新生大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的原代分离、培养与鉴定

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新生大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的原代分离、培养与鉴定

作者：曾静玲

来源：《医学信息》2014年第09期

摘要：目的探究新生大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（alveolar typeⅡepithelial cell， AT-Ⅱ）的原代分离、培养及鉴定方法，建立体外细胞模型。方法取SPF级新生Wistar大鼠肺脏，采用胰蛋白酶联合胶原酶消化法分离AT-Ⅱ，免疫黏附法纯化细胞，体外培养并进行传代研究，透射电镜鉴定细胞。结果 AT-Ⅱ细胞原代培养和传代研究成功，细胞生长状态良好。电镜观察到板层小体。结论采用改良方法获得的AT-Ⅱ细胞符合体外实验要求，第24～72h内处于最佳生长状态，是进行实验研究的良好时间段。

关键词：新生大鼠；肺泡Ⅱ型上皮细胞；原代培养；鉴定

肺泡Ⅱ型上皮细胞（alveolar typeⅡepithelial cells，AT-Ⅱ）是肺泡上皮细胞的干细胞，又被称为"颗粒性肺泡细胞"和"分泌细胞"，是一种多功能细胞。AT-Ⅱ除了能增殖成新的AT-Ⅱ细胞，还可分化为肺泡Ⅰ型上皮细胞（alveolar typeⅠepithelial cell，AT-Ⅰ）[1]。AT-Ⅰ和AT-Ⅱ共同组成肺泡上皮屏障。AT-Ⅱ约占肺泡细胞群的60%[2]，细胞形态为多角形、立方形或圆形，细胞质内有大量反差明显的细小颗粒。应用AT-Ⅱ开展相应研究，对认识肺的正常生理功能和多种肺部疾病有重要意义。

原代培养、分离、纯化可以排除其他肺组织细胞对AT-Ⅱ的影响[3]。有文献报道AT-Ⅱ易变性、易分化，表型丧失快，基本不能传代[2]。亦有文献报道它具有无限增殖的潜能[4]。本次实验在借鉴他人实验方法的基础上进行了简化改良，顺利进行了AT-Ⅱ的原代培养、分离、纯化与鉴定，并进行传代研究。

1 资料与方法

1.1实验动物 SPF级新生24h内Wistar大鼠，由甘肃中医学院科研试验中心SPF级实验室提供。

1.2实验试剂 DMEM培养基、PBS缓冲液、胎牛血清、0.2%胶原酶、0.5%胰蛋白酶、10%水合氯醛、75%乙醇、IgG溶液、100U青霉素、100U链霉素、5%戊二醛。

1.3方法

1.3.1新生大鼠AT-Ⅱ细胞的原代分离取SPF级新生24h内Wistar大鼠，借鉴张秋月[5]等的方法加以改良进行实验操作。10%水合氯醛麻醉乳鼠（0.3ml/100g），放入75%乙醇消毒

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/9uv1.html