岛津LC-20AT操作规程

岛津LC-20AT型高效液相色谱系统标准操作规程

一、目的

规范岛津LC-20AT型高效液相色谱系统的使用和维护。

二、范围

本规程适用于岛津LC-20AT型高效液相色谱系统的使用和维护。

三、职责

质检室仪器分析员负责岛津LC-20AT型高效液相色谱系统的日常使用和维护。

四、操作规程

1、流动相的处理

1.1 过滤溶剂 溶剂在使用定要用0.45μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片本实验室

有水溶性和脂溶性两过滤膜供选择（反光面朝上），缓冲盐先用水膜过滤，和有机相混合后再用有机滤膜过滤，滤前先滤少量纯化水清洗滤器。

1.2 保持储液瓶的清洁

用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。

1.3保证溶剂的质量

一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。

1.4 故障及解决方法

1.4.1 流动相脱气不充分

流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵内引起压力波动，

增加噪音，色谱图上出现毛刺。可试用下列方法解决问题：流动相再脱气；采用有效的脱气方法或两种方法配合使用；改系统内混合系统外预混合。

1.4.2 流动相供给不畅

流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。输液管道上装沉子沉至瓶底，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。

过滤器阻塞引起管道和泵腔空化，压力不稳。过滤器应先用水超声，再用甲醇超声处理。这种情况下，流动相需要重新过滤。

1.4.3 流动相和储液器被污染

由于污染，噪音越来越大，检测器基线上升。污染物可能被泵以稳定的浓度打入系统，

而再以稳定的浓度流出来，所以在色谱图中不出余的峰。用梯度洗脱时弱流动相可以使

污染物聚在柱顶，流动相强度增加后污染物可能被洗脱出来一大的伪峰。有时基线噪音突然增大或突然提高，都是因为反复加进新的流动相或系统用得太久（通宵）所造成的。新加进的流动相有污染物或者流动相长霉，繁殖了细菌。

脏的储液器会污染清洁的流动相。每种流动相备有专用的储液器，或者定期报废储液器。已经污染的流动相一定要废弃掉。

2、仪器组成及电源

本系统可进行二元溶剂的梯度洗脱操作

2.1 仪器组成

本系统由LC-20AT型高压双泵（内含混合器）；SPD-M20A型二极管阵列检测器；7725i进样器；CO-Ⅳ柱温箱；色谱数据处理系统（LC-solution软件）；计算机；打印机。

2.2 电源

接通外电源及稳压器电源，依次打开泵、检测器、柱温箱，色谱数据处理系统，计算机的电源开关。

3、准备

使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤（有 机相和水相分别选用各自的专用滤膜），超声脱气10min以上待用。

根据待检样品的需要选用合适的色谱柱（柱进出口方向应与流动相流向一致）和定量环。 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm的样品过滤器过滤后待用。

检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

注意：真空抽滤装置和超声波装置为液相色谱实验室必须的辅助设备。

4、LC-20AT型高压输液泵的操作

4.1开机和平衡系统

先把吸滤头放入甲醇-水（10：90）或流动相瓶中，如果使用的流动相为缓冲盐溶液，应先用纯水冲洗10分钟左右再使用流动相，以免盐析出损坏系统。打开排液阀（将泵上部的黑色旋钮逆旋转90～180度），按purge键排液2～3分钟，purge完毕后关闭排液阀，按pump键，泵启动，指示灯亮，按func键调流速（流速由低到高慢慢升至1.0ml/min），

如有柱温条件可同时开启柱温箱，平衡系统，此时可以同时进行手动进样器的清洗，手动进样器清洗液一般使用与流动相比例接近的不含缓冲盐的试剂也可以用甲醇：水＝50：50代替，观察检测器基线平稳后即可做样。

注意：如系统为正相和反相交换使用，应先将所有管路用异丙醇清洗后再更换新流动相使用。

4.2清洗系统和关机

4.2.1手动进样器清洗：用注射器吸20ml超纯水后套上冲洗头，将清洗头轻轻顶在进样口上(不宜用力太大，否则容易损坏进样口)，使进样阀保持在Inject位置，慢慢将水推入，水将通过注射针导入口、引导管、注射针导入管和注射针密封圈，由样品溢出管排出。

尤其使用完缓冲盐流动相时，清洗时使用下面工具，先用注射器吸入20毫升蒸馏水，套上针头，插入泵头清洗管任意一端，推入蒸馏水，另一端流入废液杯，重复2～3次即可！

4.2.2色谱柱清洗：继续以分析中使用流动相冲洗10分钟以上，待基线平稳后关闭检测器，冲洗色谱柱。如流动相不含缓冲盐，可以用甲醇：水＝70：30（或用纯甲醇）直接冲洗30分钟以上后把流速设为零，然后关闭所有仪器设备，顺序为：先退出工作站软件，再依次关闭系统控制器、检测器、柱温箱、泵；如流动相含缓冲盐可先用纯水冲洗10分钟，再用甲醇：水＝10：90冲洗20～30分钟后，再用甲醇：水＝70：30（或用纯甲醇）冲洗30分钟，观察泵压是否稳定，稳定后流速降为零后再关闭仪器各部分电源，然后关闭总电源离开实验室。

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