高效液相色谱法同时测定食用油脂中叔丁基对苯二酚和叔丁基对羟基茴香醚

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中国卫生检验杂志２００７年７月第１７卷第７期ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅａｌｔｈＬａｂｏｒａｔｏｒｙＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｕｌ２００７；Ｖｏｌ１７Ｎ０７１１６３

高效液相色谱法同时测定食用油脂中叔丁基对苯二酚

和叔丁基对羟基茴香醚

陈毓芳，奚星林，李宪华，李荀

（广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心食品实验室，广州５１０６２３）

【论著】

［摘要］目的：建立同时测定食用油脂中叔丁基对苯二酚（ＴＢＨＱ）和叔丁基对羟基茴香醚（ＢＨＡ）的高效液相色谱法。

方法：用乙腈提取食用油脂中ＴＢｎＱ和ＢＨＡ后，以反相Ｃ，。柱为分离柱，以甲醇一水溶液为流动相洗脱，采用高效液相色谱法一荧光光度检测器，于激发波长２９０ｎｍ，发射波长３３０ｎｍ定量检测。结果：溶剂、ＴＢＨＱ和ＢＨＡ可基线分离，ＴＢＨＱ和ＢＨＡ的线性范围均为０．２～８．０ｒａｇ／Ｌ（ｒ＞０．９９９）。最低检测限：ＴＢＨＱ、ＢＨＡ为１．０ｍＳ／ｋｇ。平均回收率范围：ＴＢＨＱ为９５．２％一１１５．４％，ＢＨＡ为８７．Ｏ％～９６．５％。相对标准偏差（ＲＳＤ）均在７．８％以下。结论：本法准确、可靠、简便，检测限低，适用于食用油脂中ＴＢＨＱ和ＢＨＡ的同时分析测定。

［关键词］ＴＢＨＱ；ＢＨＡ；高效液相色谱；食用油脂

［中图分类号】ＴＳ２２５［文献标识码】Ａ［文章编号】１００４—８６８５（２００７）０７—１１６３—０２

ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＴＢＨＱａｎｄＢＨＡｉｎｏｉｌｓａｎｄｆａｔｓｂｙＨＰＬＣ

Ｃｈｅｎ地扣，｜ｇ，瓜Ｘｉｎｇ－ｌｉｎ，ＬｉＸｉａｎ—ｈｕａ，ｎＸｕｎ

（ＴｈｅＦｏｏｄＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＧｕａｎｇｄｏｎｇＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎａｎｄＱｕａｒａｎｔｉｎｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｅｎｔｅｒ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６２３，Ｃｈｉｎａ）

［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙｄｅｔｅｒｍｉｎｅＴＢＨＱａｎｄＢＨＡｉｎｏｉｌａｎｄｆａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅＴＳＨＱａｎｄＢＨＡｗｅｒｅｅｘ－ｔｒａｃｔｅｄｗｉｔｈａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ，ｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＨＰＩ＿￡ｕｓｉｎｇａｉｓｏｃｒａｔｉｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅｓｏｌｖｅｎｔ，ＴＢＨＱａｎｄＢＨＡｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄｔｏｅａｃｈｏｔｈｅｒ．Ｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗ璐ｏｂｔａｉｎｅｄａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｌｉｍｉｔｗａｓ１．０ｍｇ／ｋｇｆｏｒＴＳＨＱａｎｄＢＨＡ．ｒｅｃｏｖｅｒｙ９５．２％一１１５．４％ｆｏｒ７ｒＢＨＱａｎｄ８７．０％～９６．５％ｆｏｒＢＨＡ，ａｎｄｒｅｌａｔｉｖｅｓｔａｎｄａｒｄｄｅｒｉｖａｔｉｏｎｓｗｅｒｅｌｏｗｅｒｔｈａｎ７．８％．Ｃｏｎｃｌｕ－ｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｈａｓｔｈｅａｄｖａｎｔａｇｅｓｏｆｓｉｍｐｌｉｃｉｔｙａｎｄｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄｓｅｓｓｉｔｉｖｉｔｙ，ａｎｄＣａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆＴＳＨＱａｎｄＢＨＡｉｎｏｉｌａｎｄｆａｔｓ．

［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ＴＢＨＱ；ＢＨＡ；Ｏｉｌｓ；Ｆａｔｓ；Ｈｉｇｈ～ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ

ＴＢＨＱ、ＢＨＡ都是抗氧化剂，能有效延缓油脂的氧化，提高食品的稳定性，对这些添加剂的使用，我国卫生标准都有一定的限量要求，有些国家至今尚不允许在食品中使用ＴＢＨＱ。所以对这些食品中抗氧化剂的测定是必要的。分析ＴＢＨＱ、ＢＨＡ的方法包括气相色谱法和液相色谱法等¨“Ｊ，在液相色谱方法中普遍使用紫外检测器检测，样品前处理一般都采用萃取、浓缩等方法，导致被测组分在样品处理过程中损失较大，回收率低，且检测低限难于达到１．０ｍｇ／ｋｇ的检验要求。本文采用高效液相色谱法一荧光光度检测器对食用油脂中ＴＢＨＱ、ＢＨＡ进行分离检测，采用等度洗脱。方法简便、快速，抗干扰能力强，检测限低，精密度好，回收率高，结果令人满意，可广泛应用于食用油脂中的ＴＢＨＱ、ＢＨＡ的检测和监控。

１材料与方法

１．１仪器

Ｗａｔｅｒｓ系列高效液相色谱仅；配５１５泵、７１７自动进样器、

［作者简介］陈毓芳（１９６８一），女，学士，工程师，主要从事食品

和化妆品检验工作。Ｗａｔｅｒｓ２４７５荧光检测器、ＷａｔｅｒｓＭｉｌｌｅｎｉｕｍ３２色谱数据系统（均为美国Ｗａｔｅｒｓ公司）；离心机（德国Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ，５８１０Ｒ型），漩涡振荡器（德国ＩｒＡ）。

１．２试剂

标准品ＴＢＨＱ、ＢＨＡ为Ｄｒ．Ｅｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒ提供，纯度分别为９８．Ｏ％，９９．５％。

１．２．１抗氧化剂标准贮备液（１ｍｇ／ｍ１）分别准确称取２种抗氧化剂各５０ｍｇ，用乙腈溶解定容至５０１１１ｌ，摇匀，０。Ｃ～４℃避光保存。

１．２．２抗氧化剂标准混和液（２０ｍｓ／Ｌ）分别取２种抗氧化标准贮备液１ｍｌ加入５０Ｔｎｌ的容量瓶，定容。

１．２．３饱和正已烷将乙腈和正已烷混合，在分液漏斗中充分振摇，取上层为饱和正已烷，临用现配。

１．２．４饱和乙腈将乙腈和正已烷混合，在分液漏斗中充分振摇，取下层为饱和乙腈，临用现配。

１．２．５甲醇、乙腈（色谱纯），正已烷（分析纯），实验用水为Ｍｉｌｉｐｏｒｅ超纯水。

１．３色谱条件

色谱柱为ＤｉｓｃｏｖｅｒｙＣ１８（２５０×４．６ｍｍ，５ｐ，ｍ）；柱温为

１１６４

中国卫生检验杂志２００７年７月第１７卷第７期ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ

ｏｆＨｅａｌｔｈ

ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｕｌ２００７；Ｖｏｌ

１７Ｎｏ７

３０。Ｃ，荧光检测器激发波长为２９０ｎｍ，发射波长为３３０ｎｍ，流动相为甲醇一水（体积比为６０：４０），流速为１．０ｍｌ／ｍｉｎ。

１．４样品处理

称取油脂１ｇ（精确至０．０ｌｇ）于具塞离心管中，加入５

ｍｌ

乙腈饱和的正已烷，在液体混匀器上快速混匀以充分溶解油样，加入５ｍｌ正已烷饱和的乙腈，于液体混匀器上快速混匀

ｌ

ｍｉｎ，放入离心机，以４

０００

ｒ／ｍｉｎ的转速离心５ｍｉｎ，用移液

枪将下层溶液（乙腈层）转入２０ｌＴｌｌ容量瓶中。如上操作再提取２次，合并乙腈于容量瓶中。用乙腈定容至刻度，经０．４５汕ｍ滤膜过滤，供分析。２结果与讨论２．１检测器的选择

为了提取更加完全，试样中加了较大比例的提取液，如果按文献方法使用紫外检测器检测时，必须对提取液进行浓缩，而ＴＢＨＱ、ＢＨＡ等抗氧化剂本身较易氧化，常导致回收率不高，达不到检测要求，另外杂峰较多，容易产生假阳性，本文根据ＴＢＨＱ、ＢＨＡ具有荧光的性质（特异性），考虑用荧光检测器，利用荧光检测器对荧光物质检测特别灵敏，不需浓缩，既避免了不必要的损失，又简化了操作步骤，提高了回收率，杂峰较少，易于判断，待测物回收率高、重现性好。２．２检测波长的选择

通过荧光检测器对标准品的扫描，在激发波长为２９０

ｎｍ，

发射波长在３３０ｎｍ附近进行扫描，发现ＴＢＨＱ和ＢＨＡ的最大吸收峰，为避免干扰和兼顾检测灵敏度的需要，我们选择激发波长２９０ｎｍ，发射波长３３０ｎｍ为测定波长。２．３流动相

根据仪器条件，利用甲醇和水，按不同配比进行了二元等度洗脱的研究，结果表明采用甲醇和水比例为６０：４０时，两种组分在２０ｍｉｎ内达到基线分离，分离度Ｒ＞２．０，峰纯度好并且峰形对称。因此选用该系统为最佳流动相体系。标准色谱图见图１，标准添加样品色谱图见图２。

ｕ４０

８

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０

２．００

４．００