相应的源信道调入所需进行运算的光谱图，选择加、减、乘、除，按确定键。即可将两个光谱进行加、减、乘或除。在光谱运算屏幕操作界面中，选择“图谱四则运算”单击，在源信道内调入所需进行运算的光谱，按提示输入所需的常数值，选择“+”、“-”、“*”或“/”，即可将原光谱加、减、乘或除某一常数值。 e.光谱平滑

用鼠标将光标移至“数学功能”菜单单击，再将光标移至“光谱平滑”单击。即可对原有的光谱进行平滑处理。 f.坐标标尺变换

用鼠标将需要更换的纵坐标和横坐标端点的坐标值双击，输入新的坐标值，单击，回车，即可将原来的坐标标尺变换为新的坐标标尺。 g.显示部分图谱放大

按鼠标左键，画出所需显示部分的图谱，单击界面Zoom快捷键，即可将部分图谱放大。 h.A/T%转换

单击界面的A或T%，即可进行A/T%转换。

【动力学测试】动力学测试的功能可使您在190-1100nm范围内选择某一测试波长进行单波长的吸光度或透射比的时间扫描，建立吸光度（透射比）——时间曲线。其扫描时间、采样间隔及延时时间可任选。 1.参数及设置范围 参数 测试波长

扫描时间（需扫描的总时间）

采样时间（相邻二次测定的时间间隔） 吸光度（透射比）坐标上限 吸光度（透射比）坐标下限 浓度因子 浓度单位

设置范围 190-1100nm ＞0秒 ≥1秒

吸光度 -0.1——3.0 透射比 -0.5——200 由已知样品通过一点法求得 由用户自定义

延时时间（从按开始键到正式开始扫描的延时时间） ≥0秒

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2.测试步骤

a.在应用程序菜单下，选择“动力学测试”单击。 b.设定测试波长，单击确定。

c.在样品槽内放入参比，单击0Abs/100%T快捷键。

d.设置时间扫描参数：扫描时间、采样间隔、延时时间、坐标上下限、浓度因子和浓度单位。

e.在样品槽内放入试样，按开始键，开始进行动力学测试。

f.完成测试后，屏幕界面可显示吸光度（透射比）——时间扫描曲线，也可按界面上“数据表”键，显示所有的测试资料，可根据需要打印或保存图谱和测试。如需终止测试可按停止键。

【多波长测试】可根据需要测定不多于32个波长处的吸光度或透射比值。 1.参数及设置范围

参数 测试波长 测试方式

2.测试步骤

a在应用程序菜单下选择多波长测试，单击。 b.在多波长测试操作界面，设置测试波长数。 c.输入测试波长，单击回车。 d.选择测试方式手动，单击测试键。

e.在样品槽内放入参比，单击仪器波长设置快捷键，设置测试波长，单击确定。 f.在样品槽内放入待测试样，双击对应测试波长的吸光度和透过率栏，即可记录该波长处的吸光度和透射比值。

g.重复e、f步骤，记录其他测定波长处的吸光度和透射比值。 h.完成测试后，可根据需要进行打印或存盘。

【标准曲线】建立设定单波长的吸光度——浓度曲线。最多可设置8个标准样品点，并按需要选择曲线的类型。其曲线类型有：

线性曲线：可由标准样品作出线性曲线，并显示每个标准样品的吸光度和浓度值及其曲线方程和相关系数。

线性过零点：可由标准样品作出校正后过原点的线性曲线，并显示每个标准样品的吸光度和浓度值，以及曲线方程和相关系数。

分段拟合：可将有标准样品作出的曲线分段拟合，并显示每个标准样品的吸光度和浓度值。

二项式拟合：可将标准样品作出的曲线拟合呈二次曲线，并显示每个标准样品的吸光度和浓度值，以及二次项、一次项和常数项的系数。

设置范围

1-32（190-1100nm范围内） Abs/%Trans

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1.参数及设置范围 参数 测试波长 样品数目 浓度单位 2.测试步骤

在应用程序菜单下，选择“标准曲线”，单击。 设定测试波长，单击确定键。 设定标准样品数和浓度单位。 在工作表中键入各标样的浓度值。

在样品槽内放入参比，单击0Abs/100%T快捷键。

在样品槽内依次放入标准样品，双击对应的吸光度栏，即可记录该标样的吸光度值。

按绘图键，从标准曲线图谱屏幕操作界面，选择所需的曲线类型，单击，即可得到相应的曲线图以及曲线方程、吸光度、浓度

点击左侧主功能栏中的“核酸测量”即可进入核酸测量界面。 1. 根据实验要求，在“设置”设定检测参数。

2. 在样品室内参比及检测光路同时放入装有空白溶液的比色皿。 3. 点击“空白”，以扣除该波长中空白溶液的背景吸收。

4. 将检测光路中的空白溶液换成待测样品，点击“测量”得到230nm、260nm、280nm和320 的吸光度值同时计算出A260/A280、A260/A230和样品浓度。 5. 点击“保存”并选择保存路径即可保存测量结果。 【蛋白质测量】

1. 点击左侧主功能栏中的“蛋白质测量”即可进入蛋白质测量界面。 2. 根据实验要求，在“设置”设定检测参数。

3. 在样品室内参比及检测光路同时放入装有空白溶液的比色皿。 4. 点击“空白”，以扣除该波长中空白溶液的背景吸收

5. 将检测光路中的空白溶液换成待测样品，点击“测量”，仪器会按照设定好的计算方式和浓度计算方法计算出浓度。 6. 样品测量完毕后，点击“结束”生成结果文件。 7. 点击“保存”并选择保存路径即可保存测量结果。 三、关机

设置范围 190——1100 2-8

mg、μg、μg/ml

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将比色皿中的溶液倒尽，然后用蒸馏水或有机溶剂冲洗比色皿至干净，倒立晾干。关电源将干燥剂放入样品室内，盖上防尘罩，做好使用登记，得到管理老师认可方可离开。 四、注意事项：

1. 在光谱线校正过程中光度计状态窗口的读数变化，如测定过程中的改变切换波长，必须重新进行基线校正。

2. 光谱图像要保存的，一定要保存，否定软件关闭后会丢失。 3. 此色皿光亮面一定要用擦镜纸，小心划伤。

4. 先用两个空白溶液，校正吸光度，用一个供试品取代一个空白溶液，测定吸光度。

5. 一般空白放里面一个，供试样品放外面一个。

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