南山妇幼 LH750 SOP

Beckman Coulter

全自动血细胞分析仪

LH750

标准操作流程

SOP

使用单位：深圳市南山区妇幼保健院

仪器编号：AM42336

LH750血液分析仪标准操作流程

目录

1 仪器名称及型号、安装环境要求 2 应用范围

3测试原理及参数、参数设置、检测范围 4系统状态 5 开机前准备 6 试剂准备及检查 7 开机方法 8 校准 9 质控品 10 常规操作步骤

11 测试结果的察看、审核与修改 12 急诊标本操作 13 保养维护 14特殊操作程序 15 告警及处理 16 仪器工作条件 17 其他注意事项 18 参考文件

1.① 仪器名称及型号：

贝克曼库尔特全自动血液分析仪，型号为：LH750 ② 安装环境要求：

温度：（10-30℃）,相对湿度：（30-60%）

电压波动范围:(220 ~ 240V)±10%, 电流耐受:≥5.0A, 线路频率:50~60HZ 2．应用范围

适用于 LH750 全自动血液分析仪的使用 3．①检测原理及参数

红细胞、白细胞和血小板计数原理：电阻抗法（库尔特原理），根据血细胞的不良导电性和产生电阻抗原理来计数血液中的细胞。

白细胞五分类原理：VCS技术， VCS中V是双电极的直流特性，即利用库尔特原理测量出原态白细胞的体积大小。C是射频传导特性，由流式池内的双电极加高频电流测得，主要反映细胞的核质比大小。S代表激光散射性，反映细胞在聚焦点时的形状和表面特性，与细胞的皱折和表面积大小有关。通过VCS的综合分析对细胞进行准确的分类。

网织红细胞计数及分类原理：计数（库尔特原理），根据血细胞的不良导电性和产生电阻抗原理来计数血液中的细胞。分类：非荧光染料新亚甲基兰，着色网织红细胞内的RNA，以区分成熟的红细胞；酸性低渗的脱蛋白溶液脱去网织红细胞内的血红蛋白，只保留染色的RNA。利用VCS技术对其分类。 血红蛋白：氰化高铁血红蛋白比色法 ②检测参数：

白细胞总数(WBC) 红细胞计数(RBC) 有核红细胞百分比(NRBC%) 中性粒细胞%(NE%) 血红蛋白(HgB) 有核红细胞计数(NRBC#) 中性粒细胞#(NE#) 红细胞压积(HCT) 网织红细胞百分比(RET%) 淋巴细胞%(LY%) 平均红细胞体积(MCV) 网织红细胞计数(RET#) 淋巴细胞#(LY#) 平均红细胞血红蛋白含量(MCH) 平均球形细胞体积(MSCV) 单核细胞%(MO%)

平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC) 不成熟网织红细胞分数(IRF)

单核细胞#(MO#) 红细胞分布宽度(RDW) 平均网织红细胞体积(MRV) 嗜酸性细胞%(EO%) 血小板计数(PLT) 高散光网织红细胞计数(HLR#) 嗜酸性细胞#(EO#) 平均血小板体积(MPV) 高散光网织红细胞百分比(HLR%) 嗜碱性细胞%(BA%) 血小板压积(PCT) 嗜碱性细胞#(BA#) 血小板分布宽度(PDW) ③本底参数设置

白细胞：0-0.2 x 10/L，红细胞：0-0.01 x 10 /L，血红蛋白：0-2 x 10 g/L，血小板：0-3 x 10 /L, 网织红细胞：0-600 x 10/L，细胞分类：0-10 NA 压力水平设置

60PSI 压力水平：60±5PSI，30PSI 压力水平：30±1PSI， 5PSI压力水平：5±0.1PSI, 真空水平：>22 in. Hg , AC 线路 (输入电压)水平:210-250 V

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④检测范围

白细胞线性：0-4 x 10 /L，红细胞线性：0-8 x 10 /L， 血红蛋白线性：0-250 g/L，血小板线性：0-3 x 10 /L 4．系统状态

仪器分为分析器、稀释器、数字键盘等部分。分析器屏幕有显示仪器当前状态：“READY”表示待机状态，见下图；

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数字键可执行部分功能，见下图

5 开机前准备

检查电源是否连接好、试剂是否已经上机、试剂量是否充足

6 试剂准备与检查

仪器使用试剂共5种：稀释液、溶血剂、分类试剂、清洁剂、网织红细胞试剂。这些试剂无需配制，直接上机使用即可，在使用前先检查试剂是否在有效期内、外观是否完好无泄漏等。

7 开机方法及注意事项 开机

(1)打开电脑，显示登陆框（log on）。

(2)输入操作者名和密码（事先设置），按(3)打开电源箱左侧的电源总开关； (4)15秒钟后，按分析器键盘的

；

进入 。

(5)检查电压和压力水平是否在正常范围内；

(6)开机程序结束，分析器键盘屏幕和分析器屏幕显示“READY”； 执行开机(STARTUP)程序 (1)在稀释器键盘，按

，仪器将自动执行开机程序；

(2)循环结束后，在电脑显示屏查阅结果：选择主菜单上的，然后再选择

，可查阅当天的STARTUP结果；如果想查看以往的开机结果，选择

进一步查看；选择 看本底测试结果。 关机

可查看开机测试的详细情况或选择 ，查

每日关机程序(每24小时执行) (1)在稀释器键盘按分钟

，等待程序结束，让清洁剂在管道中浸泡至少30

(2)在稀释器键盘按 ；

(3)在电脑的主菜单，选择

。当显示“Restart”框，关闭电脑电源。

延长关机程序(关机长达3～7天时执行) (1)在稀释器键盘按 分钟；

(2)取出网织红细胞染色试管，用去离子水清洗盛放试管的容器； (3)移去剩余试剂，换上去离子水； (4)按

，用去离子水充盈管道；

，等待程序结束，让清洁剂在管道中浸泡至少30

(5)用[F][1][7]功能，以去离子水冲洗清洁剂泵；用[F][6][7]功能，以去离子水

冲洗所有试剂管道；

(6)按，关闭系统，关闭电脑；

当再次开机时： (1)打开电脑； (2)按

打开分析器；

(3)用[F][6][7]功能4次去除分析器中去离子水；按中去离子水；用[F][1][7]功能去除清洁剂泵中去离子水； (4)换上试剂；

去除清洁剂管道

(5)用[F][3][1]功能和[F][6][7]功能充盈管道，用[F][1][7]功能冲洗清洁剂泵；

(6)执行STARTUP程序，进入日常操作。 8 校准 校准方法

(1)校准使用贝克曼库尔特公司配套血球校准品S-CAL，校准血球仪的WBC、RBC、HGB、MCV、PLT、MPV6项参数，校准参数的溯源性如下： WBC、RBC：

一个单孔阻抗血球计数器（诸如COULTER ZTM系列血球计数器）和制造商推荐的试剂。用A级量瓶进行高倍稀释，对WBC和RBC的数据都进行重叠校正，这一标准品的红细胞白细胞的测量（分析）都可以溯源至Clin Lab Haemat，1994，16（2）：131-138 HGB：

本标准品中的被测血色素物理量（分析对象）源于NCCLS标准H15-A3。该血红蛋白氰化物分光光度法程序使用修改过的Drabkins（Ziljstra）试剂，并且以NIST核准的过滤器为参考 MCV：

MCV计算方法：PCV/RBC ×10。血球容积比（PCV）根据NCCLS标准H7-A3 使用红细胞压积处理程序进行测量。 PLT：相差显微镜 MPV：胶乳颗粒

(2)校准需要的试剂，除校准品S-CAL外，需要常规配套的稀释液、溶血剂、清洁剂等

(3)校准步骤如下：

a 仪器执行必要的流路清洁保养

b 从分析器菜单选择：MANU→ANALYZER FUNCTION→STARTUP TEST→BACKGROUNDTEST，做本底测试，需要通过，各参数本底要求如下： WBC：≤0.20 ×109/L RBC：≤0.010 ×10/L HGB：≤2.0 g/L PLT：≤3.0 ×109/L

c 在电脑菜单进入携带污染菜单内，连续检测高值样本一支、中值样本1支、稀释液3支，做携带污染测试，仪器自动计算携带污染结果，需要通过，各参数携带污染要求如下：

WBC ≤2.0 RBC ≤1.0 HGB ≤2.0 PLT ≤2.0

d 在电脑菜单进入重复性测试菜单内，选择足量的中值样本，连续检测11次，去除第一次结果，仪器自动计算精密度CV%，需要通过，各参数的精密度要求如下：

WBC ≤1.7% RBC ≤0.8% HGB ≤0.8% MCV ≤0.8% PLT ≤3.3% MPV ≤2.2%

e 在电脑菜单进入校准菜单，将校准品S-CAL回温后混匀，输入批号、有效期及靶值，上机检测11次，去除第一次结果，仪器自动计算剩余10次的均值，并根据检测均值、靶值及旧校准系数计算出新的校准系数，使电脑接收新的校准系数

(4)校准后的验证

使用仪器配套5C质控品验证校准是否有效，上机检测5C质控品，各参数检测值都应落在预期值范围内

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9 质控品

常用质控品的介绍

常用的库尔特质控品有全血带白细胞五分类的三水平质控品（5C质控）、网织红细胞质控品。5C质控是人造全血，其成分模拟全血中各类细胞，用以监控仪器的全血计数和白细胞分类准确度；网织红细胞质控品是人造全血，其成分模拟全血中红细胞和网织红细胞，用以监控仪器对网织红细胞检测的准确度。 质控品使用要求

需要在有效期内检测，未开瓶质控品可在2-8摄氏度环境下保存之有效期，开瓶后可在2-8摄氏度环境下保存7天，室温下使用后马上放回2-8摄氏度环境中 质控文件的建立

1．从主菜单屏幕选择系统设置菜单；

2．再选择质量控制设置菜单3．再选择质控子菜单4．如果是新建质控文件，选择

；

；

，选择质控品来源（BCI、Others、Patient），

选择质控品类型（CBC、CBC+DIFF、LATEX、RETIC），选择质控品的水 平（High、Normal、Low）

5. 选择10 质控

来建立质控品的批号、有效期，以及各参数的参考值及范围。

自动模式运行5C质控品

（1）．请确认质控文件已经建立。

（2）．将5C质控品从储存环境中取出，室温下放置15分钟使其回温。 （3）．将质控品依照低水平、中水平、高水平插入自动进样架，请注意将质控条

形码朝上。

（4）．将自动进样架上机检测。

手动模式运行5C质控品

（1）．请确认质控文件已经建立；

（2）．将5C质控品从储存环境中取出，室温下放置15分钟使其回温；

（3）．在分析器键盘，按按

，再按，将质控品的8位批号输入，再

；

（4）．将质控品手动上样检测。 质控结果的观察

1．在电脑屏幕，从主菜单选择2．在屏幕左上方可看见

，再选择菜单；

菜单，再双

菜单，双击，进入

击，进入菜单，再双击，进入具体质控文件，打开相应质

控文件，在屏幕右方可察看相应的结果。 质控结果出控分析及措施介绍 请参照下表进行质控品的出控处理。

表1：对5C质控出控的分析和措施

可能性

混匀不恰当

在质控文件中设置的数据有误

措施

重新对质控品进行\ 确认质控文件中的设置数据，若有错，则改之 重新检测,如果结果依然超出范围,考虑下一个因

偶然性出控(统计学允许)

素

质控品问题,如:过期、被污染和变质 换一瓶或换一个批号的质控品再试

请公司的工程师帮助解决,可能的话先检查标本流

仪器问题

10 常规样本操作步骤 样本的采集

根据标本管生产商的使用说明，采集EDTA盐抗凝的全血：

? NCCLS公布的H4-A3（末梢血） ? NCCLS公布的H3-A3（静脉血）

Beckman Coulter 推荐您使用EDTA二钾或三钾盐。

重要提示 如果试管盖与标本之间未留有空隙则可能产生错误的结果。应确保在试管盖与标本之间留有空隙以利于混匀标本。同时亦应确保在测定前已适当地混匀了标本。

当准备末梢血标本时，请遵从生产商的指导使用微量采样器。

当使用自动吸样模式时，为使血液与抗凝剂达到适宜的比例，将1.0mL的标 本。

单一LH750系统，仪器将最多吸取300μL（0.3mL）的全血标本。 LH 750 SM 涂片系统，仪器共需550μL（0.55mL）标本，制片需吸取250 μL（0.25mL）。

当使用手工吸样模式时，仪器将吸取近200μL全血标本。 样本的储存

为达到最佳的准确度，应尽快测定标本。 静脉血标本

用于血细胞计数和分类：

若标本采集后储存于室温下（23.9℃或75℉）应于24小时之内测定。 若标本采集后储存于2-8℃（35.6-46.4℉）应于48小时之内测定。 用于网织红细胞计数：

若标本采集后储存于室温下（23.9℃或75℉）应于24小时之内测定。 若标本采集后储存于2-8℃（35.6-46.4℉）应于72小时之内测定。

程

末梢血标本

请遵从生产商的指导使用微量采样器。 常规样本测试步骤 在主菜单选择

菜单，再选择

菜单，如果样本为连续输入，可选择

，选择需要的条件并输入相应的起始架号和样本号，输入完毕后保存推出，调出起始号开始不断累加，累加完毕后保存推出，将自动进样架上机，仪器将自动检测。

11 检测结果察看、审核及修改 (1)当前结果的查看

1．在样本分析时，从主菜单进入本的分析结果；

菜单下，选择子菜单进入，即可看到样

2．在样本结果屏幕可以查看到：样本各参数检测结果、旗标和代码、怀疑性报警语、分类散点图及各项直方图，如按

可将屏幕锁定在当前样本；

3．选择子菜单可以查看到一系列研究数据：各计数小孔计数结果、分类的

一系列数据、更多的旗标和代码、各直方图；

4．在分类散点图上，各白细胞亚群用不同颜色表示，如淋巴细胞用蓝色表示，代表按钮为

；单核细胞用绿色表示，代表按钮为

；中性粒细胞用紫色

；嗜碱细胞用

；

表示，代表按钮为；嗜酸细胞用橘黄色表示，代表按钮为

；非白细胞用红色表示，代表按钮为

白色表示，代表按钮为

5．在网织红细胞散点图上，红细胞用红色表示，代表按钮为用蓝色表示，代表按钮为用紫色表示，代表按钮为

；血小板用绿色表示，代表按钮为；

；网织红细胞

；白细胞

6．按可进入三维散点图，按观察白细胞五分类三维散点图；按可让三维散点图旋转。

观

察网织红细胞的三维散点图，按(2)往日结果的查看

在菜单下，选择子菜单进入结果查询窗口，可根据不同条件查询结

果，如日期、时间、进样架号、病人号、样本号等，按库中自动搜寻相应的结果并显示。 (3)检测结果的审核

后仪器将进入数据

检测结果需要传输到LIS上进行审核，察看是否有结果异常高低、异常细胞报警等

(4)检测结果修改

原则上不允许修改结果，如需要，在LIS上可由主管进行修改后再次审核，仪器上不需要修改 (5)报告打印 在LIS上打印报告 (6)结果传输

在仪器的自动传输菜单中选择全部自动传输，仪器将完成检测的每个结果都传输到LIS上

12 急诊样本操作 在稀释器键盘，按动上样检测。

13 保养维护 每日保养

1. Shutdown/Startup

2. F92 检查Low Vac 必要时进行调整至6.00

，输入样本号(至少3位)，按

确认，手

3. F06 检查BSV(分血片)转动情况，必要时清洁BSV上的结晶 每周保养

1. 清洁电源气泵箱上的空气过滤网。 2. 清洁Stripper plate, 摇床传送带。 3. 清洁自动进样针，Probewipe(擦针块) 每月保养

1. 清洗low vac 调节阀高负压管路（用少量清水自行抽吸，排除管路上的结

晶，水会被吸入Overflow后自动排掉，不需要另外处理）

2. 清洗Overflow tank 5#,6# 口通向真空保护瓶的黄色圆管（经过VL40) 及

真空保护瓶（用清水抽吸，然后把真空保护瓶内水倒掉，可以反复几次直到保护瓶内的水干净为止） 3. 清洁Flowcell外表面。 4. 清洁Analyzer 过滤网。 半年保养

1. 清洁气泵正压进气口Muffler 2. 清洗6 inch 调节阀

3. 必要时请BCI工程师全面检查仪器。特别是分类效果， 一年保养

根据需要及BCI工程师的建议作大保养（PMI), 更换管道，做VCS优化， 定标（calibration)

14 特殊操作程序 无特殊操作程序

15 报警及处理

(1)按“Star up”自检通不过（Fail）

1.1 原因 （1）空白测试Hb值高。由于仪器长时间使用，蛋白残留物粘附在白细胞计数池上;（2）试剂空白的WBC、RBC、PLT计数超过空白标本。是由于稀释液被酵母样菌污染。

1.2 排除 （1）用“84”消毒液、滤纸过滤后作1∶1稀释，按主机键盘上“Drain”键，然后用20ml一次性注射器缓缓注入“WBC”计数池，约10ml左右，浸泡10min，可看到计数池里有许多“絮状物”，系粘附在管壁上的蛋白残留物。（2）更换新的稀释液。

1.3 保养 （1）每2个月用稀释过的“84”消毒液浸泡计数池10min;（2）定期检查试剂有无霉菌污染。 (2)电源及水气压力系统错误 2.1 压缩机断开。

2.1.1 原因 主机键盘上的显示屏灯不亮，显示“Compres-sor off”。 2.1.2 排除 按主机键盘上的“Prime Apert”键即可使用。 2.2 仪器报“Low Vacuum Low/High”

2.2.1 原因 负压保护瓶里进水，仪器排废管不畅通，是由于小孔或流式通道堵塞。

2.2.2 排除 打开仪器后盖，把负压保护瓶中的污物及水倒掉，用蒸馏水清洗干净负压保护瓶，然后清洗小孔及流式通道，最后做空白，空白通过，说明故障排除。

2.3 电源箱60PSI、30PSI、5PSI正压调节阀失灵

2.3.1 原因 正压调节阀不可调，由于长期使用，空气中灰尘堵塞电源箱左、右、下方3个窗口，导致箱内空气不能流通，温度过高，而导致调节阀失灵。 2.3.2 排除 把电源箱左、右、下方3个窗口上的滤网取下，由内向外冲洗干净后晾干即可。

2.3.3 保养 每3个月清洗电源箱滤网1次。 (3)稀释器故障

3.1 “Diluter”通不过（Fail）

3.1.1 原因 仪器报“LS Offset High”，查看“Daily cheek details”可见。根据提示发现在激光前置放大器上有2个测试孔，其间电阻值低而触发报警。

3.1.2 排除 在2个测试孔之间加200Ω的可调电阻，结果发现将其调节到30Ω左右故障即可排除。

3.2 “LEVEL-X报警 表示某种试剂水平偏低，换上新的试剂灌注即可（除了报“LEVEL-W”，表示废液满了，处理掉废液即可）。

3.3 “BED NOT Advanced”报警 指样品摇床发生故障，仔细检查，如果是床脱位，把它重新装好即可，如果不是脱位，按“RESET”键即可恢复正常。 (4)“Three consecutive votes out”报警

4.1 原因 分血器故障，是由于长期使用或结晶等仪器出现分血片松动而触发报警。

4.2 排除 把分血器右侧螺丝旋开，取出三个分血片，用蒸馏水擦洗后旋紧即可。

(5)“Low Vacuum Drifted”报警

5.1 原因 “六英寸负压计”漂移，由于空气中灰尘等因素，“6英寸负压计”进出口不完全堵塞或完全堵塞，进而影响到“6英寸负压”压力不稳定，而影响到细胞计数。

5.2 排除 在主机键盘上按“F92，Enter”，然后调节到6.00即可，如果数值不可调，说明完全堵塞，必须关机后，打开仪器后盖，取出“6英寸负压计”，用无水乙醇充分清洗进出口，可发现冲洗后的无水乙醇里含有许多非常细小的灰黑色粉尘颗粒，然后把残留在“6英寸负压计”里的无水乙醇用吸球吹干即可。 5.3 保养 每半年用无水乙醇把“6英寸负压计”冲洗1次。 (6)结果异常

6.1 “+++++” 表示测定值太高，稀释标本即可。

6.2 “:::::” 表示流式通道堵塞，同时散点图上会报PC1、PC2或FC。按“F44、F45”或用“84”消毒液1∶1稀释后清洗流式通道即可。

6.3 “-----” 表示3次次数不统一，可能是标本凝集或血小板太少。标本凝集应重抽血，血小板少可以从各小孔数据中查到数据。 6.4 “VCS”偏移 6.4.1 原因 分类图形发生左、右偏移或上、下偏移，是由于VCS通道长时间运用发生电路系统漂移。

6.4.2 排除 用“乳胶颗粒”做“VCS”校正，使“乳胶颗粒”的“VCS”对应值调整到靶值范围内，故障即可排除。

16 仪器工作条件

(1)工作环境温度：+15℃～+30℃ (2)工作环境相对湿度：≤85%

(3)仪器工作场所：水平放置在清洁、干燥、无尘、无腐蚀性气体、无阳光直射、 无强磁场的工作台上。

17 其他注意事项

(1)每24小时必须执行关机程序一次 (2)雷雨天气需要关闭电源，防止损伤仪器

18 参考文件

Couler LH750 System Operator’s Guide Couler LH750 System Refence

Couler LH750 System Special Procedures and Troubleshooting

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/c5q3.html