EPS的提取及各成分的测定
更新时间:2024-04-18 07:31:01 阅读量:1 综合文库 文档下载
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一、 胞外聚合物的提取
采用阳离子交换法,离子交换树脂为:陶氏钠型离子交换树脂20~50mesh。 提取缓冲溶液的物质组成:2mmol Na3PO4、4mmolNaH2PO4、9mmolNaCl和1mmolKCl配成1L溶液。 提取步骤:
1、 离子交换树脂在提取缓冲溶液中清洗1h,晾干备用;
2、 取5ml污泥,加入10ml纯水,在4000r/min,4℃条件下离心5min,弃去10ml上清液,加入10ml缓冲液再离心,此过程循环三次(所收集上清液为溶解性EPS);
3、 最后一次弃去上清液10ml,加入10ml缓冲液,冷冻条件下超声破碎,破碎条件为20W,2min;
4、 称取适量的树脂(约80g/gVSS)置于25ml的烧杯,将破碎液倒入,恒温20℃搅拌2h;
5、 取上清液在10000r/min,4℃条件下离心30min;
6、 再取上一步离心后上清液在同等条件下离心15min,循环3次; 7、 上清液保存在4℃条件下,备用。 二、EPS中多糖的测定(蒽酮比色法)
试剂:0.2%蒽酮(0.2g蒽酮溶于100ml的浓硫酸) 测定步骤: 1、 2、 3、 4、
取EPS样品2ml置于哈希管中; 缓慢注入4ml0.2%蒽酮溶液;
冰浴10min,再在100℃条件下消解10min,最后冰浴10min; 冷却室温后,在625nm处测其吸光度。代入标线计算;
标线的配置用优级纯葡萄糖。 三、EPS中蛋白质的测定(Lowry法) 1、 试剂
试剂一:143mmol/LNaOH和270mmol/LNa2CO3; 试剂二:124mmol/L酒石酸钠; 试剂三:57mmol/LCuSO4;
试剂四:试剂一:二:三=100:1:1配成; 试剂五:福林酚试剂:纯水=1:1。 2、 测定步骤:
① 取EPS样品2ml置于哈希管中 ② 加入2.4ml试剂四,震荡摇匀; ③ 加入0.4ml试剂五,迅速震荡摇匀;
④ 充分静置45min(混合),在750nm处测定其吸光度,代入标线计算。 标线的配置使用牛血清蛋白。 四、EPS中DNA的测定(二苯胺比色法)
1、二苯胺试剂:1g结晶二苯胺,溶于100ml分析纯冰醋酸中,加60%过氯酸10ml混匀,临用前加入1ml1.6%乙醛溶液。 2、测定步骤:
① 取EPS样品2ml置于哈希管中; ② 加入4ml二苯胺试剂; ③ 60℃水浴1h;
⑤ 冷却后,在595nm处测定吸光度,代入标线计算。 标线的配置使用小牛胸腺DNA。
溶解态EPS是在污泥混合液中以悬浮态存在,沉淀上清液或者低速离心上清液即是;结合型EPS分为LB-EPS和TB-EPS,LB-EPS是通过高速离心提取(文献中是5000r/min),而TB-EPS需要化学试剂或者其他加热或者超声提取。我们采用的CER法是离心是10000r/min,所以两部分都包括了。
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