M13 kO7 Help phage

辅助噬菌体株的制备

M13K07辅助噬菌体由M13衍生而来，gII上带有Met40IIe突变，并在M13复制起始点处插入有P15A复制起始点和来自Tn903的卡那霉素抗性基因Kana R。M13K07能在噬菌粒DNA缺失时复制，当野生型M13或f1复制起点存在时，单链噬菌体被优先包装并分泌到培养基中，从而容易获得用于诱发突变或测序的单链噬菌粒DNA。

保存条件

1X PBS和50%甘油。-20°C保存。

辅助噬菌体株的制备 准备：

1. 需要3 ml新鲜辅助噬菌体株（109 pfu/ml）来完成噬菌体展示文库的筛选实验。

2. 从辅助噬菌体工作储备板上用黄色灭菌枪头挑一个单个分散的含辅助噬菌体噬菌斑的

琼脂块，接种到3～4 ml处于对数期的TG1培养物中，37℃摇床培养2 h。转接到250 ml 2×YT培养基液体培养基(1L摇瓶)中，继续培养1h，然后加入50 mg/ml卡那霉素水溶液，至终浓度50～70 ug/ml，继续培养8～16 h或过夜。注：时间少于1个月的新鲜噬菌斑才可以保证实验结果。

3. 将过夜的250 mL细菌培养物，3300X g离心30 min。

4. 用PEG沉淀噬菌体颗粒：加入1/5体积(100ml)的20 % PEG / 2.5 M NaCl，充分混匀，冰浴30～60 min。

5. (Optional)10800 X g离心10min，弃上清，沉淀重新悬浮于30 mL水和6 mL PEG / NaCl中，冰浴30～60 min。

6. 10800 X g离心10min，弃上清，沉淀重新悬浮于10 mL LB中，11600 X g离心10min，去除沉淀。

7. 将上清转入一新标记好的管子，0.45um膜过滤除菌。存于4度（最长1年）。

8. 测定M13KO7辅助噬菌体株的滴度。注：含单链质粒DNA的颗粒滴度通常每ml细菌培养物大于5X1010pfu。在M13KO7扩增的过程中，对丢失p15A和Tn903转座子的噬菌体基因组有选择作用。因此不要连续传代噬菌体。用直接从单个噬菌斑来源的M13KO7株来进行后续的超感染实验。

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