广东地区β地中海贫血的基因分析与临床观察

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临床血液学杂志 20 0 8年 1第 2月 1卷第 1期

5

I床 I台

研

究X -

广东地区』地中海贫血的基因分析与临床观察 3'-

张力

区小冰余一平

[要]目的：究广东地区 9例临床诊断为 p中海贫血 (地贫 )儿的分子缺陷，简要探讨 p地贫摘 研 l地 p患并基因型与表现型之间的关系。方法：用 P R,片杂交，光扫描技术， p贫患儿进行 a及 p蛋白的基因运 C芯荧对地珠 分析，并对其临床表现进行观察。结果：广东地区口地贫基因突变可见 8种类型：C 4一4, V -I 6 4① D l 2 I S 1一 5, T Ab x2, D1, D7 - 2( A) 1 6 C 2 - 8 C 7 - 2+ T)其结构比依次为 3 . , 4 3, 5 3, AT o - 8 C 7 C 17+, E 2, D 72, D 17 ( 3, 4 7 2 . l . l .%, ., ., .以及 0 8。其中重型 1贫可见 l 53 4 8 2 4 2 4 . 3地 5种基因组合形式；基因突变类型不同导致临②

床表现不同， AT o一2 T Ab x 8及 Hb的纯合子，重杂合子以及复合 d地贫者表现为中间型。结论： C 4—4, E双① D1 2I -I 5, AT o一 8是广东人及中国人中最常见的 1贫基因突变类型； 1地贫的基因突变类型与其临 VS 1一6 4 T Ab x 2 3地②3床表现有着密切的关系。 [关键词]地中海贫血；因芯片 基[图分类号] R 5 .中 566[献标志码] A文 [章编号] l 0— 8 6 2 0 )卜0 0—3文 0 42 0 ( 0 8 0 0 5 0

M o e u a n lni a h r c e itc f l c l r a d c i c lc a a t r s i s o—

t a a s m i n g ng o r v nc h l s e a i ua d ng p o i eZH A N G o U i o i YU pi g Li X a b ng Yi n

( p rm e fHe a oo De a t nto m t l gy,G u ng ou Ch l e S H o pia,G u ng h a Zh idr n s tl a z ou, 1 2 Chi a) 5 01 0, n

Abta t

Obetv: n lz h lc lra n r l iso一taa smi n 9 no eeB h ls e a sr c j cie To a ay et emoe ua b o mai e f1 h ls e ai Ca t n s—t aa smi t 3 lc i rn ( 81 h lse atat n 31 h lse i m ao s)a d su yt er lt n hp b t e e o y ea d h l e 5 一t aa s mi r i a d3 一t aa sm a j r d 3 s 3 n t d h eai s i ewe n g n tp n op no yp f 3t a s m i M eho Po y e a e c i e ci n, ir r a he t e o -hals e a. t d: l m r s han r a to m c oa r y hybrdia in nd fu e c nt c nn n i z to a l or s e s a i g

w r sd t a ay e n lbng n r a i t n R s l: E g t i e e t tt n r ie t i mo gt e e eu e O n l a d1 o i e eo g nz i . eut① ih f rn a i s zd 3 g ao df mu o wee d n ie a n fd hp te t t 3 t aa s mi n Gu n Do g rvn e n mey CD4— 2 I ainswi 1 h lse a a g n p o ic . a l h一 i 14, V 1一 6 4 TATAb x 8,CD1, I 5, o一2 7C l 2 ( A ) 3 6,CD2—2 n D7一7+,1 2 E 7 8 a d CD7一7 (+ T ) l 2,wi h r q e c is 3 . ,2 . ,l . , t t e f e u n ee 4 7 h 43 53

l . ,4 8,2 4,2 4 a d0 8 rs e t ey 53 . . . n .% e p ci l.② I 3 1 t aa smi ma r,t eh mo y o e a d d a v n 3一 h l e a j s h o z g ts n u l 3 s o h tr z g tso eeo y o e fTATAb x 8 a d1 6a l a h s ain sc mpia e t—taa sm i m uain a o一2 n E 2 swel sto ep te t o l td wi a h ls e a 3 c h tto sh d

a l

e l i l o rea dwe e ee t Ob一taa smi itr da .C n ls n① T et re1 h l smi d r i c us n r tce t e1 h l e a n eme i mi cn ac d d 3 s s o cui: h h e一taa e a o 3 smu ain tto sCD4一4,I -—6 4 a d TATAb x 8 wee t emo tc mmo tt n i ie e② Th e o l 2 VS 1 5 n o一2 r h s o n mu ai n Chn s. o egn—t p so一t aa smi r so itd wih p e o y e . y e f1 h lse aaea s cae t h n t p s 3K e r s G t ls e i M ir r a y wo d — haa s m a; c oa r y

口地中海贫血 (一口地贫 )是一种由于 1蛋白基 3珠

了研究。

因突变使 1珠蛋白肽链合成速率降低所致的遗传 3病。目前全世界已发现超过 1 0种的 1珠蛋白基 5 3

1资料与方法 1 1一般资料 .

因突变，中国人中发现了约 2种： 3贫基因在 1。1地有高度的异质性，突变类型的分布有明显的种族其与地域差异，而且不同的基因突变可导致不同的临床表现。为了进一步阐明广东地区 1地贫基因的 3突变类型及频率，以及 1地贫基因型与表现型之间 3的关系，我们应用基因芯片技术，广东地区 5对 8例轻型 1贫， 3例重型及中间型 1贫患儿的 3地 3 3地 DNA样本进行了 a及 G蛋白基因突变检测，珠并

1 1 1标本来源根据临床表现，液学检查及 . .血血红蛋白电泳诊断的 5 8例轻型 G地贫，3例重型 3及中间型 G地贫患儿，年龄 7月~ 1 1岁， 6男 9例， 女 2例，为广东籍人， 2均汉族，间无亲缘关系。其 1 1 2样本 D .. NA的抽提 D NA抽提试剂盒采用德国 I v tk公司的 I vs r p n Blo iiKi ni e n io b S i o d M n t

血液抽提试剂盒，试剂盒抽提外周血白细胞按DN A。

对3 3例重型及中间型 G贫患儿的临床表现进行地基金项目：东省医学科学技术研究基金资助项目 ( o

广 NA 2 36 8) 00 5

1 2方法 .

1 2 1常规血液学检查红细胞计数，红蛋白 . .血 量，在美国产 C l D n 1 0 el y 7 0血细胞分析仪上进行 测定，织红细胞计数按标准方法进行。网广州市儿童医院血液室 (州， l l 0广 502 )

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J u n lo iia maoo y,a 0, l2 o r a fCl c lHe t lg J n 2 08 Vo 1 No1 n

12 2血红蛋白电泳采用琼脂糖凝胶电泳， ..在

9。 0 S 6。 5 S 7℃ 9 ,共 3 4C 4 , 2C 4 , 2 0 s一 5个循环，最后置于 7。 n。 2C 5 mi

美国 He n l a公司出产的全自动快速电泳分析系统 e( P )进行。 RE上

1 2 3 3杂交 .. .

取各 2“ C产物混合，入 6 1 R P加

1 2 3基因芯片分析 .. 1 2 3 1引物设计引物设计根据一一缸一 ... ,a,一 a缺失 D NA片段的范围以及 Hb S与 C

“杂交液，匀后 9℃变性 3mi,速插入冰浴 3 1混 4 n迅

mi, n然后将全部液体加到芯片点样区，上盖玻盖片，入杂交仓， 4。育 1h放于 8C温 。取出芯片后，用

Hb QS的突变位置，我们为一一S E计了引物 设 s/,一 a 3 A4为 设计了引物 Tl 1 T1 1 l/ l r与 S/ l R l为一a 设计了引物 T1 2 T1 2 1 Tl 1 n,。 1/ 1 r与 S/ 1 R 2为 Hb S及 Hb S设计了引物 2 T1 2 n, C Q P 24P 21为 l 1s/ 1a, 1种 0珠蛋白基因突变 ( D 1 C 4—4 2, CD37, CD71 7— 2(+ A ), CD7— 2(+ T ), 17H bE, CD 2— 8, I S I 1, V S I 5,一 8, CD 1 72 V -一 I _ - 2 7,

d H O冲去盖玻片， d 放入 3 × S C缓冲液中 5ml 1 S洗 5mi。 n

1 2 3 4荧光扫描和结果分析用 S a ry . .. cn Ara

50 0 0扫描仪，设定合适的扫描精度扫描芯片，上用海博星基因芯片公司编辑的 Ge eC i件根据 n hp软芯片

C 5荧光信号的有无，弱及位置组合来判定 y强突变类型。2结果

I _1 6 4)计了引物 P s/ 2 2 VS 1— 5设 2 l P 0 a与 P 5 s 2 s/ P 51 2 a,所有引物均用 C 5荧光标记。 y 1 2 3 2芯片点样方式每张芯片包括一一旺， . . . 一

2 1检测一一旺 .

引物对 S/ 3 A4扩增~一 s缺失型 a地中海贫 E 血基因，扩增产物为 4 0b 2 p的 D NA片段。22检测一 a .

a一，一a缺失型基因探针， C Hb S及 Hb QS突

变探针， 1 0蛋白基因突变探针及其正常对照 l种珠

探针，具体排列见图 1。0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

引物对 T1 l l/T1 l l r扩增一a 缺失型基因， 产物为 2Kb的 D NA片段，物对 S/T 1 R l引 1 1 1 n可从正常或右缺的基因扩增出一条 2 4 b 1 p的片

阳性荧光对照0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

段，不能从一一s及~ a得到扩增产物，为但 E 作一 a。 的正常内对照引物。23检测一 a .

阴性荧光对照●●●●● o o o o o●●●●● 0 0 o 0 0

C D4/2 f T丌 J 14 — C●●●●● 0 0 0 0 0

一8《 2 A—’ GJ●●●●● 0 0 0 0 0

引物对 T1 2 T1 2扩增一a 1/ 1 r。失型基因，缺产物为 1 9Kb的 DNA片段， .引物对 S/ 1 R 2可 2 T1 2 n从正常或左缺的基因扩增出一条 4 0 b 0 p的片段，

C 7《 D3 G—’ TJ●●●●● 0 0 0 0 0

C 1《 D 7 G—’ AJ●●●●● 0 0 0 0 0

CD7 2 f A J 1 + ●●●●● 0 0 0 0 0

IS I 6 4 f _ TJ V—I一 5 C . ●●●●● 0 0 0 0 0

但不能从一一旺及一a得到扩增产物，为一a 。作的正常内对照引物。2 4 Hb . CS及 Hb QS

CD7 2+ 1 f T J●●●●● 0 0 0 0 0

Hb CS

●●

●●

● 0 0 0 0 0一

引物对 P 2 4 1 a 1 s/P 2 1扩增 a基因外显子Ⅲ中。 段包含 Hb S及 Hb C Qs突变的 2 0 b 0 p的 D NA片段。

C 6 G _ D 2 f .A J●●●●● 0 0 0 0 0

Hb QS●●●●● 0 0 0 0 0S A E——一

2 5检测口珠蛋白基因突变 .

CD2/8《 C J 72+ ●●●●● 0 0 0 0 0

引物对 P s/ 2 2,P 5 s P 5 l扩增二段 0 2 l P 0 a 2 s/ 2 a● 0 0 0 0 0

●●●●

珠蛋白基因片段，度分别为 3 0b,2 8b,包长 0 p 9 p含中国人 l种 J珠蛋白基因突变。 1 3 2 6杂交结果判定 .在一对探针中，当缺陷型探针荧光信号值与同位点野生型探针荧光信号值之比在 0 4以下时， . :

IS 1 1 G _ T J V一— f . ●●●●● 0 0 0 0 0

一

a 37

●●

●●● 0 0 0 0 0

IS V一1 5《— G_ .C J ●野生型探针 0相应缺陷型探针

—a一

图 1地贫芯片点样矩阵

表示该对探针所检测的位点没有发生缺陷，当其比值在 0 4与 2 5之间时，明该对探针所检测的位 . .表点发生杂合子型缺陷，其比值在 2 5以上时，当 .表

12 3 2 P R条件反应分 4管进行， ... C每管总反应体系为 2“,分别包含引物对 s/ 5 1 3 A4与P 24 1 a ( Tl 1 1 s/P 2 l或 l/Tl l与 Tl 2 Tl 2, lr l/ lr或 S/Tl 1 n 1 l R 1与￥/ l Rn, P s/ 2 2 2 T1 2 2或 2 l P 0 a与

明该对探针所检测的位点发生纯合子缺陷。2 7 B基因分析结果 .我们在 5 8例轻型口贫， 3例重型及中间型 p地 3

P 5s P 5 1) 2 1d H2 4 3 12 C 2 s/ 2 a各 , d O .,×P R缓冲液 1 . 1 d P 1模板 DNA2 1 L a 2 5, NT 2, , AT q酶( a aa司 ) .“。 9^变性 5 mi,后 T kr公 0 2 1 4C预 n然

地贫患儿的 1 4条染色体上一共检测到 8种突变 2类型，体结果见表 1具。

2 8重型口地贫基因型与其临床表现的关系 .

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临床血液学杂志 2 0 0 8年 1月第 2 1卷第 1期

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重型 8贫临床表现：儿出生 3 4个月出地患~ 现贫血症状，行性加重，进 Hb波动于 3~5/L, 0 Og患儿生长发育不良，明显的地贫面容，、肿大有肝脾

Ⅱ一6 4 4 3 ) 5 . (2,TATAb x 8( 5 3 ) 3种 o 2 1 .这

p蛋白基因突变占广东地区地贫基因突变型的珠7 .,是广东人群中主要的 8地贫基因突变类 43

和地贫骨胳改变，依靠输血维持生命。中间型 l需 3 地贫临床表现：儿出生后 2患~4岁出现贫血症状，

型。与中国其他地区相比较，广东地区的 T ATAb x2 o 8突变率要明显高于其他各省区。 同时，本次研究中，们还检测到 3例 ( .在我 24 )C 2—8突变，种突变在中国人中属于稀有突 D 72此变。以上研究结果对在广东地区开展 l地贫基因 3

Hb可维持在 6/L以上，需输血或仅需偶尔 5g不输血。3 3例重型 l贫中检出 1 3地 5种基因型组合形式，根据以上诊断标准，型及中间型 l地贫不重 3同基因型组合形式其表现型与临床表现的比较具体见表 2。表 1 9例 P地贫染色体基因检测结果 1

分析及产前诊断有很高实用价值。 重型地贫由于 p因的缺陷使体内 p链合成基减少或消失，导致 a: l出现不平衡，常合成的 3链正

a无相应的链与之结合成 a ( A )链 Hb四聚体，而游离于红细胞内形成 a四聚体，而形成 a包进

涵体，包涵体附着于红细胞膜上，此即影响红细胞的分化成熟，可使红细胞膜受损，成红细胞无又造效生成和严重的溶血，是造成重型 l贫临床表这 3地现的分子病理生理学基础。 C 1 4, D7— 2。。 D4— 2 C 1 7,

C 2— 8突变改变了基因的正常阅读框架，I S D 72 V一Ⅱ一6 4突变影响 RNA的加工， D1 5 C 7突变造成无

意义的密码子突变，均可导致 l完全不能合成的 3链8地贫。而 T。 ATAb x

2突变只影响转录的效 o 8

果，变基因仍可转录正常的 mRNA,E突 3 l突变激活隐蔽的 mRNA前体异常切接位点，能合成部仍分 p孙 mRNA,以这 2种基因突变导致链能 E的所表 2 3 3例重型 P地贫基因突变类型与临床表现的关系

部分合成的地贫， a:链的不平衡现象较轻，其 临床表现也应较轻。从本文的临床资料可看出，这 2种突变的纯合子，混合杂合子，以及复合其他 l突 3变的混合杂合子的临床表现较轻，现为中间型 l表 3 地贫。中间型 l贫是一类重要的地贫类型，占 3地约 地贫患者总数的 1。这类患者除了珠蛋白 O 基因发生突变外，同时还涉及到 a和 ( )或 7珠蛋白基因及珠蛋白调控区的异常㈤。本次研究中，们我

p基因型

a基因型

合计

在 3 3例重型 l地贫患儿中检测到 4例 ( 2 1 3 1 .贫。

)

同时复合有 a地贫，临床表现均为中间型口地其可见，地贫是一种高度异质性的遗传病，儿 3 l患的临床表现取决于其基因型的表达。广东是 l地 3贫的高发区，因突变类型复杂，中国其他地区 l基与 3

地贫的基因突变类型存在着一定差异， 8地贫同且时复合 a地贫的发生率也较高。应用传统的地贫分子诊断技术， a地贫与 8贫需分别检测，地费时费力，利于地贫的快速基因诊断。基因芯片技术不是近年来具有重大影响的科技进展之一，特别是在地贫的分子诊断方面有非常广阔的应用前景：。 在本次研究中，们应用基因芯片技术，中国人我将中常见的 3缺失型，种 2种非缺失型 a地贫探针及 1种口蛋白基因点突变探针固定于同一张芯片 1珠3讨论

表面，同时检测 a及 8蛋白基因的异常。这对可珠 ) VS,I一

本次研究结果表明： D4 -2 3 . C 14 ( 4 7

p贫分子缺陷遗传机理的认识，地以及对贫进地

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J ur a fClnc lHe tlg J n 2 0 go 1No 1 o n lo iia maoo y, a 0 8, 12

骨髓生异常综合征线粒体

呼吸链酶复合体的变化增胡晓静丛雅琴舒明琴冯进波。靳红姜玉杰 [要]目的：究骨髓增生异常综合征 (摘 研 MDS患者骨髓单个核细胞线粒体呼吸链的功能变化并分析其与 ) MD S的关系。方法：测定 2 6例 MD S患者与 1例骨髓象正常者的单个核细胞线粒体呼吸链酶复合体 I、、 OⅢⅣ的活性。结果： S患者呼吸链酶复合体 I、、的活性明显低于对照组 (P< O 0 )线粒体呼吸链酶复合体 MDⅢⅣ .5; I、的活性在 R B I、 AE -Ⅲ AE - R BⅡ组与 R R S组的差异无统计学意义 ( P> O0 )而酶复合体Ⅳ的活性 A、 AR均。5,在 R B I、 AE - AE - R BⅡ组较 R R S组高，异有统计学意义 (< O0 ) A、 AR差 P。 5。结论：粒体呼吸链酶复合体的活线性在 MD S患者中降低，能与 MD可 S的病态造血及无效造血有关。 [关键词]骨髓增生异常综合征；粒体；吸链酶复合体线呼[图分类号] R 5。中 513[献标志码] A文 [文章编号] 1 0—8 6 2 0 ) 10 0—3 0 42 0 ( 0 80—0 80

Th ha e o io ho r a e p r t r h i o pl x i a i nt t e c ng f m t c nd i lr s i a o y c a n c m e n p te s wihm y l d s l s i y dr m e e o y p a tc s n oH U Xi o i g a jn C ONG a i SHU M i g i Y qn n qn FENG i b。 J J n o N n JI Ho g ANG j e Yu i(De a t e to e aoo y, Qi o pt lo h n d n nv r i p rm n f H m t lg l H s ia fS a g o g U ie st u y,Jn n 2 0 1, Ch— ia, 5 0 2 i n; p rme to iia a o ao y Qi s ia fS a d n i e st;La o ao y o a De a t n fCl c llb r t r, l Ho p tlo h n o g Unv r iy。 b rt r f n u Ca do a c 1rDie s s r iv s u a sa e,Qi s ia fS a d n ie st ) l

Ho pt l h n o g Un v riy u oAb ta t Obetv: n e t aet efn t n o tc o d ilrs i tr h i n b n ro n n— src j cieTo iv si t h u ci fmio h n r e pr o yc an i o ema r w mo o u g o a ace rc l(BM M N C) o y 1dys a tc y la e l fm eo p1s i s ndr m e( DS) a t r l ins i wih M DS. e h d: c iiis ofr— o M nd is eato h p t M t o A tv te e

s iao yc an c mpe e, Ia d I r x m ie nBM M NC fo 2 ain swihM DS a d 1 o ma o— prt r h i o lx s I U n V we ee a n di r m 6p te t t n 0n r l n c to sReut Acii e frs i t r h i o lx s, I n i r i. s l: tvt so e pr o yc an c mpe e I U i a a d I n BM M NC we esg iia t o ri DS V r inf nl lwe n M c ypa int h n t ti r a ontol( P< O 5) Ac or i g t HO ls iia in, c i te e pia o y c i te s t a ha n no m lc r s。0。 c dn oW ca sfc to a tviis ofr s r t r han

c mp e e I、 I a d I n B MNC wee sg ii n l o r i DS RAE -I, o lx s U n i M V r infc ty lwe n M a B RAEⅡ a d RA, B- n RARS t a h n n r l o tos o ma c n r l(P< O 0 ) Aciiiso e pr tr h i o pe e I n Ii y eRAEB 。 5。 tvt frs i o yc anc m lx s a d U nt p e a -I, RAEBⅡ a d - nt p y e RA、 RARS s o dn inf a c i ee c (P> 0 0 ) u h ciiis o epr tr h i o lx sI h we osg ii n edf rn e c f。 5,b tt ea t t, f s iao yc an c

mpe e v e r V wa inf a tyhg e n M DS RAEB I, ssg ic n l ih ri i - RAEBⅡ ta - h n RA, RARS(P< O 0 ) Co cu in: d c d a t iis。 5。 n lso Re u e ci t v eofr s ia or han o plxe a e r lt d t s l s i mat po e i nd i e f c i m a op e i。 e p r t y c i c m e sm y b ea e o dy p a tc he o is sa n fe tvehe t oissKe r s M y 1 y wo d eody p a tc s n om e;M io ho ra; Re pia or han c s 1 s i y dr t c nd i s r t y c i om plx e

山东大学齐鲁医院血液科 (南， 5 0 2济 20 1)山东大学齐鲁医院临床检验科。东大学齐鲁医院心血管中心实验室山通讯作者：雅琴， maly qn o g 1 3 c m丛 E- i: a ic n@ 6。 o

行快速全面基因诊断有重要的意义。

a e y hr d nd r t oi pr c s a op oss n Tha pa int e ur or p t i i i te s

参考文献[] wE THE I , I G B 1 A RA D J c G J。Th a semi L E e h l sa a t a sn rme[] te fr: l k el c neLd y do sJ。4h dOxod Ba w lS i c t, c e2 01: 0 1— 1 0。 7

wi h l smi I] l d 2 0,6 2 0— 2 1. t ta se a-。Bo,0 0 9: 6 6 h a J o 62PJ LGW L Y.Bea h ls a m i t-t a a s e a I] H0 ,HAL ,IU0 - si t r e a: i i os i l o it nty o r dc n e m di s t p s b e c nss e l t p e it Phe—

n tp rm g n tp[] B Hamao, 19, oy efo eoy e J? rJ e tl 9 81 0:70— 7 0 8。

[]张之南，编。血液病诊断与疗效标准[]第 2版， 2主 M .北京：学出版社， 9 8 4— 5。科 19:9 9

[]徐葵，曾瑞萍。对 12例 B中

海贫血基因携带者进 6 4地

I] S - 3 TYLANO J t I SEA,uI EK, AM I VMS e a.Mo,t1 —l c l h a t rz ton o e uarc ar c e ia i f glbi ne m u a ins i o n ge t to np te s w ih 8 t ls e i nt r e a n s a int t 一 haa s m a i e m di i out c na h hi

行缺失型 a地中海贫血 1因分析[]中华血液学杂基 J.志， 9 9,0( ) 2 6 2 7 i 9 2 4:0— O.t .[] CHANG K, W 0NG M S, CH AN T K, e a1 A 7

I] r e tl 9 8 7: 5— 3 3 -。B Hama,1 8, 0 3 7 j J o 6。r] PENS 4 RI P,P ORNP AN S,S URAIH,e l A o— ta。 c rr lton o e yt r ki tc ea i f r h o ne is, i fe tve e y hr oiss, ne fc i r t op e i

taase aaryfrS uhat i I] r e h lsami ra o o tes As j .B Ha— a- Jm o ol 2 4,1 t, 00 24:2 32— 23 9。

(稿日期： 0 60 - 7收 2 0— 32 )

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/cdz1.html