基于ITS2序列的秤星树等冬青属8种药用植物的分子鉴别

[目的]建立ITS2区段的秤星树及其同属几种药用植物的分子鉴别方法。[方法]以秤星树等几种药用植物为材料,采用离心柱型试剂盒提取总DNA,采用一对通用引物对ITS2区段进行PCR扩增和测序;HMMer法对测序结果进行注释得到ITS2序列;MEGA软件分析,寻找差异位点,构建系统发生树。[结果]测序后注释得到的秤星树等8种冬青属药用植物ITS2比对序列为254 bp,种间存在85个差异位点。[结论]ITS2区

安徽农业科学。 unl fA h i .Si2 1 4 ( )2 8 2 8 2 8 J ra o nu o A c.02,0 5:64— 6 6,69

责任编辑

石金友

责任校对

况玲玲

基于 IS T 2序列的秤星树等冬青属 8种药用植物的分子鉴别童家 ,赘黄琼林，新业，马张晓丽，詹若挺，徐鸿华 (广中药学药院广广 50;广中 1州医大中学，东州 1 6.州医 . 0 2 0

药大学中药资源科学与工程研究中心，教育部(省部共建 )中药资源科学重点实验室，广东广州 5 o0 ) 10 6

摘要[目的]建立 IS T 2区段的秤星树及其同属几种药用植物的分子鉴别方法。[方法]以秤星树等几种药用植物为材料，用离心柱采型试剂盒提取总 D A, N采用一对通用引物对 I区段进行 P R扩增和测序； M e法对测序结果进行注释得到 IS 1 C H Mr T 2序列； E A软件 M G分析，寻找差异位点，构建系统发生树。结果][测序后注释得到的秤星树等 8冬青属药用植物 IS种 T2比对序列为 24b,间存在 8 5 p种 5个差异位点。1结论]IS T 2区可用于鉴别秤星树与同属几种药用植物。 关键词秤星树 ( e a r a( o k e A )C a p e e t.;青属； S; l p U H o .t m. hm .xB n )冬 fx s e h I 2序列分析 T中图分类号 R2 4 1 8. 文献标识码 A 文章编号 0 1— 6 1 2 1 )5— 2 8— 3 57 6 1 (0 2 0 0 6 4 0M oe ua d nt c to fle s el t Ot e e isi h e u lx lc lr l e i a n o lx apr l wih h rSp ce n t e g n sle L.Ba e I I 2 S q e c ay i f i a s d O1 Ts e u n e An lss

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IS e un e 1 to A e A w set ce yrae t i cnrua ou a) ap io nv r l r r weeue rP R a T 2 sq ec . Meh d1 f rDN a xr tdb egn t( etfgl lmnr, ar f ies i s r sdf C m— t a k i c u a p me opl c t n a d s q e cn fI 2 e in h n.he s q e e fdfee ts mpe r n oae y HMMe to t c ur T 2 s . i ai n e u n ig o Ts rgo .T e t e u nc s o i rn a lswe e a n ttd b i f o rmeh d o a q ie I S e q e e . s d u o h lil e u n e ain n fte a l e Ts e u n e . yo e tcte sc n tu td usn h ot r u nc s Ba e p nt e mu t e s q e c l me to mpi d I 2 sq e c s aph lg nei r ewa o sr ce ig te sfwae p g h i f

ME A. sl12 4 b T 2f g n fec p c sw r ba e a dteewee8 iee t aese ew e p ce. C n ls n G 1 ut 5 pIS r me t ahsei eeoti d,n h r r 5 df rn s i sb te nseis『 o cui] Re a o e n f b t oI 2 rgo a e u e o ie tf e s rl r m eaie me iia lnsi h e u e . e in c n b s d t d n i f xa p el fo rlt dcn lpa t n te g n sf x L. yl a v lKe r le s el le y wo ds lx aprla:f x L.:I ;S q n e a ay i 1 e ue c n lss

秤星树 ( e sr l H o .t m. h m .xB nh ) l f xapea( o

k e A )C a p e et. l

秤星树及其同属近缘药用植物的 IS T 2序列进行比较分析， 以期在分子水平上为秤星树的种质来源及药材鉴定提供一定的依据。1材料与方法 11材料 .

系冬青科( qilca) A ufi ee冬青属(l .落叶灌木， oa 1xL ) e其以根人药，用于治疗流感和扁桃体炎等疾病，常 J研究表明，其含有抗肿瘤活性成分。秤星树大多为野生，而破坏性的采挖使得药材资源日渐减少，场有以茎枝代替根入药的趋市势。为了保证药材质量，中医药大学与企业合作开展秤广州星树 G P种植研究。然而， A冬青属近缘植物形态非常相似，

11 1研究对象。样品， ..由广州中医药大学徐鸿华教授鉴定植物学名，凭证标本保存于广州中医药大学药用植物标本

甚至有部分品种在分类学上依然存在争议 5 -。前人研究]及作者调查发现秤星树与同属植物满树星 (e cl la l fxau o t ea N ki的植物形态及药材都非常相似；些地区甚至在用药 aa)有

室 (表 1。其中登录号 G 448、 J962 A429、见 ) Q 337 A4 28、 J 6 1 9D 209 Q 07 8为 G n a k下载的序列。 eB n表 1秤星树及同属几种植物样品信息

过程中把他们等同称为“岗梅”6;[二者组织显微特征亦甚相 3似，也没有可供鉴别化学成分的方法。另外，冬青 ( e毛 l fx p bs n ok e A ) ue esH o .t m.与秤星树的根及茎表面具有点状皮 c

孔，为相似，易混淆。为了保证种质和药材质量，也甚容需要建立一种明确的鉴别方法。

核糖体 D A第 2 N转录间隔区( tnlr s bds c ie a tnc e p— n r a r i ae2r i nc ar oo a D A, s ) r g n f ul ri s l N I 2序列较短，于 eo o e b m T有利进行 P R扩增及测序；具有足够的变异位点，于鉴别 C并对近缘物种成功率较高；其两端的核糖体 D A的 5 8 N . s及 2 S 8端序列较为保守，有利于设计通用引物，可作为通用的植物

D A条形码( N a oe鉴别序列。另外， s序列 N D Abr d ) c 8 I2 T已被用于冬青

属植物某些类群的系统学分析”。试验对 基金项目广东省科技计划项目( 0 8 0 00 0 9 0 0339 0 0; 2 0 A 3 1 10;2 1 1 10 0 7 02 1 B 9 40 9 ) 0 1 0 00 1 1。

作者简介童家赞(9 9 )男，建龙岩人，师， 17一，福讲在读博士，事中从 药鉴定学教学及相关科研工作， - i t g@ ghc eu Ema:o i zt l ny m.d . a。通讯作者，, n教授博士生导师，从事中药资源开发利用 与保护的研究和教学工作，— i:og—j yn bt i Ema t l n iu@ o l a ma .co m 0

OI . 1 0 收稿日期 2】 1 _ 3

112主要仪器。M i e oa Te a Cc r C .. JMn Pr n hr l yl R仪， i sl m eP

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