色谱柱使用管理规程

SMP/QC(00)030－01

色谱柱使用管理规程

文件类别：管理标准

颁发部门 质量管理部

审批表 制 订 人 审 核 人 批 准 人 生效日期 签名 部 门 年 月 日 日 期 年 月 日 年 月 日 年 月 日 分发部门 质量管理部 生产部 物料部 份数 分发部门 人事行政部 工程部 销售部 份数

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题 目 色谱柱使用管理规程 编 码 SMP/QC(00)030-01 目的：规范高效液相色谱柱、气相色谱柱使用，延长色谱柱使用寿命，确保检验正确性。 范围：高效液相色谱柱、气相色谱柱使用、保存、维修、再生、性能测试过程。 责任：

1 质量管理部色谱柱使用管理员负责执行本制度。 2 质量管理部QC主任负责监督本规程的执行情况。 正文：

1 色谱柱使用前注意事项。

1.1色谱柱使用前应进行编号登记，编号由液相色谱柱或气相色谱柱的第一个大写字母Y/Q加六个阿拉伯数字表示年月加流水号组成，如lsbctY2015-001表示：液相色谱柱2015年启用第1根柱子，记录购进日期，使用日期。 1.2 每次使用完后，登记至相应的仪器使用记录。 2 高效液相色谱柱的使用说明

2.1.2 色谱柱的储存液若无特殊说明，均为有机溶剂，反相柱常用甲醇、乙腈或高比例的甲醇/乙腈-水溶液，正相柱常用脱水处理后的纯正己烷。使用前，一定要注意色谱柱的储存液与待分析样品的流动相之间是否互溶。如色谱柱中的贮存液为正相（环己烷）而使用条件为反相时，必须用异丙醇先置换掉色谱柱内的储存液，然后再用于反相条件，否则将会明显减少色谱柱的使用寿命。在反相色谱中，如果流动相中缓冲盐的浓度较高（≥0.1mmol/L），必须先用低的甲醇/乙腈-水溶液 （10%～20%）冲洗20min，否则缓冲盐在高浓度的有机相中很容易析出，从而使色谱柱堵塞，无法恢复。 2.2 色谱柱的使用方向

安装色谱柱时应使流动相流路的方向与色谱柱标签箭头所示方向一致。除另有规定外，不宜反向使用，否则会导致色谱柱柱效明显降低，无法恢复。 2.3 流动相

2.3.1 流动相中所使用的各种有机溶剂应尽可能使用色谱纯，水应为超纯水或重蒸馏水，将配制好的流动相经不大于0.5μm的滤膜过滤。另外，装流动相的容器和色谱系统的在线过滤器等装置应清洁，否则将影响色谱柱的寿命。

2.3.2 以硅胶为基质的各种键合相对酸和碱都很敏感，一般pH使用范围为2.5～7.5，应参阅色谱柱使用说明书，配制好流动相后，必要时测定pH值，防止流动相过酸过碱，以免色谱柱填料不可逆性损坏。 2.4 样品

样品溶液应经不大于0.5μm的滤膜过滤，或用固相萃取小柱（SPE）对样品溶液进行预处理；如样品成分复杂，部分组分有可能吸附在色谱柱上，最好使用前置保护柱。在用正相色谱柱分析样品时，如无特殊要求，所有的溶剂和样品应严格脱水。 3 色谱柱的保养。

3.1 反相色谱柱使用后的保存

如使用缓冲液或含盐溶液作为流动相，每次实验结束后，应用10倍柱体积的低浓度的甲醇

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题 目 色谱柱使用管理规程 编 码 SMP/QC(00)030-01 /乙腈-水溶液（10%～20%）冲洗，使色谱柱内的盐完全溶解洗脱出来，再用较高浓度的甲醇/乙腈-水溶液（50%）冲洗，最后用高浓度的甲醇/乙腈-水溶液（80%～100%）冲洗，使色谱柱中的强吸附物质冲洗出来。

常用色谱柱的柱内死体积（ml）如下表示： 内径（mm） 2.1 4.6 10.0 22.5 3.2 色谱柱的长期保存

反相色谱柱可以储存于甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于经脱水处理后的正己烷中，离子交换柱可以贮存于含5%甲醇或含0.05%叠氮化钠的水中，并将色谱柱两端的堵头堵上，以免干枯，室温保存。 4色谱柱的维修

4.1 色谱柱使用一段时间后，会发生柱压上升、柱效降低的现象。这主要是柱床上端或过滤片处积累了污染物，可通过再生予以消除。

4.2 如果色谱柱性能突然变坏，可采取以下方法处理：

4.2.1 如果柱压突然增大，可将色谱柱出、入口端颠倒过来，用10～20倍柱体积的流动相在低流速下冲洗。如果柱压仍然很高，可能是柱入口处的过滤片堵塞，需要更换新滤片。 4.2.2 如果峰形变坏（如出现肩峰或双峰），表明柱入口柱床可能有塌陷，可用同型号填料和流动相配成匀浆，将塌陷处填平。 5 色谱柱的再生

5.1 正相柱按极性增大的顺序，依次用20～30倍柱体积的正己烷、二氯甲烷和异丙醇冲洗色谱柱，然后，按反顺序冲洗，最后用干燥的正己烷平衡。

5.2 反相柱首先用蒸馏水冲洗，再分别用20～30倍柱体积的甲醇、异丙醇和二氯甲烷冲洗，然后按相反顺序冲洗，最后用流动相平衡。

5.3 离子交换柱在低离子强度的缓冲液中长期使用会导致色谱柱失活，用稀酸缓冲液冲洗可使阳离子交换柱再生，而用稀碱缓冲液冲洗可使阴离子柱再生。

5.4 氨基柱，分析糖类的氨基柱可用0.02nmol/L的磺酸溶液冲洗，然后用水平衡。 6 气相色谱柱的维护 6.1 填充柱的老化

6.1.1填充好的柱应进行老化处理后才能使用，老化的目的是除去填充物中残留挥发性成分，并使固定液再一次均匀牢固地分布在载体表面上，久未使用的色谱柱在重新使用前亦需要再作老化处理，一般处理方法是将柱装入色谱仪中使载气缓缓通过色谱柱，然后在高于正

所估计的柱内死体积（ml） 柱长150mm 0.3 1.8 6.5 35 柱长250mm 0.5 2.2 9.3 49.3 第3 页

题 目 色谱柱使用管理规程 编 码 SMP/QC(00)030-01 常温度20～50℃、而不超过固定液最高使用温度时加热24h。为了避免柱污染检测器，在老化过程中不要将柱出口检测器相接，让其放空，如有条件，可以用程序升温方法老化柱，效果更好（以每分钟2～5℃的速率把温度升高到老化温度保持12～24h）。有些硅酮类的固定液如SE-30，可用一种特殊的顺序增强惰性及柱效，即保持250℃柱温1h，同时通氮气除去氧测定易分解的生物碱如硫酸阿托品含量时，色谱柱必须经过这样处理减少活性，否则产生色谱峰拖尾和组分分解。 6.2 毛细管柱的老化

6.2.1新毛细管柱需要老化，以除去残留溶剂及低分子量的聚合物。此外，用过的柱也应定期老化，尤其是出现基线漂移，某些色谱峰开始拖尾时，应该进行老化以除去样品中的难挥发物在柱头的积累。为了延长柱的使用寿命，要用高纯度的载气，载气中的氧气含量不宜高于1×10-6g/g，并且利用净化器除去较低级别气体中的氧气和碳氢化合物杂质，定期更换气体净化器填料，要及时更换毛细管柱密封垫以确保整个系统必须没有泄漏，并且要确保样品中不存在非挥发性物质，因为氧和污染物对固定液的分解有催化作用，会导致柱流失增强。毛细管柱的前端及末端数厘米最易损坏，如不挥发物的积累，进样溶剂的侵蚀，高温以及机械损伤等。可以在装柱之前切除这受损害的几厘米，不至于影响总的柱效，切除时切口应平整。毛细管柱如不使用，应小心存放，可用硅橡胶块将两端封闭，置于盒中。

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