病原生物学实验设计论文 猩红热致病菌分离、鉴定、致病力分析及药敏实验

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病原生物学实验设计论文

论文题目：猩红热致病菌分离、鉴定、致病力分析及

药敏实验

指导老师：韩秀霞 赵巍

小组成员：

班 级：2011级临床五年制七班

2013年5月29日

研究内容摘要（200字以内） 该论文已猩红热病原菌为研究对象，取病人咽拭子进行分离培养，继而进行纯化增生，将分离后的病原菌进行涂片镜检以及触酶试验，已验证其为A组乙型溶血链球菌。然后对其进行病原菌的致病力分析和药敏实验，验证病原菌对各种抗生素的敏感程度。 关键词 （3-5个）：A组乙型溶血链球菌、猩红热、病原菌分离、鉴定、致病力分析及药敏实验 一、选题的目的和意义（主要说明：进行研究的必要性、预期达到的目的、实际应用价值和学术意义）（600字以内） 进行研究的必要性：2005年-2011年中国共报告的猩红热病例225 538人，其中死亡5人。2011年中国猩红热发病率较往年大幅度升高。存在春冬两个发病高峰。尤其是2011年上半年，香港澳门等地区相继报道猩红热疫情爆发，香港发生因猩红热致2名儿童死亡事件。这是近十年来猩红热疫情最严重的一年。近年来严重侵袭性A组β型溶血性链球菌感染在欧美一些国家再次增多，人类开始重新关注该群菌引起的感染问题 预期达到的目的：通过设计实验进行病原菌分离、鉴定、致病力分析及药敏实验，得到猩红热的快速诊断的方法及病原菌对药物的敏感程度的情况分析。 实际应用价值：通过对病原菌快速的诊断，及时判定患者的病因病情，为医生的准确快速治疗提供依据；通过致病力分析得到病原菌的致病力状况，为猩红热病原菌的治疗提供理论基础；通过药敏试验，找到治疗的最佳方案，从而可以快速的解除病人痛苦，并且可以减缓病原菌耐药性的产生。 学术意义： A组β型溶血性链球菌是链球菌中对人感染作用最强的细菌。除引起猩红热外还可引起急性肾小球肾炎，风湿热等并发症。对疫苗的研制有一定的意义。致热外毒素具有超抗原作用，寻找合适的免疫球蛋白对于疾病的检测具有重要意义 二、国内研究现状（综述：相关研究进展与现况、今后发展动态、待解决问题、主要参考文献 ） （1000字以内，5篇以上参考文献）

相关研究进展与现况: 中国网络电视台消息（中国新闻）：针对近日媒体报道的香港出现猩红热疫情，中国卫生部专家23号表示，今年中国内地猩红热疫情也有一定上升，但没有出现死亡病例。专家表示，猩红热是一种10岁以下儿童比较常见的急性呼吸道传染病，普通的临床表现是非常轻微的急性呼吸道传染，经过正规治疗是可以痊愈的，只有极少数病人会出现心脏损害合并症，但如果及时就医，使用抗生素治疗也可以痊愈。在我国通过法定报告传染病系统，每年都有报告，今年我国内地和香港情形类似，猩红热疫情也有一定上升。猩红热疫情每三年有一个流行周期，从2005年以来，最高发生在2007、2008年，当前的猩红热疫情严重性没有超过2007年。中国疾控中心疾控办副主任余宏杰最近在卫生部新闻通气会上说，2013年正处于我国猩红热疫情的高发年份。今年内地和香港情形类似，猩红热疫情也有一定上升。 今后发展动态(预防): 猩红热目前尚无疫苗可预防，特异性治疗首选青霉素，一般用药一天后发热消退，皮疹很快消失。治疗需足量使用青霉素10天。本病多见于小儿，尤以5—15岁居多，潜伏期1～7天，一般为2~5天，临床主要表现为：发热、咽峡炎、皮疹，易反复发作。所以对于猩红热疾病，研制疫苗是今后发展最好的方向。 待解决的问题： 滥用抗生素导致耐药 去年底，在全年的流行病统计中，猩红热患者人数是2012年的两倍，出现这么多患者，一方面是到了猩红热的高发年份，而另一方面是滥用抗生素导致猩红热致病菌耐药。 猩红热主要袭击5-8岁的儿童。这几年阿奇霉素的使用量较大，因而造成九成猩红热致病菌——A族β溶血性链球菌对阿奇霉素、红霉素耐药。无论孩子打多少钱的阿奇霉素，对猩红热基本没效。而猩红热致病菌对青霉素尚未发现耐药性，其实是一种最为便宜还管用的治疗药物。 小诊所最易滥用 阿奇霉素到底和青霉素差多少钱呢?阿奇霉素的品种很多，像贝贝用的儿童阿奇霉素注射液一次全下来得100多元。而该院普通青霉素每支的价格仅为1.59元，按一次两支计算，加上耗材和葡萄糖，注射一次青霉素全部费用也不超过10元钱。青霉素没赚头，还要试敏，既麻烦又要承担风险，一些小诊所自然会选择高利润、低风险的“阿奇”，而一些对青霉素过敏的患者，只能使用较为昂贵的头孢类药物。所以目前尚需解决猩红热致病菌的耐药性。 参考文献： 1 李雷雷，蒋希宏，隋霞，倪大新，金连梅，冯子健 中国2005-2011年猩红热

疫情流行病学分析 《中国公共卫生》2012年6月第28卷第6期 826 2 杨葵 咽拭子中A群乙型溶血性链球菌的耐药分析及临床意义 《中华中西医杂志》 2005年第6卷第23期 3 梁云梅 杨永宏 A组β溶血性链球菌与猩红热的相关研究 《微生物学杂志》 2009年7月第29卷第四期 4 于雪明，金春光，宋启发，毛国华，方挺 一起A群链球菌暴发疫情的实验室鉴定 《中国卫生检验杂志》 2009年5月第19卷第5期 5 张代涛，张奕，张莉，王全意 WSARE计算方法在猩红热爆发预警中的应用 《中国预防医学杂志》 2012年1月第13卷第1期 三、拟采取的技术路线及实验方案 （1000字以内） 技术路线： 咽拭子 血琼脂平板 平板划线法 分离培养 血琼脂平板 纯化增菌 鉴定 涂 触 致 药 片 酶 病 敏 镜 实 力 实 检 验 分 验 析 实验方案： 1 分离培养 使用咽拭子采取病人咽喉部的样本，使用血平板培养，37℃孵育24小时后，观察并挑选单个菌落接种。 2 纯化增菌

将挑选出的单个菌落在血平板上划线培养，37℃孵育24小时后，观察生长情况。 3 鉴定 3.1涂片镜检 将纯化后的病原进行革兰染色，镜检观察病原菌的情况 3.2触酶试验 取洁净玻片一张，中央划线分离，滴加过氧化氢一滴，取病原菌于其中磨匀，约30秒后观察有无气泡出现，有气泡出现为阳性，无气泡出现为阴性。用生理盐水作对照，从而判断触酶试验阴阳性。 4 致病力分析 取分离之后的致病菌，制成不同浓度细菌悬液用分光光度计测定其分光度值。分为多组，每组配10只成长状况良好相同的家兔，对其耳缘静脉注射致病菌悬液，正常饲养一段时间之后观察家兔的健康状况，选出半数致死的一组，记录其分光度值。 5 药敏试验 1 取分离之后病原菌，在血平板上做密集划线接种 2 将血平板分为7份，分别取青霉素G和万古霉素氯霉素、头孢噻肟、左氧氟沙星红霉素、阿奇霉素的药片，牢贴于培养基表面相对位置 3 37℃孵育24小时后，观察生长情况。 四、预期结果（600字以内） 实验结果 1 分离培养 2 纯化增菌 血平板上形成灰白色 、表面光滑、湿润、边缘整齐、直径0.5~0.75mm的细小菌落。菌落周围形成较宽的的透明溶血环。 3鉴定 3.1 涂片镜检 细菌为球形或椭圆形，直径0.6~1.0um。呈链状排列，长短不一。无芽孢，无

鞭毛。培养早期形成透明质酸的荚膜，随着培养时间的延长，荚膜消失。初步诊断为链球菌属 3.2 触酶试验 无气泡产生，根据生理盐水对照组可判断为触酶阴性 结论：致病菌为A组β溶血性链球菌 4致病力分析 选取半数致死时的浓度作为其ID5药敏试验 50 发现青霉素G和万古霉素对A群乙型溶血性链球菌的敏感性最高，该菌对氯霉素、头孢噻肟、左氧氟沙星的耐药率较低，对红霉素、阿奇霉素则存在较高耐药 五、项目组成员分工

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