慢病毒载体—包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息 慢病毒包装质粒可提供所有的转录

慢病毒载体—包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录

慢病毒载体—包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平的表达效应分子。

学术术语来源---

携带bcl-2基因慢病毒感染人原代卵巢颗粒细胞的凋亡 文章亮点：

1慢病毒做为介导基因转染的载体，具有独特的优势，既可以感染分裂细胞又可以感染非分裂细胞，原代培养的颗粒细胞能够直接反映体内的功能状况，因此，课题采用慢病毒介导基因成功感染原代培养的人卵巢颗粒细胞，望能为进一步研究卵巢早衰等内分泌相关疾病奠定理论基础。

2人原代卵巢颗粒细胞能够准确反映卵巢的功能状态，但由于原代细胞培养过程复杂、难度大、生长时间短，较难被各种基因载体转染，故与原代细胞相关的实验研究较少。

3实验采用人类原代培养的卵巢颗粒细胞为靶细胞，利用慢病毒将报告基因增强型绿色荧光蛋白及抗凋亡基因bcl-2导入原代培养的颗粒细胞中，结果发现抗凋亡蛋白Bcl-2的过度分泌能够抑制颗粒细胞凋亡，同时也表明携带增强型绿色荧光蛋白的空载慢病毒对体外培养的卵巢颗粒细胞具有一定的毒性，随着作用时间的延长及病毒滴度的增加，颗粒细胞的凋亡率明显增加，为研究临床细胞凋亡相关性疾病基因治疗奠定基础。 关键词：

组织构建；组织构建细胞学实验；bcl-2基因；慢病毒；卵巢颗粒细胞；细胞凋亡；基因转染；载体构建；卵巢早衰；增强型绿色荧光蛋白基因；国家自然科学基金

摘要

背景：慢病毒可以感染分裂及非分裂细胞，对于较难转染的原代卵巢颗粒细胞，慢病毒能否成功进行感染？

目的：探讨携带bcl-2基因的慢病毒感染原代人卵巢颗粒细胞的效率及对细胞凋亡的影响。

方法：利用分子生物学技术，构建携带bcl-2基因慢病毒载体，包装成高滴度慢病毒，将重组慢病毒在体外分别以不同感染复数(10，50，100，200，400)感染人卵巢原代颗粒细胞，感染24，48，72，96 h后观察感染效率及细胞增殖情况，同时采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况，利用反转录聚合酶链反应检测bcl-2基因的转录情况。

结果与结论：原代培养人卵巢颗粒细胞24 h即贴壁，集落样生长，呈多角形或梭形；当感染复数为100时，细胞的形态和生长不受影响，且感染效率较高，感染后72 h达高峰，其在颗粒细胞中的阳性率达60%；携带bcl-2基因的慢病毒感染原代培养的人卵巢颗粒细胞，可以过度分泌Bcl-2蛋白，能抑制卵巢颗粒细胞的凋亡。

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/biao.html