邓嘉祺（陈帅组）植物细胞工程实验报告

成 绩

植物细胞工程实验报告

组 员： 邓嘉祺（第一组） 系 别： 生物工程 班 级： 生物工程131班 指导教师： 高明波老师 设计日期： 2016. 5.26

预习报告与实验记录

【实验题目】：MS母液配制、培养基配制及灭菌

【实验原理】：

离体细胞的生长、分化和植株再生都在培养基中进行，选择和配制培养基是细胞培养的重要环节。培养基种类很多，但各种合成培养基都由含大量元素的无机盐、含微量元素的无机盐、碳源、维生素和氨基酸以及激素等五大类成分构成。 为避免每次配制培养基都称量各种化学药品，常把培养基中必需的化学药品，按原量的浓度增大10倍、100倍或1000倍后称量，配成一种浓缩液，即母液。

【实验步骤】：

1、配制培养基母液 2、配制愈伤组织诱导培养基

【实验记录】：

所配制培养基全部凝固。

实 验 报 告

时间： 2015.05.26 组员： 邓嘉祺（第一组） 指导教师： 高明波老师

实验题目： MS母液配制、培养基配制及灭菌

一、实验目的

1.了解培养基母液的配制方法和注意事项；

2.掌握培养基的配制及灭菌方法，为吊兰愈伤组织诱导实验准备培养基。 二、实验原理

离体细胞的生长、分化和植株再生都在培养基中进行，选择和配制培养基是细胞培养的重要环节。培养基种类很多，但各种合成培养基都由含大量元素的无机盐、含微量元素的无机盐、碳源、维生素和氨基酸以及激素等五大类成分构成。

为避免每次配制培养基都称量各种化学药品，常把培养基中必需的化学药品，按原量的浓度增大10倍、100倍或1000倍后称量，配成一种浓缩液，即母液。

三、实验仪器和试剂

1. 仪器、用具：pH计、高压灭菌锅、量筒、有刻度烧杯、容量瓶、吸耳球、电炉（或微波炉），移液管（或移液枪及枪头）、三角瓶。

2. 试剂：MS培养基各组分（参看配方），2,4-D，NAA，6-BA，KT，1M NaOH，0.1M HCl，蔗糖，琼脂。 四、实验步骤

1、配制培养基母液

按如下配方表配制MS培养基母液：大量元素配10×，微量元素配1000×，铁盐、有机成分配制成100×，母液贮存于2～4℃的冰箱中。激素配成浓度为0.1mg/mL。

配制各种母液时，成分顺序加入，上一成分溶解后再加入下一成分。配制大量元素母液时，最后加入钙盐，避免产生沉淀。生长素（2,4-D，NAA）配制时，先用微量1M NaOH溶解，再以蒸馏水定容；细胞分裂素（6-BA，KT）配制时，

先用微量0.1M HCl溶解，再以蒸馏水定容。

Ms培养基配方

母液种类 大量元素

微量元素

铁盐 有机物

2、配制愈伤组织诱导培养基

烧杯中顺序加入培养基母液，如果配制1L培养基，各种母液加入量分别为：大量元素 100ml，微量元素 1ml，铁 盐 10ml，有机成分10ml。激素根据培养基配方加入对应体积。

加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水，加入30g蔗糖后搅拌使其溶解，容量瓶定容。倒回烧杯中，用1M的NaOH和0.1M的HCl调整pH至5.8。

KNO3 MgSO4·7H2O NH4NO3 KH2PO4 CaCl2·2H2O H3BO3 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O Na2MoO4·2H2O CoCl2·6H2O CuSO4·5H2O KI Na2EDTA FeSO4·7H2O 肌醇 甘氨酸 维生素B1 维生素B6 烟酸

试剂

浓度(mg/L) 1900 370 1650 170 440 6.2 22.3 8.6 0.25 0.025 0.025 0.83 37.3 27.8 100 2 0.4 0.5 0.5

调好pH值后，加入7.5g琼脂，将烧杯置于电炉上或微波炉中，搅拌加热使琼脂完全溶解，混合均匀后分装于三角瓶中。用记号笔写上学号或姓名。

分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度115℃，压力1.1kg/cm2，灭菌时间15min。灭菌后的培养基置于无菌室保存备用。

查阅资料得如下两组吊兰组织培养愈伤组织诱导培养基激素配方：

组别 A组 B组 NAA 0.1mg/L 0.1mg/L 6-BA 1.0mg/L 2.0mg/L 五、实验结果

配好后的母液均置于冰箱中保存备用，吊兰组织培养愈伤组织诱导培养基编号后放置备用。 六、注意事项

1.实验中所用的各种容器一定要洗净、烘干。

2.用电子天平称量药品时，一定使用称量纸。有腐蚀性的药品，要放小烧杯中称量。

3.母液应保存在4℃冰箱中。

4.高压灭菌时，一定要检查锅中的水是否合适。 七、思考题

简述培养基母液及培养基的配制过程，指出培养基配制的关键环节。 母液配制过程：按照配方表，各种母液配制量如下：大量元素配1000mL，微量元素配500mL，铁盐配500Ml，有机物500mL，根据浓度计算出所应添加的量，然后用容量瓶定容配制。分装、标记、保存。

培养基配制过程：按照配方和稀释比例，加入各种母液和激素，再用一定量的水溶解所需量的蔗糖，混合后定容，然后调节pH，最后加入琼脂煮沸溶解后灭菌，分装、标记、保存。

关键环节：MS配方中试剂种类多，不能漏加或者错加；不能忘记加蔗糖；培养基配好后需要调节pH。

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