纤维素酶酶活的测定方法
更新时间:2023-04-20 16:01:01 阅读量: 实用文档 文档下载
*33*年第"-期中国饲料
—*-—
纤维素酶酶活的测定方法
河南省科学院生物研究所河南省饲料产品质量监督检验站
刘德海陈小鸽
杨玉华
安明理
饲用纤维素酶在饲料工业中已普及应用,对其质量检测显得日益重要。纤维素酶是一种复合酶,按作用底物的能力划分为两部分,一部分是对棉花纤维素能起催化水解作用的酶,称为!"酶;另一部分是对羧甲基纤维素钠(#$%!&!)起水解作用的酶,称为!’酶。据此,一般采用两种测定方法,一种是适用于!(酶的!&!法,另一种是适用于!"酶的滤纸法。下面就此两种方法作一介绍。
"
!&!(羧甲基纤维素)法")"材料")")"饲用纤维素酶由河南省科学院生物研
究所提供。
")")*试剂磷酸氢二钠、
柠檬酸、羧甲基纤维素、+,,%二硝基水杨酸、氢氧化钠、酒石酸钾钠、亚硫酸钠、苯酚。")")+仪器
-*"型分光光度计、
恒温水浴锅、./0%*酸度计、
秒表。")")1
试剂配制")")1)"2/,)3柠檬酸缓冲液制取3)*45678
磷酸氢二钠液(称取-)"9:磷酸氢二钠溶解于蒸馏水中,定容至"3348)和3)"45678的柠檬酸液*)":柠檬酸溶解于蒸馏水中,定容至"3348),取磷酸氢二钠液*1)+48、柠檬酸液*,)-48混匀,用精密酸度计测至2/值为,)3。")")1)*羧甲基纤维素溶液准确称取*)3:羧甲基纤维素钠盐溶于*3348水中,沸水浴中加热至溶化,过滤,取滤液"3348,加柠檬酸缓冲液*3
48、
蒸馏水1348,混匀,贮存于冰箱中备用。")")1)++,,%二硝基水杨酸显色液准确称取9)+:+,,%二硝基水杨酸置于*45678氢氧化钠
*9*48溶液中,
然后加酒石酸钾钠的热溶液";*)3:酒石酸钾钠溶于,3348水中),再加,)3
:苯酚和万方数据
,)3:亚硫酸钠,搅拌至溶解,冷却后定容至"33348,贮于棕色瓶中置冰箱中备用。")")1)13)"<标准葡萄糖溶液准确称取经"3,=烘至恒重的无水葡萄糖*,3)3334:,
溶于蒸馏水中,定容至*,348。")*标准曲线的绘制分别吸取3)"<标准葡
萄糖溶液*)3、1)3、9)3、;)3、"3)348,
分别定容至,348。再分别吸取上述溶液各*),48于试管中,各加*),48+,,%二硝基水杨酸,
煮沸,4>?"管对照,取*),48蒸馏水,加*),48+,,
%二硝基水杨酸,
同样煮沸,4>?)。冷却后,用-*"型分光光度计在,+3?4波长下比色,
记录各管的光密度值,以光密度作纵座标,对应标准葡萄糖溶液含糖的毫克数为横座标,绘制标准曲线。")+
测定方法
通过“四分法”精确称取酶样品
*)33:,加温水@348、柠檬酸缓冲液"348,13=浸提"A,以脱脂棉过滤备用。根据酶活高低,上述酶液需适当稀释使其产生的还原糖在"33B,33:之间,光密度在3)"B3)9。取"支小试管(",44C",344),加羧甲基纤维素钠溶液*)348,于,3=水浴中预热*B+4>?,
加稀释酶液3),48,保温+34>?,取出加入+,,%二硝基水杨酸*),48,
沸水浴煮沸,4>?,冷却后用分光光度计,+3?4处比色测定DE值。
另取小试管加羧甲基纤维素钠*)348,先加入*),48+,,%二硝基水杨酸,再加酶液3),48,其他操作同样品测定作空白测定。")1
结果计算
!&!酶活力F
GC?
3),
4:7: +3H ,3=
式中:G—从标准曲线中查得的净葡萄糖毫克数(4:);?—酶液稀释倍数;3),—测定时吸取稀释酶液毫升数(48)。*滤纸法*)"
材料
(另作!
(称取(
—!E—
中国饲料!..!年第#:期
($%)、冰醋酸($%)、甲苯!"#"#试剂醋酸钠
($%)、氢氧化钠($%)、酒石酸钾钠($%)、苯酚($%)、亚硫酸钠($%)、($%)、&,’(二硝基水杨酸新华’号滤纸(剪成#)*+&)*纸条)。!"#"!仪器同,-,法。!"#"&
试剂配制
!"#"&"#."#*/012345"6醋酸—醋酸钠缓冲液准确称取醋酸钠(,4&,7789 &4!7)6":.;和冰醋酸!"6.*2,以蒸馏水溶解,定容至#...*2。其他操作吸取5*2蒸馏水代替5*2酶液,
同样品测定作空白测定。!"5
结果计算滤纸酶活力(BC)D
C+@
!5>5.=*;1;
+#’
式中:——从标准曲线上查得的净葡萄糖C—
5毫克数(*;);————’*2反@—
’
——吸取#*2酶解液进行应液中含5*2酶液;#—!"#"&"!&,’(二硝基水杨酸显色液配制同
,-,法。!"!
标准曲线绘制
同,-,法。
!"&测定方法酶液制备同,-,法。样品测定方法为:准确吸取5*2酶液和#*2缓冲液于试管中,加入新华’号滤纸条一条,滴入甲苯!<&滴防腐,5.=静止反应!5>。吸取滤纸酶解液#*2,加蒸馏水#"’*2、&,’(二硝基水杨酸溶液
!"’*2于试管中,
沸水浴煮沸’*?@,冷却后在’&.@*处比色测定光密度7A值。
万方数据
测定。&
讨论
作为底物的羧甲基纤维素钠,用不同厂家生产的滤纸测定酶活时,结果不尽相同,有时相差还较大。因此,得出酶活力结论时应注明底物产地。
纤维素酶是一种微生物活性制剂,对温度、酸碱度十分敏感,不同菌株生产的纤维素酶最适34值、最佳作用温度有所不同,测定方法有待进一步探讨。
[通讯地址:郑州市花园路!E号,邮编:
5’...E]
纤维素酶酶活的测定方法
作者:作者单位:刊名:英文刊名:年,卷(期):被引用次数:
刘德海, 杨玉华, 安明理, 陈小鸽
刘德海,杨玉华,安明理(河南省科学院生物研究所), 陈小鸽(河南省饲料产品质量监督检验站)中国饲料CHINA FEED2002(17)65次
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