caspase-glo3 7assay

1. 说明

2. G8090成分

1x2.5ml caspase 3/7 buffer，1瓶caspase 3/7底物（冻干）；置于-20度，避光。4度3个月，常温4天。

96孔板 25次 100ul/孔 384孔板 100次 25 ul/孔 3. 试剂的准备和储存

a caspase 3/7 buffer和caspase 3/7底物用前置于室温；

b 将caspase 3/7 buffer加入caspase 3/7底物瓶，混匀，使得caspase 3/7底物溶解，成为caspase glo-3/7试剂。

c caspase glo-3/7试剂4度可放置3天；4度放置1周可达到90%信号；4度放置4周可达到75%信号；caspase glo-3/7试剂-20度放置1周可达到75%信号；-20度放置4周可达到60%信号。

4. 检测细胞内caspase glo-3/7活性

本实验caspase glo-3/7试剂和样品1：1混合。（96孔板100ul caspase glo-3/7试剂+100ul样品；384孔板 25ul caspase glo-3/7试剂+100ul样品。）

需要准备的仪器 a 光度计

b 96孔板振荡器 c 加样器 d 96孔板 4 A检测条件

空白对照：caspase glo-3/7试剂+细胞培养液

阴性对照：caspase glo-3/7试剂+培养细胞的细胞培养液 实验孔：caspase glo-3/7试剂+处理后细胞的细胞培养液

注意：a 96孔板中加入<20000细胞/孔； b 阴性对照和试验孔细胞数要一致； c 最高发光信号可能在1-2h达到，所以要在3h之内检测。

4 B 96孔板中培养的细胞caspase glo-3/7活性检测的标准方案

a 检测前，把caspase 3/7 buffer和caspase 3/7底物置于室温，混匀； b 拿出96孔板，室温放置片刻；

c 把caspase glo-3/7试剂100ul加入96孔板中（空白孔，阴性对照孔，试验孔）。避免交叉污染。

d 轻柔的混匀，300-500rpm 30s，然后室温孵育30min-3h。（室温尽量避免变化） e 用发光仪检测。 6 注意事项

a 敏感性，一定要有空白对照，并且在3h之内检测； b 温度，光照和温度都会影响检测数据；

c 化学试剂，DMSO可用来溶解有机化学试剂；

d 混合，用细胞来检测时一定要混合以促进细胞裂解。

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/9f2r.html