标本液氮冻存处理

常用字生物标本处理办法

一般的生物标本包括有：

血液、体液、内脏器官、粪便、胃液、活检组织、组织提取液、天然孔分泌物及各种表达系统的表达产物等

一般为无菌操作，低温保存（-80℃、液氮）

一．如果采集的实质器官则要求： 1、 器官实质不能太小

2、 以采集实质性病灶区为佳：如淋巴结、心脏、非、肺、脾以及肠管等病毒、病菌聚集的

地方为佳

3、 同一病例装入同一容器，并做好标记 4、 应在0-8℃的低温储存和运输 5、 实质性器官的处理：

5.1、取实质性器官约0.5mg左右，充分剪碎或研磨 5.2、加入约500ml的PBS/生理盐水，充分混匀 5.3、离心5000rmp x10min，去上清

5.4、-20℃保存，作为待检标本（切勿反复冻融）

二．体液（常见的包括血清、血浆、唾液以及尿液等）的处理方式

1、血液包括血浆和血清，它们的主要区别就是：血清凝血而血浆不凝血，所以它们的处理方式也就不一样

1.1、采集血浆时一般不加抗凝剂（主要为枸橼酸眼和柠檬酸盐），采集后立即离心800-1000rmp x 5min分离，取上清，-20℃或4℃保存备用；

1.2、如要采集血清，一般要加入总体积1%的抗凝剂，采集后先室温或4℃静置半小时后，800-1000rmp x 5min分离，取上清，-20℃或4℃保存备用；

2、胃液和唾液的采集方式一般时现采现用，但是一般饭后半小时内不易采集，因为刚进食的唾液中富含丰富的唾液淀粉酶，最好的采集的时间时空腹采集；

3、尿液的采集方式基本和唾液时一样的，即现采现用，但是一般隔夜尿不采集；

4、组织提取液如肺泡灌洗液等，采集后离心分离，800-1000rmp x 5min，取上清，-20℃或4℃保存备用；

三．粪便以及天然孔排泄物：采集后一般现用PBS/生理盐水溶解，充分混匀，800-1000rmp x 5min分离，取上清，-20℃或4℃保存备用；

四．活检组织一般进行穿刺检测，最常见的就是肝活检，像病毒性肝炎、脂肪肝、各种类型的肝硬化等进行活检简单方便、准确。

五、表达产物的检测 （一）真核表达产物

1、 细胞上清（分泌性蛋白）

1.2、贴壁细胞或半贴壁，直接将细胞培养上清吸出，10000rmp x10min， 取上清，-20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理；

1.2、不贴壁细胞，将培养基和细胞转移至10ml离心管，500-800rmp x10min，吸取上清至另一10ml离心管中，10000rmp x10min， -20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理；

2、 细胞裂解物（非分泌性蛋白）

2.1、贴壁细胞或半贴壁，直接将细胞培养上清吸出，然后用001M PBS(pH 7.4)将细胞吹下至10ml离心管，500-800rmp x10min，弃上清，沉淀转移至1.5ml离心管中， DDW重悬，置冰水浴中用超声波裂解仪进行裂解，10000rmp x10min，取上清，-20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理；

2.2、不贴壁细胞，将培养基和细胞转移至10ml离心管，500-800rmp x10min，弃上清，沉淀移至另一10ml离心管中，001M PBS(pH 7.4)重悬，500-800rmp x10min，弃上清，淀移至 1.5ml离心管中， DDW重悬，置冰水浴中用超声波裂解仪进行裂解，10000rmp x10min，取上清， -20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理；

（二）原核（大肠杆菌表达系统）表达产物 1、表达上清（非融合性蛋白）

直接将培养物和上清吸出，10000rmp x10min， 取上清，-20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理； 2、菌体裂解物（融合性蛋白）

直接将培养物和上清吸出，10000rmp x10min，弃上清，沉淀用PBS洗一遍，500-800rmp x10min，弃上清，DDW重悬沉淀，冰水浴中用超声波裂解仪进行裂解，10000rmp x10min，取上清，-20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理；

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