重医免疫学思考题

临床检验免疫学-思考题答案 ? 抗原抗体反应

一、抗原抗体反应的原理

1.）Ag、Ab能特异性结合：（内因）

Ag、Ab能特异性结合，是由于Ag表位(抗原决定簇)和Ab Fab段（V区）之间的特异性结合，二者在空间结构上是严格互补的。 1.）Ag、Ab结合的动力：（外因） 静电引力（又称库仑引力）：它是指抗原和抗体分子上带有相反电荷-NH3+或-COOˉ之间的相互吸引力。 例如Ab分子上赖氨酸离解层中含有-NH3+，Ag分子上天门冬氨酸离后含有-COOˉ，这两者之间就可相互吸引而产生静电引力。

该力的大小与两个电荷间距离的平方成反比。距离越近，静电引力就越强。 范得华力（又称电子云力）：该力是原子与原子、分子与分子间所具有的一种吸引力。当Ag、Ab两分子外层轨道上的电子相互作用时，电子云由于偶极摆动而产生吸引力，从而促使Ag、Ab的结合。 该力大小小于静电引力。

氢键：该力是由于分子中的H原子和电负性较大的O、N、S原子间的相互吸引而形成的。 氢键对于维持生物大分子（AgAb）的形态和结构有很大作用。它的大小大于范得华力。 疏水作用力：

Ab是蛋白质，Ag少数是多糖，多数也是蛋白质，那么它们就是胶体物质，在水溶液中就带有-NH3+或-COOˉ极性基团，从而带上正电或负电 ，成为亲水胶体。

当Ag表位和Ab Fab段相互靠近时，亲水层消失，排斥掉两者间的H2O分子，促进Ag、Ab的结合。 疏水作用力在整个Ag、Ab反应中提供的作用最大

二、抗原抗体反应的特点

1）.特异性： Ag、Ab的结合实质上是抗原表位和抗体可变区之间的结合。Ab 可变区可形成一个平穴槽，Ag则楔状嵌入，由于两者在化学结构和空间结构上的互补，使得它们的结合具有特异性。 这种结合如同钥匙与锁的关系，一把钥匙只能开相应的一把锁.

2）.最适比例：Ag、Ab的结合并不是在任何比例下都进行得充分、完全的。要形成我们肉眼可见的反应（如沉淀、凝集现象等），就涉及到最适比例问题。

3）.可逆性： Ag、Ab结合形成抗原抗体复合物，这一过程是一个动态平衡，在一定的条件下，反应是可逆的：Ag＋Ab →AgAb，其主要原因为Ag、Ab结合是非共价键结合，不为化学反应。

三、影响抗原抗体反应的主要因素

自身因素： 1） Ag：与Ag的理化性质、抗原表位的数目及种类有关； 2）Ab：与Ab的来源有关：是R 型抗体或H 型抗体； 与Ab的特异性、亲合性有关； 与Ab的浓度有关。 外界环境条件： 1）．电解质：一般实验室所用电解质都是生理盐水（0.9% NaCl）,浓度不能过高。浓度过高，会使Ab蛋白质优先沉淀而出现盐析现象。 2）．PH：一般为PH 6-8,当PH<3时，可出现颗粒性的非特异性凝集，称酸凝集。当PH过高，可碱变性。 3）．温度：抗原抗体反应的常用温度为37°C。

四、抗原抗体反应分哪些种类？

沉淀反应；凝集反应；补体参与的溶血反应、补体结合试验；中和试验；免疫标记技术。

五、什么是交叉反应，有无特异性，为什么？在临床上有何意义？

1) 交叉反应(cross-reaction)----抗体对具有相同或相似抗原表位的不同抗原的反应称为交

叉反应。 2) 有特异性。（交叉反应并没有违背Ag、Ab特异性结合的原则，其产生的先决条件是存

在共同Ag表位。） 3) 交叉反应的意义：

① 免疫学诊断：（利用交叉反应）eg 外斐氏反应等:用变形杆菌OX19、OX2、OXk作抗原查血清抗体，诊断斑疹伤寒（立克次氏体感染所致）

② 可造成免疫病理损害：eg 链球菌感染后易导致肾小球肾炎，其原因为链球菌与人体肾小球基底膜有共同Ag表位所致。

? 沉淀反应、免疫电泳

一、双扩、单扩、对流免疫电泳、免疫电泳实验的原理，方法，用途。 原理 双扩 单扩 对流免疫 免疫电泳 可溶性抗原与相应抗体在电解质存在下，在琼脂基质中扩散，当两者相遇，比例恰当时结合，可出现肉眼可见的沉淀线。 1、制琼脂板(3ml 1.5%NS琼脂） 2打孔（双孔型/三角孔型/梅花孔型 加样（平孔沿加满） 扩散（37C、24 h观察结果） 定向加速的免疫双扩 （双扩＋电场，使抗原、抗体相对泳动） Ag区带电泳＋双扩结合 1.Ag电泳分出区带 2.Ag、Ab免疫双扩 方法 1.已知抗体+琼脂制抗原、抗体分别在琼板、打孔 脂板上不同孔内，抗2.在琼脂板小孔中原在负极端，抗体在加梯度抗原 正极端，电泳。 3.抗原向四周扩散电压：4~6v/cm(琼脂长形成沉淀环 度） 4.抗原浓度与沉淀电泳时间：45分钟~1环直径呈线性关系 小时 绘制标准曲线 5.从标准曲线上查出并计算出待测标本含量 定量测定，如测 IgG、IgA、IgM、C3等含量 用于HBsAg、AFP等检测 用途 1.已知Ag或Ab测未知Ab或Ag：双孔型 2.抗原性质分析：三角孔型 3.测Ag有效稀释度：梅花孔型 1、常用于分析复杂Ag的组分。（如人全血清组分的分析） 2、多发性骨髓瘤等疾病的测定

二、影响电泳的因素有哪些？ 影响电泳的因素：

1.与溶液的pH有关：常用pH8~9，蛋白质带负电

2.与溶液离子强度有关：愈高，泳动慢，一般0.02~0.2M 3.与电场强度有关：愈高，愈快，一般4~6v/cm（琼脂长），约40v左右

4.电渗作用的影响 电渗作用：电场中液体对于一固体的固定相对移动的现象。电渗方向与电泳方向相反。

? 凝集反应

一、玻片凝集试验和试管凝集试验的区别 玻片法 试管法 用已知抗体检测未知抗原 用已知抗原测未知抗体的效价 属半定量试验 方法 于玻片上先加已知抗体，再加入待测物（未知抗原），混匀。如发生凝聚，说明待测物中有与抗体相对应的抗原 1~9号试管分别加不同稀释度待检血清（容量相同，Ab），10号加NS（对照），各管再加定量（浓度、容量一样）的Ag。 结果：以出现明显凝集的血清最高稀释度（即可以判为++者）作为该血清（Ab）的凝集效价。 用途 ABO血型鉴定 菌种鉴定 举例： 1.肥达氏反应(Widal test) 2.外斐氏试验 (Weil-Felix test)

二、反向间接凝集试验、间接凝集抑制试验的原理及实例 1、反向间接凝集试验

原理：将已知抗体吸附于颗粒性载体上，检测未知抗原 实例：反向间接血凝检测HBsAg 、AFP等 2、间接凝集抑制试验

原理：待测样本（可溶性Ag？）+已知Ab → +已知致敏Ag颗粒（已成为颗粒性Ag） → 观察是否有凝集现象 不凝集为阳性，凝集为阴性。

实例： 用胶乳凝集抑制试验检测小便中绒毛膜促性腺激素（HCG）

三、协同凝集试验的原理

原理：实质为反向间接凝集反应 葡萄球菌A蛋白（Staphylococcus protein A, SPA)能非特异地与IgG的Fc段结合,当与特异性抗原相遇时，IgG的Fab段与抗原结合，出现金葡菌的凝集现象（属特殊间接凝集试验）

? 协同凝集试验实际是用已知抗体检测未知抗原，可用于多种抗原的检测

四、比较沉淀试验和凝集试验的异同

沉淀试验 凝集试验 抗原性质 可溶性Ag 颗粒性Ag 稀释对象 抗原 抗体

结果现象 沉淀现象 凝集现象 敏感性 低 高

? 免疫荧光技术

一、免疫标记技术的原理

原理：用荧光素标记抗原或抗体，与待测标本中相应抗体或抗原结合，通过检测荧光，确定标本中有无待测的抗体或抗原。

二、免疫荧光技术中最常用的荧光素是什么？

1.异硫氰酸荧光黄( Fluorescein isothiocyanate , FITC) 可发出黄绿色荧光 2.四乙基罗丹明（rhodamine, RB200) 发出橘红色荧光

3.四甲基异硫氰酸罗丹明(tetramethylrhodamine isothiocyanate,TRITC) 发出橙红色荧光

三、免疫荧光显微染色的各种方法及优缺点 方法 特点 直待测标本固定（Ag？）+ Ab 快、直接、干扰因素少用于检测抗原 接---洗涤----AgAb 每检测一种抗原要标记相应荧光抗体,法 较麻烦 间第一步：荧光素标记抗抗体优点： 接（如荧光 标记的羊抗人制备一种荧光标记二抗（抗抗体）可用法 IgG）； 于多种Ab检测 第二步：已知Ag固定＋待测灵敏度高 标本（Ab？）——洗，＋荧 光标记的抗抗 体——洗，荧光显微镜镜检 补第一步：荧光素标记抗补体； 特点： 体第二步：已知Ag固定＋待测灵敏度高，制备一种荧光抗补体用于多 法 标本（Ab？）＋补体——洗，种检测 ＋荧光标记的抗补体——干扰因素多，补体不稳定，易失活， 洗，荧光显微镜镜检 该法少用

免疫荧光显微技术优缺点

优点：1.特异性、敏感性高2.快速3.可定位 4.既可测Ag又可测Ab

缺点：

1.需要荧光显微镜

2.存在非特异荧光干扰（产生原因：自发、抗体不纯、交叉反应、技术问题） 3.定性测定、判断结果不客观 4.制备片子难保存（荧光猝灭）

? 免疫酶技术

一、ELISA 的原理、方法（以间接法测抗体和双抗夹心法为例）及影响因素。 ? 原理：将酶分子与Ab或Ag连接成一酶结合物（酶标记物），当它与固相载体中相应Ag或Ab相遇，形成酶标记的AgAb复合物，加入底物，酶催化底物，生成有色产物，根据颜色深浅可测出溶液中Ag或Ab的量。

? 方法：

双抗体夹心法：包被已知Ab?洗涤?加待测标本?（测Ag？）?洗涤?

加酶标Ab ? 洗涤? 加底物?加终止液?观察结果

间接法：包被已知Ag＋待测标本（测Ab？?反应一段时间后，洗涤?加酶标

抗抗体（酶标羊抗人IgG）?洗涤?加底物?加终止液 ，观察结果。

（该法主要用于测抗体 ； 酶标记一种抗抗体可以用于多种抗体的检测） ? 影响因素： （一）固相载体 ：

常用固相载体材料：聚苯乙烯。

其特点为吸附Ag或Ab的能力强，一但吸附后，不能被洗脱。 （二）抗原、抗体 Ag：需纯化

Ab：需效价高、亲和力强、纯化 （三）试验条件

1.包被：一般用pH 9.6 CB(carbonate buffer)，0.05M, 有利于蛋白质吸附 包被浓度：0.1~100?g/ml，一般常用10 ?g/ml 包被时间、温度：4 ℃过夜或37 ℃ 1-3h 包被量：100ul

封闭：用0.1~5% 牛血清白蛋白缓冲液浸泡 0.5小时 2.抗原抗体反应的条件

（1）微碱性有利于抗原抗体结合，故用pH 7.4 PBS(phosphate buffer saline)洗涤 （2）去污剂有利于AgAb形成，洗液中加0.05% Tween-20 （3）Ag、Ab反应时间、温度： 一般 37℃、40min 3.洗涤

采用 PH7.2-7.4PBS洗涤，规一化，每次浸泡1~2min，拍干，共洗涤3~4次 4.酶促反应条件

温度 37℃ 时间10min pH 5.5 底物量 一致 5.排除干扰：多设对照

二、ELISA试验应设哪些对照，为什么？

阳性对照；阴性对照；酶结合物对照；底物对照；空白对照

三、判断ELISA试验结果的方法。

1.若待检孔显色浅于阴性对照则判定为阴性；

2.若待检孔显色深于或等于阳性对照孔则判定为阳性；

3.若待检孔显色介于阴性对照孔和阳性对照孔之间则判定为弱阳性。

? 免疫血清的制备

一、免疫血清制备的主要程序。

免疫程序：注射抗原?试血和放血?鉴定?保存 试血和放血：

试血：末次Ag注射后，测定血清中Ab的效价，叫试血。若Ab达到所需效价，即可放血。若未达到，继续追加免疫Ag一次。 试血：可溶性Ag：用双扩（梅花孔型）；颗粒性Ag：用直接凝集试验（试管法） 放血：直接颈动脉放血或直接心脏穿刺抽血。然后分离出血清，即可得到Ab

二、佐剂概念、作用机理、福氏不完全/完全佐剂的组成。

? .佐剂（adjuvant)：同Ag一起或预先注入机体，能增强机体对该Ag的免疫应答或改变

免疫应答类型的物质。 ? 作用机理：

? 组成：1.福氏不完全佐剂（FIA）：组成：羊毛脂＋石腊油，二者比例为4：1 2.福氏完全佐剂（FCA）：组成：羊毛脂＋石腊油＋卡介苗

免疫效果更好，因为进一步提高、加强了免疫反应，并使免疫反应发生质的改变。

? 免疫球蛋白的分离提纯

分离提纯免疫球蛋白有哪些方法，其原理是什么？

方法 盐析法 离子交换层析法 凝胶过滤法 亲和层析法 原理 在不同浓度的中性盐中蛋白质会脱水，降低带电电势，亲水性变为疏水性，分子间相互凝聚而沉淀（盐析作用）。 利用不同的蛋白质在缓冲溶液中所带电荷不同，与某一载体上的具有相反电荷的离子基团进行吸附，然后进行解脱，达到纯化蛋白质目的。 凝胶颗粒是网状结构，当分子大小不同的混合物通过凝胶柱时，分子大的先下来，分子小的嵌入凝胶颗粒的网状结构中后下来，从而将分子大小不同的物质分离开来，即为分子筛的作用。 利用抗原抗体的结合具有特异性、可逆性，将纯化抗原先交联（吸附）到载体（琼脂糖珠）上，制成亲和层析柱，当Ab（Ig）通过时，与抗原特异性结合于柱上，Ab中杂质流出。然后通过改变缓冲液 pH、离子强度，使Ab解脱下来。

? 单克隆抗体及应用

一、单克隆抗体概念

针对Ag分子表面某一抗原决定簇（又称表位）而产生的抗体分子，称McAb 单克隆抗体——由一个B细胞克隆产生的识别单一抗原表位的同源抗体。

二、杂交瘤技术制备单抗的原理及简要步骤 原理：

1、B细胞(浆细胞）特点：

1)能产生抗体 2)但不能在体外长期培养 3)细胞内含HGPRT酶（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转化酶）和TK酶（胸腺嘧啶核苷激酶），可通过旁路途径合成DNA 2、骨髓瘤细胞

1)能在体外长期培养 2)不含HGPRT和TK酶 3、杂交瘤细胞具有以上两种细胞的共性：

既能产生抗体、在体外能长期培养；同时含有HGPRT和TK酶，可通过旁路途径合成DNA

4、HAT培养液筛选出杂交瘤细胞 (次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶）：

氨基蝶呤是抗代谢的药物，能阻断内源性合成DNA（合成DNA的主要途径）。

简要步骤： 1.制备能产生单抗的杂交瘤细胞

2.克隆化杂交瘤细胞 3.筛选杂交瘤细胞

4.扩大培养单克隆杂交瘤细胞 5. 收集单抗并鉴定 6. 纯化单抗

（具体的步骤可以参考ppt）

三、HAT培养基的作用 筛选出杂交瘤细胞

四、人源单克隆抗体

概念：单克隆抗体为人IgG

五、基因工程抗体、嵌合抗体概念，嵌合抗体优点 ? 基因工程抗体：

在基因水平上对编码抗体的基因进行切割、拼接或修饰，甚至人工合成，然后导入受体细胞内表达而产生的抗体（单克隆抗体）。

? 嵌合抗体概念：

用DNA 重组技术将鼠源单抗基因的可变区（V区）基因与产生人Ig的恒定区（C区）基因相连接，构成嵌合基因，导入受体细胞（骨髓瘤细胞），表达出嵌合抗体。

? 嵌合抗体优点：

a.免疫原性低，有利于用于人体 b.在人体内半衰期较鼠单抗长

c.在人体内生物学作用（如CDC、ADCC）较鼠单抗强 d.与人/人杂交瘤比，体外传代更稳定

? 补体的检测与应用

一、补体的定义、组成及性质

? 定义：补体是存在于人和动物血清中的一组具有酶活性的球蛋白，一般情况下处于未

激活状态。 ? 组成：

1.补体的固有成分：C1-C9, 其中C1又包括C1q、C1r、C1s, 共9种成分11种蛋白分子。其

中C9的分子量最小、C3的含量最高；

2.补体的调节蛋白：如C4调节蛋白、C1抑制物、S蛋白等； 3.补体受体；如C1qR、C3aR等；

? 性质：稳定性差，各种理化因素都可使之失活：如酸、碱、紫外线照射、剧烈震荡等

二、CH50实验的原理、正常值及意义 ? 原理：

a.组成和功能完整的补体系统能使致敏羊红细胞发生溶血；

b.羊红细胞的溶血程度与补体的活性成正比；（S型） c.在50％溶血附近（30％－70%之间），稍微改变补体量，溶血程度变化明显，因此以50％溶血率来判定终点较100％更为敏感，所以该试验称为50％溶血试验（CH50）。

? 正常值：50－100U/ml ? 意义：

1.补体量↑:多见于急性炎症感染、组织损伤、癌肿；

2.补体量↓：见于补体消耗↑：体内有Ag、Ab 反应，如SLE、RA等；

补体合成↓：肝脏疾患；

补体先天性缺乏：具有遗传性和家族史

三、补体结合实验的原理、结果判断及评价

? 原理：补体可与任何一组AgAb复合物结合；一旦与某一AgAb复合物结合后，便不

再与另一复合物结合。

? 结果判断：不溶血为阳性，即待测物中有相应的Ab或Ag；

溶血为阴性，即待测物中无相应的Ab或Ag.

? 评价： 优点 1、该试验既可测Ag、又可测Ab； 2、Ag既可以是颗粒性Ag、也可是可溶性Ag、甚至可以是块状物，因此检测Ag的范围广； 3、可以用于病毒、立克次氏体、细菌等多种病原体的检测（实际上是测Ag）； 4、比较敏感(0.05μg/ml)、特异； 5、结果判断明显：通过有无溶血来观察，无需特殊仪器检测。 缺点 1、参与反应的物质多，影响因素也多；（反应体系中有Ag、Ab、C、羊红细胞、溶血素） 2、在正式试验前需要找出几种物质间最恰当的比例，比较复杂。

? 机体免疫功能检测

一、人体免疫功能包括哪些组成部分？ 类型 非特异性免疫 组成 1.皮肤、黏膜的机械阻挡作用及局部分泌的抑菌、杀菌物质 2.吞噬细胞的吞噬作用 3.NK(nature killer)细胞对病毒感染靶细胞的杀伤作用 4.血液、体液中的抗菌分子：补体、溶菌酶 细胞免疫：由TLC主导完成，其效应物质是致敏TLc(CTL/Th1) 体液免疫：由BLC主导完成，其效应物质是Ab 特异性免疫 二、实验室中检测人细胞免疫和体液免疫最常用哪些试验，这些试验的原理如何？正常值应为多少？

一.T细胞的计数（T细胞表面标志的检测） （一）特异性抗原的检测

T细胞表面有一些特异的CD抗原，根据这些不同的CD抗原可鉴定不同的T细胞群体

CD抗原：淋巴细胞群（簇）分化抗原：不同群淋巴细胞在分化成熟过程中，细胞表面出现或消失的抗原分子

检测T淋巴细胞表面CD抗原中:

CD3+的数量表示成熟的总T淋巴细胞的数量， CD4+的数量表示是Th细胞的数量， CD8+的数量表示是CTL/Ts细胞的数量。

CD4+/CD8+≥1.5。免疫功能差或者免疫功能紊乱，该比值小于1 （二）T细胞特异性受体（E受体）的检测

E花环形成试验 (Erythrocyte Rosette forming test)

原理：T淋巴细胞表面含有绵羊红细胞（SRBC)受体（CD2)，当T淋巴细胞与绵羊红细胞相遇时，T细胞通过该受体吸附绵羊红细胞而形成花环。 正常值：Et花环形成试验：60%~80%（代表T细胞总数） Ea花环形成试验：20%~30%（活性强的T细胞） 二、T细胞功能的检测

检测T细胞功能的试验有： （一）淋巴细胞转化试验 1.原理

淋巴细胞在某些物质刺激下，细胞增殖、分化（如细胞变大、胞浆增多、出现空泡）DNA合成增加（核染色质疏松，核仁出现），转化成为淋巴母细胞。

正常值60%～80%

（二）相关的细胞因子的检测（在细胞因子章节介绍） （三）淋巴细胞的细胞毒性检测

细胞毒性T细胞（CTL)具有杀伤靶细胞的功能，它是评价机体细胞免疫水平的指标。检测这种杀伤作用的试验称为细胞毒试验。

CD8+CTL与靶细胞表面相应抗原结合通过脱颗粒，释放穿孔素、颗粒酶，使靶细胞溶解、凋亡。

三、B细胞数量的检测

（一）B细胞表面识别抗原受体（BCR） （SmIg, Surface membrane Ig)的检测

1.SmIg 是B细胞表面膜免疫球蛋白，存在于成熟B淋巴细胞膜上，为B细胞结构蛋白。 类型为：IgM、IgD型。 正常值：15%~25%

（二）B细胞表面抗原的检测

B细胞表面特有的CD抗原有：CD19、CD21，用抗CD21的单抗（免疫荧光法、酶免疫组化法）检测外周血淋巴细胞，阳性细胞为B淋巴细胞，约占总淋巴细胞的10%~15%。 四、B细胞功能的检测 （一）血清中Ig的测定

人的体液免疫功能正常（B 细胞功能正常），应反映在血清中有正常量的免疫球蛋白 检测人免疫球蛋白常用方法：单向琼脂扩散试验、免疫比浊法 正常值：IgG 12.0mg/ml(7.6~16.60) IgM 1.3mg/ml (0.40~2.20) IgA 2.0mg/ml(0.70~3.50) （二）血型抗体效价的测定 反映体内IgM水平

正常6月婴儿抗 A >1 ：8，或抗 B > 1 : 4; 1岁后抗A>1:16 ，或抗B > 1 ：8

如3岁以上抗A或抗B效价仍 < 1 ：4，表示IgM缺乏，提示先天性体液免疫功能缺陷。 （三）抗原刺激机体后抗体应答反应（体内试验）

将抗原注射到体内，一段时间后检测相应抗体效价，如抗体效价低，说明机体体液免疫功能差

如用三联伤寒菌苗0.25ml注射，每周1次，连续3次，抗H应为1 ：160，若低，表示体液免疫应答功能差。

? 免疫复合物及检测

一、免疫复合物的含义及免疫复合物病的致病原因

含义：immune complex,IC它主要指AgAb复合物及AgAbC复合物两种。 致病原因：中等大小的IC沉积在体内，通过激活补体、激活血小板而致病。

二、免疫复合物检测使用的标准品、出现的问题及WHO推荐的检测方法

? 标准品：目前普遍应用的标准品是AHG——热聚合人IgG（不是IC）。

? 出现问题：到目前为止，所有检测IC 的试验，还没有另人满意的标准化措施; 在体外制备的IC还很不稳定，因此用人工合成的复合物作为定量标准不适宜。 ? WHO推荐的检测方法：

C1q结合试验、胶固素试验、类风湿因子（RF）试验、Raji细胞试验

? 自身免疫性疾病及检测

一、AID的基本特征及常见的AID有哪些？

1、诱因可有可无。 2、有一定的遗传倾向。

3、女性患者多见，发病率随年龄增长而增加。

4、患者血清中可检出高效价的自身抗体和（或）自身致敏T淋巴细胞。一些自身抗体在自身免疫病中呈现交叉重叠现象:即在同一种自身免疫病患者体内可检测到多种自身抗体，而不同的自身免疫病也可存在同一种自身抗体。 5、IgG、IgA、IgM升高，尤其IgG升高明显。

6、病损局部可发现有淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性粒细胞浸润及免疫复合物沉积。 7、免疫抑制剂治疗可取得一定疗效。

二、ANA的定义及ANAs的组成

ANA 原指抗细胞核抗原成分的自身抗体的总称。

ANA 广义地指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总和。 ANA所针对的靶抗原由细胞核

扩展到整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架及细胞周期等。

组成：

抗DNA抗体：抗dsDNA、抗ssDNA抗体

抗组蛋白抗体（AHA)：抗H1、H2A、H2B、H3、H4等 抗ENA抗体：抗Sm、抗核糖核蛋白（RNP）、抗SS-A、抗SS-B等

抗非组蛋白抗体：抗Scl-70、抗Jo-1、抗Ku、抗增殖细胞核抗原（PCNA）、抗PL-7、抗

PL-12、 抗着丝点抗体等

抗核仁抗体：抗PM-Scl、抗NOR-90、抗U3nRNA

抗细胞其它成分抗体：抗高尔基体、抗中心体、抗线粒体、抗肌动蛋白、抗核层蛋白等

三、各种AID检测时的代表性自身抗体有哪些？

抗双链DNA（dsDNA）------SLE

抗组蛋白抗体（ANA）-----药物性狼疮 抗可提取性核抗原

为提高SLE的诊断准确率，可将抗Sm抗体和抗dsDNA抗体同时检测。 ?抗Sm抗体 ----SLE?抗可提取性核抗原（ENA）?抗SS-A、SS-B抗体 ----干燥综合症?抗核糖核蛋白抗体 ----混合性结合性结缔(MCTD)?

抗Scl-70抗体 （抗非组蛋白抗体）------全身性硬化症（PSS） 抗Jo-1抗体 -------肌炎和间质性肺纤维化

抗线粒体抗体（AMA）------原发性胆汁性肝硬化（PBC）

? 免疫缺陷病及其检测（immunodeficiency disease, ID)

一、在原发性免疫缺陷病中哪一种发生最多？

原发性体液免疫缺陷病 占原发性ID的50~70%

二、怀疑体液免疫缺陷应作哪些过筛试验和确诊试验？ 过筛实验 （1）血清蛋白电泳 丙球定量： 丙球应占总蛋白的15%，大于9.0mg/ml为正常；若小于2.5mg/ml，应考虑ID （2）血型抗体效价测定（反映IgM水平）正常：抗A大于1：16，抗B大于1：8,若3岁以上，抗A或抗B仍小于1：4，应考虑ID （3）血清抗链球菌溶血素抗体的测定 （抗 O）的测定—反应IgG水平 3岁以上应大于100单位 （4）骨髓检查：查浆细胞 正常浆细胞应大于2％ 确诊实验 （1）血清免疫球蛋白（G、M、A）测定： 用单扩法或免疫比浊法：若IgG小于2.5mg/ml、IgA缺乏、IgM小于0.20mg/ml，可确诊为无丙球蛋白血症 （2）抗原刺激后抗体应答反应 三联伤寒菌苗试验：正常人注射0.25ml，每周1次，连续3次，抗H应为1：160，若低于1：40，表示体液免疫功能差 （3）B细胞计数：（SmIg检测） 正常15％左右 （4）T细胞亚群测定：CD4/CD8(Th/Ts) 正常(1－3.5)/1,若小于0.5，可确诊为AIDS 三、怀疑细胞免疫缺陷应作哪些过筛试验和确诊试验？ 过筛实验 （1）淋巴细胞绝对值测定：正常大于 2.5×109/L， 若 小于1.5×109/L 为缺乏 （2）迟发型超敏反应皮试 ： OT皮试等 （3）胸腺X线检查：观察胸骨是否发育 不全 确诊实验 （1）淋巴结活检： 注意深皮质区的淋巴 细胞数 （2）T淋巴细胞计数： E花环实验:正常Et 60－70％ CD3+TLC、CD4+TLC、CD8+ TLC 计数 （3）T细胞功能试验 淋巴细胞转化试验：正常60－70％ 附：OT实验：

OT 1:2000 0.1ml 皮内注射，48—72h 观察结果，红肿硬结大于0.5cm为阳性 该试验设计是基于人群中96%的人均感染过结核菌 阳性（直径>0.5cm)：曾感染过结核菌，细胞免疫功能好

阴性(直径< 0.5cm) ：细胞免疫功能差（缺陷）或从未感染过结核菌 强阳性（直径>2.5cm)：表明现处于结核的活动

? 超敏反应的检测

一、Ⅰ、Ⅳ型超敏反应皮试的原理 Ⅰ型：

当变应原再次进入致敏者皮肤，与吸附在肥大细胞或/和嗜碱性粒细胞上的特异IgE高变区结合，导致肥大细胞或嗜碱性粒细胞脱颗粒，释放生物活性介质：如组织胺、白三烯、激肽等。

Ⅳ型：

用皮内注射、皮肤斑贴等方法使变应原进入已致敏机体，体内致敏的T细胞CD4+Th1再次遇到相应抗原后，释放出大量细胞因子，如IL-2、IFN-γ、TNF、IL-3、GM-CSF,

（1）活化巨噬细胞及NK，增强吞噬细胞作用； （2）吸引WBC到达Ag所在部位，促进吞噬；（3）促进T细胞增生和分泌细胞因子，加重局部炎症反应，最后造成局部以单核细胞和淋巴细胞浸润为主的炎症反应。

二、比较Ⅰ、Ⅳ型超敏反应皮试(抗原、时间、结果、意义） 抗原 时间 结果 意义 Ⅰ型 Ⅳ型 鱼虾、牛奶、花粉、青霉素等。。 包内寄生菌、微生物、寄生虫、组织抗原、化学物质 20－30分钟 速发型(IgE) 红晕、红斑、风判断对所实验的团以及搔痒感 变应原是否过敏 48-72小时 红肿、硬结或水反应或了解机体迟发型(Th1，CTL) 泡 的细胞免疫功能 ? 主要组织相容性复合体及其编码分子 重点：*HLA-I、II类分子的结构、分布及意义。

组成 结构 由一条?链和一条?链组成，分布 所有有核细胞膜上 意义 1、识别和提呈内源性抗原肽 2、对CTL的识别起限制性作用 HLA-A、 -B、-C I类 ?链的N端胞外区分为?1、其中?1、?2、?3三个结构区，?2构成抗原结合槽，与处理后的抗原肽结合形成MHC-抗原肽复合体。 HLA-DR、 -DP、-DQ II类 由一条?链和一条?链组成，两条肽链的胞外区分别有?1、?2和?1、?2两个功能区，由?1与?1共同形成抗原结合槽。 抗原提呈细胞(如B细胞、巨噬细胞、树突状细胞)及活化的T细胞等 1、识别和提呈外源性抗原肽 2、对Th的识别起限制性作用 ? 移植免疫学及其检验技术

一、移植排斥反应的类型及产生的原因和避免方法。

排斥反应的临床分类

分两大类：宿主抗移植物反应 移植物抗宿主反应

??急性排斥反应慢性排斥反应????慢性排斥反应宿主抗移植物反应??超急性排斥反应 ??再次反应?加速性排斥反应?? 类型 超急性排斥反应 原因 受者体内预存有抗供者细胞的抗体（针对HLA），抗体与供体细胞（HLA Ag）结合，激活补体，细胞破坏；补体活化产物使血小板凝聚，释放凝血因子XⅡ，产生血管内凝血 同超级性，但抗体效价及亲和性要 低些。极少数也可能由致敏淋巴细胞引起。 供、受者HLA Ag型别不完全一致造成。早期以细胞免疫为主、晚期体液免疫为主 避免方法 移植前对受体血清与供体细胞进行细胞毒试验--CDC试验 CDC试验 尽可能选HLA Ag型别一致的供体 加速性排斥反应 急性排斥反应 慢性排斥反应

二、移植物抗宿主反应的概念及产生原因。

移植物抗宿主反应： 多发生在骨髓移植中 移植物中免疫活性细胞攻击宿主 产生原因：（1）宿主免疫活性细胞处于反应无能状态 （2）移植物中含有大量的免疫活性细胞

三、移植前选择供体应做哪些检测？

（一）交叉配合试验

1.检测受体血清中有无抗供体细胞的抗体

（1）微量补体依赖的细胞毒试验（complement dependent cytotoxicity,CDC 试验) 方法：受体血清+供体Lc＋补体 观察细胞死亡情况，大于10%应放弃此供体 2.混合淋巴细胞培养

受者LC+供者LC→观察二者LC的增殖转化程度

细胞增殖反应程度与 供、受体HLA抗原相容性呈负相关 双向、单向培养均可。

（二）HLA型别检测（和问题四一样）

四、血清学与细胞学鉴定HLA抗原的基因位点是哪些，检测时应采用什么细胞？

1.血清学方法（Serologically defined antigen, SD抗原） （1）检测位点：A、B、C、DR、DQ （2）检测细胞：

检测A、B、C位点 —用总淋巴细胞 检测 DR、DQ 位点— 用B淋巴细胞

2.细胞分型法（lymphocyte defined antigen, LD抗原）

检测位点：DP 待测细胞：BLc

五、举例解释CDC试验。

微量补体依赖的细胞毒试验（complement dependent cytotoxicity,CDC 试验)

方法：受体血清+供体Lc＋补体 观察细胞死亡情况，大于10%应放弃此供体

六、移植后监测排斥反应应做哪些检测？

（1）.3H-TdR四小时掺入法

如患者即将发生排斥反应，实际体内淋巴细胞已被同种异型的HLA抗原刺激，已有增殖分化。取出患者淋巴细胞，加入3H-TdR，培养四小时，收获细胞，测cpm，根据cpm值推测T细胞的致敏状态。

（2）外周血T细胞计数 E花环形成试验

CD4+/CD8+原来低，现在升高，预示急性排斥反应将发生（动态观察）：流式细胞仪测 （3）补体C3测定

在排斥反应时，补体成分消耗增加，导致血清中C3的减少。

? 免疫学检验的质量控制

免疫学检测质控的内在品质和外在因素各有哪些？如何进行衡量？ 外在因素：精密度、准确度、敏感性、特异性等 精密度 准确度 敏感性 特异性 衡量方法 用标准差（SD）和变异系数（CV）来衡量其大小。 （1）可用回收试验、（2）与决定方法测定结果比较、（3）与参考实验室的测定结果比较、（4）与正常参考值范围比较等来衡量其大小。 （1）将参考品作系列稀释，观察该方法所能测定的最低含量； （2）检测临床已确诊的病例。 （1）检测正常人群或已知的无关病例； （2）已知的阳性标本，加入免疫阻断剂后是否得到阴性结果。

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