生化试验思考题总结
更新时间:2024-04-25 03:22:01 阅读量: 综合文库 文档下载
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Shaonanlee 黑暗舞者DID
生化实验思考题总结
1. 蛋白质定量测量的方法有哪些?简要说明其原理。
答:a.紫外吸收,在280nm处有最大吸收峰。
b.定氮法,利用蛋白质中氮元素含量为16%固定比例来测定。
c.分光光度计法,利用OD值和蛋白质浓度成正比的原理。显色剂为考蓝。 d.双缩脲法。也是利用显色反应。 e.Folin酚法。
2. 如果凝胶过滤层析分离的蛋白质样品中含有多种蛋白质,在各蛋白质分子量已知的情况下,如何判断哪一种蛋白质时所想要的?
答:现在假设有三种蛋白质a b c,分子质量a>b>c。
那么,a最先流出,在体积V1处有一个洗脱体积,对应的a的溶液浓度在 V1处也最高,就会有一个OD值的峰值。b c同理。由不同的OD峰值, 对应不同的洗脱体积,就可以筛选出想要的蛋白质。如果想要b,那么在第 二个吸收峰的时候,找到相应的洗脱体积,然后在其附近的所接到的溶液 进行选取。就会得到想要的蛋白质。
3. 如果盐析后的样品不经脱盐处理便上样电泳,对其结果有何影响?
答:如果没有去除清蛋白里面的盐分,则会使电泳速度下降。原因在于溶液离子 强度太大,蛋白质表面的电荷减少,所以导致电泳速度下降,甚至无法泳动。
4. 对电泳所得的结果如何进行定量分析?
答:将电泳完毕的样品(凝胶),按条带宽度的分布剪下,分别把每个小块样品
用NaOH溶液漂洗,再将漂洗过的溶液进行OD值的测量。
Shaonanlee 黑暗舞者DID
5. 使SDS-PAGE具有高分辨率的三个因素是什么?
答:浓缩效应。电荷效应。分子筛效应。
6. 实验所得的各点数据中,哪些易出现较大的误差?
答:有两个点。第一个,在三十秒的点,反应速度太快,时间如果掌握不准,容易
出现误差。另一个,在3min的点,反应速度很慢,斜率小,则倒数大,所以 时间掌握不好,也容易出现大误差。
7. 假如把碱性磷酸酶对底物的亲和力提高十倍,实验方案该如何修改?
答:把底物和酶的浓度都降低。
8. 请举出三种提取质粒的方法,并简要说明其中一种方法的原理。
答:碱裂解(要求原理,书上有);一步法(见书上46,47页有关TELT试剂的内容)
;SDS法;煮沸法。
9. 分析质粒DNA切割不完全的原因。
答:a.质粒因素:碱裂解时间太长,无法复性;乙醇挥发不完全,影响酶的活性。
b.酶的因素:酶的浓度太高或者太低。或者酶的活性降低。
c.酶切体系:温度不是最适温度;时间不够长;缓冲溶液的问题。
10. 分析酶切后没有观察到目的DNA的原因。
答:a.重组失败。
b.酶切失败。
c.目的基因量太少。
11. 从哪些方面可预防PCR出现假阳性结果?
答:假阳性就是出现了不该出现的条带。
a. 防止污染,例如模板的污染。 b. 引物设计合适,保证特异性。 c. 控制反应条件。
d. 必要时,要减少循环次数。
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