巨噬细胞吞噬作用的观察
更新时间:2023-04-08 03:00:01 阅读量: 实用文档 文档下载
四川大学实验报告
题目:巨噬细胞吞噬作用的观察
实验目的
1. 通过小鼠腹腔巨噬细胞对异物吞噬作用的观察,了解巨噬细胞在非
特异性免疫中的功能。
2. 掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。
3. 学习小鼠腹腔注射的操作方法和步骤。
实验原理
1. 向小鼠腹腔内注射无菌淀粉肉汤,排异反应使小鼠产生大量巨噬细
胞,且巨噬细胞吞噬淀粉肉汤后不会对细胞造成伤害,反而被“喂养” 。连续多天注射使小鼠腹腔内聚集大量巨噬细胞。
2. 台盼蓝是一种生物染料,专一染色死细胞。活细胞的细胞质膜对台
盼蓝有不透过性。巨噬细胞吞噬含有台盼蓝的淀粉肉汤后,可以消化其中的淀粉和蛋白质,但是不能消化其中的台盼蓝,因此台盼蓝会聚集在溶酶体中。是一种溶酶体染色的方法。
3. 当向小鼠腹腔中注射鸡红细胞时,鸡红细胞作为外源物质,会被小
鼠细胞识别并吞噬,在适当的的时机,我们就有可以在显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程
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.实验材料及设备
1. 实验材料:
a) 连续2~3 天向腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤的小鼠一只
b) 鸡红细胞悬液
c) 生理盐水
2. 实验设备:
a) 普通光学显微镜
b) 载玻片、盖玻片若干
c) 注射器
d) 染色皿若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等
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四.实验方法及步骤
1. 小鼠处理与巨噬细胞采集
a) 连续2-3 天(每天一次)向小鼠腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤。
b) 选择已注射淀粉肉汤3 小时以上的小鼠一只。
c) 一人控制住小鼠,露出腹部,另一人用注射器向小鼠腹腔中注射
1ml 鸡红细胞悬液。按摩小鼠腹部。
d) 20-30 分钟后,再注射1-1.5ml 生理盐水( 0.9%NaCl)按摩小鼠
腹部。
e) 3 分钟后,引颈法处死小鼠
f) 迅速在腹腔剪开一个不大的开口 (注意要剪开腹部的肌肉层),用
无针头的注射器吸取腹腔液。
g) 在载玻片上滴2-3 滴腹腔液,加上盖玻片,在显微镜下观察。
2. 观察
在不同倍数下观察样本,找到正在消化或者吞噬鸡红细胞的巨噬
细胞。注意避免玻片液体干涸。
五.实验结果
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巨噬细胞
图 1 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞装片(100X 物镜不染色)左上角示未知种类细胞
100x 物镜放大倍数,光镜下可见随机分布的不同种类的细胞。巨噬细胞体积最大,未吞噬鸡红细胞时呈边缘不规则的球状,可见胞质中存在不均匀分布内含物。部分巨噬细胞中可见一个或多个颜色更深的橄榄形鸡红细胞。小鼠红细胞呈现两面凹的圆饼状,并且存在一种外表呈不规则突出的细胞,大小和红细胞相似。巨噬细胞较为固定,可见小鼠红细胞在生理盐水中悬浮飘动。长时间录像观察可见巨噬细胞伸出伪足缓慢移动。
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四川大学实验报告六.实验讨论
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1. 实验结论:
当小鼠腹腔中的巨噬细胞遇到鸡红细胞以后,鸡红细胞属于 外源性抗原。非特异性识别作用使巨噬细胞迅速聚集并开始 吞噬鸡红细胞。在显微镜光镜下可见正在或已被巨噬细胞吞 噬的鸡红细胞。
2. 讨论一:在光镜下可观察到腹腔提取液中存在外表呈 不规
则突出的细胞,它是什么细胞,为什么?
a) 猜想一:该细胞为小鼠血小板
查询资料可知: 血小板是从骨 髓
成熟的巨核细胞胞浆解脱 落下来
的小块胞质。 所以血小 板并没有
细胞结构, 且体积远 小于红细
胞。和观察结果不 符,故不是小
鼠血小板 。图 2 红细胞血小板巨噬细胞电镜观察
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b ) 猜想二: 该细胞为部分失水的小鼠红细胞 光镜下观察发现这样一组细胞
(图三):
中下是正常的小鼠红细胞, 上可
以看出是略微有些皱缩的小
图 3 未知细胞、
鼠红细胞, 而左上为未知细胞。 可 见三者体积相似, 颜色相似, 左上未知细胞的 伪足数量也和右侧失水皱缩红细胞凸角数相 似。同时由图四可见该未知细胞有一个面较 平整。和小鼠红细胞扁平形状相对应 故此可推测出该细胞为 部分失水的小鼠红细 胞。产生的原因可能是载玻片上的生理盐水不断蒸发,导致边 缘的盐浓度升高,造成红细胞失水。 3. 讨论二:在巨噬细胞周围,有时 细
胞“吐出”的透明空泡,这是 什么
原理?
巨噬细胞除了非特异性识别外 来抗
原和衰老死亡体细胞外,还兼有 分泌能
力。在某些情况下,巨噬细胞 可以通过形
成空泡来将水解酶分泌
萎缩红细胞、 正常红细胞对比
图 4 可见扁形形状的未 知细胞
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到细胞外,抵抗病原体的侵袭,由于水解酶溶解时无色,故
观察时容易表现为一个透明的空泡。
且通过文献查询可知,部分巨噬细胞在凋亡期也会产生空泡
七.参考文献
[1] 李津婴, 许燕群. 红细胞形态学对溶血性疾病的诊断意义[J]. 诊断学理论与实践,2010,(3):214-217.
[2] 翟中和,王喜忠,丁明孝等. 《细胞生物学》[M]. 高等理科教育,2004(1):123-128.
[3] 解丽芳, 王甜, 杨军. 对“小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用的观察实验” 的拓展探索[J]. 生物学杂志,2012,(5):112-113.
DOI:10.3969/j.issn.2095-
1736.2012.05.112.
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