考马斯亮蓝

考马斯亮蓝

科技名词定义

中文名称：

考马斯亮蓝

英文名称：

Coomassie brilliant blue;coomassie [brilliant] blue

定义1：

属于三苯甲烷类染料，可与蛋白质形成较强的非共价复合体。考马斯亮蓝R250多用于聚丙烯酰胺凝胶电泳后蛋白质条带的染色；考马斯亮蓝G250是布拉德福德(Bradford)蛋白质定量试剂的主要成分。

所属学科：

生物化学与分子生物学（一级学科）；方法与技术（二级学科）

定义2：

广泛用于对电泳蛋白质染色的蓝色染料。也可显示出细胞骨架及蛋白质在细胞中的显微分布。

所属学科：

细胞生物学（一级学科）；细胞生物学技术（二级学科）

本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布 目录

化学性质 考马斯蓝染色 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量 处理方法 化学性质 考马斯蓝染色 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量 处理方法 展开 编辑本段化学性质 分子结构如右图 Coomassie brilliant blue G-250

考马斯亮蓝有G250和R250两种。

考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在465nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比。

考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。 编辑本段考马斯蓝染色

coomassie blue一定范围内成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。 考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。 编辑本段考马斯亮蓝法测定蛋白质含量

该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2％影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。常用于细胞骨架的检验。 1．Bradford浓染液的配制：

将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m1 95％乙醇，加入100ml浓磷酸，然后，用蒸馏水补充至200ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。 2．标准曲线蛋白质样本的准备：

尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug／100ul之间绘制标准曲线。 3．溶解：

将待测样本溶于100~1缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。 4．稀释：

按1：5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。

5．作用：

每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min． 6．计算：

根据标准曲线计算待测样本的浓度。 编辑本段处理方法

考马斯亮蓝和皮肤中蛋白质通过范德华力结合，反应快速，并且稳定，无法用普通试剂洗掉。待一两周左右，皮屑细胞自然衰老脱落即可无碍。

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