正交试验法优选通络颗粒剂的提取工艺

正交试验法优选通络颗粒剂的提取工艺

正交试验法优选通络颗粒剂的提取工艺

（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）

作者：鞠海,马秉智,王巍,李淑芳,陆进

【摘要】 目的 优选通络颗粒剂的提取工艺。方法 采用正交试验法,分别对水提部分和醇提部分进行提取工艺考察。水提部分,以提取次数、加水量、提取时间为考察因素,以芍药苷含量和浸出物重量为指标；醇提部分,以乙醇浓度、提取次数、溶剂用量、提取时间为考察因素,以橙皮苷含量和浸出物重量为指标,对提取工艺方案进行优选。结果 优选的提取工艺为：水提部分,处方药材用12倍药材量的水煮提3次,每次1.5 h；醇提部分,加10倍药材量的60%乙醇回流提取2次,每次1.5 h。结论 最佳提取工艺的确立为通络颗粒剂的生产提供了理论上的依据。

【关键词】 通络颗粒剂；芍药苷；橙皮苷；正交试验

Abstract：Objective To optimize an extracting technology for Tongluo granule by orthogonal design. Methods Water-extracting fraction：with the weight of water-extracting fraction and paeoniflorin content as the indexes, extracting times, water volume and

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extracting time were screened by L9(34) orthogonal test, Alcohol-extracting fraction：with the weight of alcohol-extracting fraction and hesperidin content as the indexes, alcohol concentration, extracting times, alcohol volume and extracting time were screened by L9(34) orthogonal test. Results The optimal extraction conditions were as follows：water-extracting fraction：extracting 3 times with 12-fold water, 1.5 hours for each time；alcohol-extracting fraction：refluxing and extracting 2 times with 10-fold 60% alcohol, 1.5 hours for each time. Conclusion The results can provide theoretical basis for production of Tongluo granule.

Key words：Tongluo granule；paeoniflorin；hesperidin；orthogonal design

通络颗粒剂由赤芍、枳实、丹参、三七、黄芪等药加工而成,具有疏肝理气、化瘀通络的功能,用于肝郁气滞、瘀血内结、胞脉不通证,主治慢性子宫内膜炎、输卵管炎、盆腔炎性包块及盆腔粘连等。处方中部分中药含有脂溶性有效成分,部分中药含有水溶性有效成分。为此,本实验用水提取黄芪、赤芍、柴胡、甘草等,用乙醇提取枳实、丹参等,采用正交设计法对提取工艺条件进行优选。

1 仪器与试药

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Shimadzu LC-10AT高效液相色谱系统,包括SCL-10Avp系统控制器,Shimadzu SPD-10Avp紫外检测器,Shimadzu LC- 10Atvp二元泵,Shimadzu CTO-10Asvp柱温箱,class-vp色谱工作站(日本岛津)；L-200SM型电子天平(日本岛津)；Libror EB-280型电子天平(日本岛津)。

通络颗粒剂(中日友好医院药学部制剂室自制)；芍药苷(中国药品生物制品检定所,批号0736-9811),橙皮苷(中国药品生物制品检定所,批号0721-200010)。乙腈、甲醇为色谱纯,磷酸二氢钾为分析纯,水为高纯水。

2 水提部分提取工艺的优化

2.1 正交表的设计

以加水量(A)、提取时间(B)、提取次数(C)为因素,各设3个水平,作L9(34)正交试验,具体安排与结果见表1。表1 水提部分提取工艺因素水平表（略）

2.2 对照品溶液的制备

精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的芍药苷对照品,加甲醇制成每1 mL含1.009 6 mg对照品溶液。

2.3 色谱条件

色谱柱：HiQsil C18V(200 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈(83∶17)；流速：1 mL/min；检测波长：230 nm；

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柱温：30 ℃。在此色谱条件下,阴性无干扰,芍药苷与其他组分可达到基线分离,保留时间约为7 min。

2.4 浸出物重量和芍药苷的含量测定

将药材按处方量称取,根据表1设计的不同条件,用水煎煮提取,滤过,得9份滤液。将滤液减压回收,干燥,得干膏,计算浸出物重量。称取干膏约0.7 g,共9份,置具塞锥形瓶中,各精密加入75%甲醇25 mL,密塞,称定重量,超声处理20 min,放冷,用75%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。弃去初滤液,取续滤液,经0.45 μm微孔滤膜过滤,精密吸取滤液10 μL,注入液相色谱仪,测定浸出物中芍药苷的含量。结果见表2～表4。表2 水提部分提取工艺实验安排及结果（略）表3 极差分析（略）表4 水提部分提取工艺方差分析表（略）注：*F0.05(2.2)＝19,**F0.01(2.2)＝99。

实验结果表明,各考察因素对浸出物重量和芍药苷含量的影响大小顺序为CAB,正交设计所得最佳实验方案分别为C3A3B3和C3A3B2,考虑到大生产的成本等各方面因素,确定最佳提取方案为A3B2C3。

2.5 验证实验

因所选方案A3B2C3是正交表中没有的方案,故需做实验予以验证,验证2次,其平均值为：浸出物重量21.83 g,芍药苷含量为454.49 mg。

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因此,确定通络颗粒水提部分最佳提取工艺条件为A3B2C3,即粉碎过的药材加12倍水,煎煮1.5 h,共提取3次。

3 醇提部分提取工艺的优化

3.1 正交表的设计

以乙醇浓度(A)、提取次数(B)、溶剂用量(C)、每次回流提取时间(D)为因素,各设3个水平,作L9(34)正交试验,具体安排与结果见表5。 表5 醇提部分提取工艺因素水平表（略）

3.2 对照品溶液的制备

精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的橙皮苷对照品,加甲醇制成每1 mL含0.1 mg对照品溶液。

3.3 色谱条件

色谱柱：HiQsil C18 V柱(200 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：甲醇-8%醋酸溶液(30∶70)；流速：1 mL/min；检测波长：282 nm；柱温：30 ℃。在此色谱条件下,阴性无干扰,橙皮苷与其他组分可达到基线分离,保留时间约为13 min。

3.4 浸出物重量和橙皮苷的含量测定

将药材按处方量称取,根据表5设计的不同条件,用乙醇加热回流提取,滤过,得9份滤液。将滤液减压回收,干燥,得干膏,计算浸出物重量。称取干膏约0.7 g,共9份,置具塞锥形瓶中,各精密加入甲醇25 mL,密塞,称定重量,超声处理20 min,放冷,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。弃去初滤液,取续滤液,经0.45 μm微孔滤膜过滤,精密吸取滤液

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10 μL,注入液相色谱仪,测定浸出物中橙皮苷的含量,结果见表6～表

8。表6 醇提部分提取工艺实验安排及结果（略）表7 极差分析（略）表8 醇提部分提取工艺方差分析表（略）注：*F0.05(2.2)＝19,**F0.01(2.2)＝99。

实验结果表明,各考察因素对浸出物重量的影响大小顺序为CABD,对橙皮苷含量的影响大小顺序为ACDB,正交设计所得最佳实验方案分别为C3A3B2D2和A3C3D2B3,考虑到大生产的成本等各方面因素,确定最佳提取方案为A3B2C3D2。

3.5 验证实验

由于所选方案A3B2C3D2是正交表中没有的方案,故尚需做验证实验,验证2次,其平均值为：浸出物重量19.28 g,橙皮苷含量为466.69 g。因此,确定通络颗粒水提部分最佳提取工艺条件为A3B2C3D2,即粉碎过的药材加10倍量的60%乙醇,每次回流提取1.5 h,共提取2次。

4 讨论

通络颗粒剂由10味中药组成,芍药苷是主药赤芍主要有效成分,具有解痉、镇痛、镇静、降温解热、抗氧化作用。中药复方制剂中以芍药苷进行含量测定的报道较多,高效液相色谱法应用最广[1-4],故本试验采用高效液相色谱法测定芍药苷含量。

笔者比较了用无水甲醇、50%甲醇、75%甲醇分别作提取

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溶剂对芍药苷含量的影响,后两种提取溶剂提出率都较高,但50%甲醇提取之样品中含有糖、鞣质、粘液质等,不利于含量测定,故选用75%甲醇作为芍药苷含量测定的提取溶剂[5]。

【参考文献】

[1] 李正荣,万 新,周 辉.RP-HPLC法快速测定赤芍中芍药苷含量[J].华西药学杂志,1995,10(3)：141－143.

[2] 周新蓓,涂瑶生,刘发锦.高效液相色谱法测定赤芍浓缩颗粒中芍药苷的含量[J].中国实验方剂学杂志,1999,5(3)：5－6.

[3] 梁 宏,王春芳.高效液相色谱法测定八珍丸中芍药苷的含量[J].药物分析杂志,1999,19(1)：44－46.

[4] 程新萍,孙文基,李新生.赤芍药材中芍药苷的含量考察

[J].西北药学杂志,1998,13(1)：41－42.

[5] 曹解宇,章崇仪.赤芍中芍药苷含量测定提取方法的比较研究[J].中成药,1997,19(11)：6－7.

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/b1o1.html