炭疽标本采集及检测流程
更新时间:2024-07-09 15:48:02 阅读量: 综合文库 文档下载
炭疽标本采集
材料:防护服,口罩,手套,鞋套,碘酒,灭菌棉签,采血管,采血针,注射器,15ml和50ml无菌管,玻片,记号笔,采样记录单,感染性材料专用垃圾袋。
操作:
采样时注意:最好采双份标本,一份用于检测,一份留做原始标本以供复检或复核。原始标本应首先直接涂片或培养,必要时可增菌后再试验。
1. 血液标本:所有疑似病例,采取血液标本5-10ml(不加抗凝剂)。 2. 皮肤损害处标本:玻片直接在皮肤破损处压蘸,置于容器中;再用棉签采皮肤损害处渗出物,置无菌容器中(不加增菌肉汤)。
3. 粪便与呕吐物标本:有消化道症状的采粪便或呕吐物标本,注意选取其中混有血液的部分,置无菌容器中。
4. 痰与咽拭子标本:有呼吸道症状的收集痰液及咽拭子标本。 5. 脑脊液标本:表现脑膜刺激症状的病人,腰椎穿刺获取脑脊液。 6. 尸体标本的采取:可通过穿刺心脏获得血液或穿刺肝脏等实质性脏器获得组织标本。
7.有病死动物接触史可采病死动物标本或相关土壤等环境标本。
炭疽标本检测流程
1. 涂片:
所有病人标本,都应首先立即涂片,革兰氏染色,镜检。发现大量两端平齐的革兰氏阳性大杆菌,即可定为临床诊断病例。
2. 细菌分离培养:全部标本均应进行细菌分离培养。 1)标本处理:
皮肤渗出物、血液或脑脊液,直接涂布营养琼脂平板。
土壤等有污染或陈旧的标本,均首先制成悬液(土壤等标本经自然沉淀除去粗大沉淀物),10000转/分钟离心5分钟,弃去大部分上清液,留少量液体与沉淀物混匀,沸水浴加热15分钟后,取适量涂布平板。
2)挑选可疑菌落
上述平板在37℃孵育12-24小时后,检查是否长出可疑的炭疽芽胞杆菌菌落。炭疽芽胞杆菌菌落的形态为:灰白色、不透明、中等大小,常不规则,表面呈毛玻璃样。
3)炭疽芽胞杆菌鉴定
将上述可疑菌落挑出,划线接种于平板之上,在划线区内一处滴一滴诊断用炭疽噬菌体,另一处贴一片青霉素纸片。37℃孵育8-24小时后,在滴噬菌体处有透明噬菌斑,青霉素纸片周围有明显的抑菌环,便可判定接种物为炭疽芽胞杆菌。在患者或尸体中分离获得炭疽芽胞杆菌,炭疽的诊断即可确立。
皮肤渗出物、血液、粪便或呕吐物、土壤直接涂片 (革兰氏染色) 细菌培养 必要时做PCR 见到革兰阳性大杆菌,可定为临床诊断未见到革兰阳性大杆菌,继续别的试验 直接划平板 直接划平板后的标本可增菌培养 培养12~24h,选可疑菌落做青霉素敏感和噬菌体裂解试验 两项均为阳性,可确诊为炭疽
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