ISO7932-2004中文版

蜡样芽孢杆菌菌落计数方法

一、范围：

适用于各类食品中蜡样芽孢杆菌的检测，也适用于食品生产加工区域环境中蜡样芽孢杆菌的检测。

二、规范性引用文件

ISO6887-1:1999初始样品与稀释液的制备

ISO/TS11133-2:2003培养基的品质检测Performancetesting

三、要点

3.1一定量的检测样品接种在平皿中的选择性培养基的表面；

3.2在有氧的环境中，30℃培养18-48小时；

3.3计数

四、试剂

4.1MYP培养基-甘露醇卵黄多粘菌素琼脂培养基

4.2Sheepbloodagar-绵羊血琼脂培养基

五、仪器

5.1高压灭菌锅

5.2鼓风干燥箱或培养箱37℃±1℃--55℃±1℃（干燥凝固培养基）

5.3生化培养箱：30℃±1℃

5.4恒温水浴锅：44℃-47℃

5.5PH计

5.6培养皿：90mm（玻璃或塑料）

5.7移液管或移液枪：1ml、10ml

5.8L形涂抹棒3.5mm*20mm

六、实验样品制备

样品有代表性，且不得在送样或储存过程中破损或性状改变。

七、操作步骤

7.1初始样液与稀释样液制备（ISO6887-1）

7.2接种与培养

7.2.1分别移取0.1ml样液至2个平板的培养基表面，每个稀释度2个平板。

7.2.2快速的用涂抹棒把样液在培养基表面涂抹均匀，小心不要使涂抹棒触碰平板壁，每个平板使用一个灭菌的涂抹棒，盖好平皿盖，放置15分钟，使样液被培养基吸收。

7.2.3倒置平板，置30℃培养18-24小时，若菌落不清晰，继续培养24小时。

7.3、菌落计数

选取2个合适的连续稀释度，计数＜150的菌落数量。

菌落大、粉红色（表示不发酵甘露醇），周围有粉红色的沉淀环（表示产生卵磷脂酶）。

7.4、证实实验

7.4.1挑取5个可疑的菌落，做证实实验，若菌落弥漫，或没有清晰独立的菌落，则挑取可疑菌落划线分离于选择性培养基(MYP)上，置30℃培养18-24小时。然后做证实实验。

7.4.2溶血反应

挑取菌落划线或针刺接种于绵羊血琼脂培养基的表面，置30℃培养24h±2h。

八、结果计算

8.1菌落计数

8.2若没有典型菌落，则计数<1cfu/ml(液体样品)或<10cfu/gram（固态样品）。

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