4无菌检查法（直接接种法）操作程序

贵州明湖药业股份有限公司 GMP文件

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无菌检查法（直接接种法）操作程序 技 术 标 准 日 期 日 期 日 期 日 期 制订部门 原 编 号 修订后编号 页 数 实施日期 质量保证部 ------ SOP-QUD-0116-2006 共3页 2013年6月1日 质量保证部 贵州明湖药业股份有限公司 分发部门 目 的 建立无菌检查法。

依 据 国家药品监督局《药品生产质量管理规范》(2010年修订)第七十五条 范 围 本标准适用于鱼腥草注射液。

责任人 质量保证部QA负责人、化验员对本标准实施负责， 内 容 1 概述

无菌检查是检查药品是否染有活菌的一种方法。

2仪器、设备和用具

2.1 恒温培养箱及可调20～25℃的生化培养箱。

2.2 显微镜、蒸汽灭菌器、标准pH比色器(0.02％酚磺酞指示液和澳钾酚蓝指示液)、恒温烤箱。

2.3 注射器(2、5、10mi)、三角瓶、刻度吸管(1、5、10m1)、玻璃器皿、移液管、试管。

2.3.1 移液管、刻度吸管在管口上端内，松松地塞少许棉花，然后放于吸管衙内或牛皮纸袋内盖严，灭菌备用。

2.3.2 试管、三角瓶等在管(瓶)口塞上海棉胶专用塞或纱布棉塞，塞子应塞进管口内2／3处，用牛皮纸格管口(包括塞子)包扎严，灭菌备用。

2.3.3 将注射器、针头(9号、11号、12号)配对，检查针头是否畅通后，将注射芯、管和针头分别放在双层纱布(或布)内，包扎严密，置带盖容器(瓷盘或铝制饭盒)内，盖严，用牛皮纸包扎后，灭菌备用。

2.4 无菌衣、裤、帽、口罩等洗净晾干，配套，用牛皮纸包严，灭菌备用或用一次性的无菌物品代替。

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2.5 长柄取样匙，放于长的玻璃筒内(或不锈钢长筒内)，盖严，干热灭菌备用。 2.6 用具的灭菌 将包扎妥的用具(除另有规定外)，在(121土0．5)℃蒸气灭菌30分钟，物品取出时切勿立即置冷处，以免急速冷却，使灭菌物品内蒸气冷凝造成负压，易致染菌，应置恒温培养箱中烘干。适于高温灭菌的器皿也可采用160℃干热灭菌2小时。 3 试液

3.1 75％乙醇溶液配制酒精棉球用。 3.2 碘配溶液配制碘酒棉球用。 3.3 新洁尔灭(1：1000)溶液。1

3.4 3—5％甲酚溶液或其他适宜消毒溶液。

3.5 0.02％酚磺酞指示液pH6.8～8.4系列比色液管。 3.6 溴甲酚蓝指示液pH6.0～7.6系列比色液管。 3.7 2mol/L盐酸溶液。 3.8 2m01/L氢氧化钠溶液。

4 培养基

4．1 一般采用商品脱水培养基，临用时按照使用说明书进行配制，需注意培养基的pH值应符合规定，否则必须校正后，灭菌使用。

4．2 新鲜配制的培养基，应按中国药典规定的处方，对培养基的原材料要进行挑选，化学药品均需用CP试剂规格。

5操作人员

用肥皂、水清洗双手，关闭紫外光灯，进入缓冲间，换拖鞋，再用碘酒棉、75％ 乙醇棉球擦手，穿载衣、帽、口罩。将所需物品剥去牛皮纸，移入无菌间，每次试验中所用物品必须计划好，并有备用物。

6供试品外部消毒

安瓿针剂先用碘酒棉球将安瓿外部擦拭灭菌，待干，用砂轮或灭菌锉轻割安瓿颈部(便于折开安瓶)，再用75％乙醇棉球将碘酒擦净，待干。 7供试品制备

注射液可直接用注射器吸取药液。按规定或需灭活的供试品可用灭活剂溶解，将瓶内供试液抽出稀释至规定的浓度。依法接种于培养基中。

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8 操作

用适当灭菌用具，取上述制备妥的供试品在近火焰上以右手握拳，小指为主拔开培养基管的塞子，管口通过火焰，移至火焰下侧，沿着培养基管壁分别接种于需气菌、厌气菌培养基6管，(其中1管于操作结束后移至接种室接种金黄色葡萄球菌对照菌液1m1)，真菌培养基5管。轻轻摇动使匀。需气茵、厌气菌培养基在30～35℃培养，真菌培养基在20—25℃培养7日，培养期间应逐日检查是否有菌生长(阳性对照在24小时内应有菌生长)，并填写检查记录表。如在加入供试品．后，培养基出现浑浊，培养7日后，不能从外观上判断无微生物生长，可取该培养液适量接种于同种新鲜培养基中或斜面上，继续培养，细菌培养2日，真菌培养3日，观察是否再现浑浊或斜面上有无菌落生长，在接种的同时，取培养液少量，涂片制成染色标本，用显微镜观察是否有菌生长。

9 结果判断

当阳性对照管显浑浊并确有细菌生长时，可根据观察所得的结果判定 如需气菌、厌气菌及霉菌培养管均为澄清或虽显浑浊但经证明并非有菌生长，均应判为供试品合格：如需气菌、厌气菌及霉菌培养管中任何l管显浑浊并确证为有菌生长，应重新取样，分别依法复试2次，除阳性对 照管外，其他各管均不得有菌生长，否则应判为供试品不合格。

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