三白草总黄酮的提取及抗氧化活性研究

J L n l fQ;ia dc l?le e 2 1 Vo., .】 oJ a qh rMe ia ((ig . O r o ) O, 13l No 4

三白草总黄酮的提取及抗氧化活性研究郭凌霄【要】目的三白草总黄酮的提取工艺及其抗氧化活性的研究。方法通过正交试验设计确定摘 了三白草总黄酮乙醇提取的最佳奈件，用烘箱储藏法扣 F n o采 e tn反应体系以及邻苯三酚自氧化法，研究了三白草总黄酮清除超氧阴离子自由基 ( )羟基自由基 ( 0和~OH)的抗氧化活性。结果最佳浸提条件为 7 的乙醇为提取溶剂 . 7 O在 O℃、液比 1: 0的务件下提取 4h影响黄酮提取的因素依次料 2;为料液比>乙醇浓度>提取时间>温度。三白草总黄酮具有明显的抗氧化作用，羟基自由基和超氧对阴离子自由基均有显著的清除作用。结论确定了三白苹总黄酮的最佳提取工艺，白草总黄酮对三 0和 0H均有较强的清除能力。 【键词】三白草黄酮提取工艺抗氧化活性关S u y o x r c in n a t— oxda in oftt Ina o s fo S ur r s Ch n n i t d n e ta to a d n i i to o a v ne r m a u u i e ss ( D n— xa Li g i o.

( t n lHo p t l ft e Gu n x h a g Au o o u g o Na i a s i h a g iZ u n t n mo sRe in,Na nn,Gu n x 3 0 1 h . o ao n ig a g i 0 0,t e P R. 5 Ch n ) ia

[ sr c] Obet e Tosu yt ee ta t na d a t—o iaino o a f v n sfo S u u u Ab ta t jci v td h xrci n ni xd t f tl l o e r m a r r s o o t aCh n nss M eho s T h ptm um ta to on ton ft a lv e r m ur u i e i. t d eo i ex r c in c dii s o ot lfa on s fo Sa ur s Chie i r n nss we e i e tg t d w ih r h go l xp rm e t lde i n. F o e so

r ge m e ho a d nv s ia e t o t o na e e i n a sg he v n t a t d n Fe on e c in nt r a to wa s

u e o p o u e a d d tc y r x l a ias ( OH ) n y o a lls s e wa s d t r d c n s d t r d c n ee th d o y dc l一 r,a d p r g l y t m s u e o p o u e a d od t c he u r xie r dia i (0 ) Re u t The ptm a e t a ton c d to wa t lo l e e tt s pe o d a c lanon . s ls o i l x r c i on iin s he ac ho c c n r to 0, tm pe a ur 0℃,e r c i tme 4h a s g l o a i:2 on e t a in 7 e r t e7 xta ton i nd do a e i r r to 1 qu 0. T h de e or r of

t e fc o swh c fe t d e t a t n wa o a e l u r a i h a t r ih a f ce x r c i sd s g q o t o i r o> ac h l o c n r to lo o n e ta i n> e t a to i c x r c in t me>t m p r t r . The r s ls h e e aue e u t s owe ha ur us Ch n n i o i sy ha he f nci n ofa i i to d t tSa ur i e s s bvou l s t u to ntoxda in. a he t a l v nd t ot lfa one r m a ur s fo S ur usChi nssha ton a a iy o c ve i g s e o d ni nd ne i d a s r g c p c t fs a ng n up r xie a on a h dr y r e r dia. Co lso s T h ptm u y ox lfe a c 1 ncu in e o i m e r c i o iin of I t lfa o s fom S ur us xta ton c nd to o a l v ne r a ur Chie i sbe n i e tg t d,a d t e t a lv e r n nssha e nv s ia e n h ot lfa on s fom

ur u i e i sa s r g c pa iy o Sa ur s Ch n nssha ton a ct f s a e i g s e o i e a i nd hy ox lfe a c 1 c v ng n up r x d non a dr y r e r dia .

[ yw r s S u u u ie ss Toa fa o e Exr cins i An i o ia t Ke o d| a r r sChn n i tl lv n s tat kl o l t- xd n

三自草 S uuu hn ni L u. b i是三白草科多年 arrsC ies ( o r) al s l生草本植物，草人药，昧甘、,寒，有清热解毒、尿全其辛性具利消肿之功效 l l。主要分布在我国中南、南地区，季均可采西四

机。

1 2实验方法 .

1 2 1三白草总黄酮供试液的制备三白草粉碎后置于 6 .. O

收 .源丰富。国内、对其进行了较多研究，离出挥发油、资外分

℃干燥箱中恒温干燥 2,取一定量的三白草粉末， 4h称用7 ( V) O V/乙醇进行恒温浸提，三白草总黄酮的粗提液，得 _三待测。

黄酮、脂素、碱、质等成分，现其具有抗炎、毒、木生物鞣发去降糖、肝、尿等活性。近年来已有一些关于三白草化学成分保利和药理活性的报道[ 2,是对三白草的传统应用尚缺乏系 1 7但 -统的实验研究。本文对三白草中黄酮的提取分离及其抗氧化活性进行了研究，为进一步的活性追踪及临床应用提供依据。1材料与方法 1 1材料 .

1 2 2三白草总黄酮含量测定方法 ..

总酮率堡塑罱耋黄得一堕 准确称取芦丁对照品 2 . O 0mg置于 5 小烧杯中， Oml先用少量 7 (/乙醇水溶液超声波溶解，后加 7 (/ O v V)然 O V V)乙醇水溶液定容至 5 作为母液，母液中精密量取 0 O ml从 . 2、 . 0 0 4、 . 0 0 6、 . 0 0 8、 . 0 1 O分别置 0 0 3、 . 0 0 5、 . 0 0 7、 . 0 0 9、 _ Om1于 2 容量瓶中， 7 (/ )醇水溶液定容至刻度， 5 ml用 O V V乙摇匀， 7 (/ )醇水溶液作为空白对照，

5 0n l长用 O V V乙在 1 l波 r下分别测吸光度值。以浓度为横坐标、吸光度为纵坐标，制绘

11 1原料 ..上部分。

三自草药材购自广西南宁医药公司，鉴定为经

三白草科植物三白草 S u u u hn n i L u ) al干燥地 a r r s ie s ( o r B i的 c s 1 1 2主要试剂芦丁对照品购自中国药品生物制品检定 ..所产品；酸亚铁、苯三酚、氧水、二氮菲、酸、酸氢硫邻双邻盐磷二钠、磷酸二氢钠、一羟甲基氨基甲烷：析纯； 3分甲基氨基甲 烷：分析纯；多酚：量 9,京泽朗医药公司。所用试茶含 5南剂均为分析醇。

标准工作曲线。根据标准曲线求得三白草总黄酮含量。按下式计算总黄酮得率。 1 2 3三白草总黄酮醇提工艺的优化以单因素实验结果 ..为依据，计溶剂浓度、取时间、设提固液比、提温度四因素三浸水平的正交试验根据正交试验所确定的因素和水平，有 9共

11 3主要仪器 ..

7 2紫外可见分光光度计 (海精密科 5型上

学仪器有限公司分析仪器总厂 )分析天平 ( t e, 2 4。, Met r AL 0 ) l R 0一 I型旋转蒸发仪，海仪器厂，型超声波药品处理 21 I上 C作者单位：广西壮族自治区民族医院(宁 )南 邮编 5 0 0 301收稿日期 2 l一0—2 0O 5 8

组实验，一组平行测定 3次，计 2每共 7次试验。因素水平设计见表 1。

1 24三白草黄酮类化合物抗氧化活性的测定 . . 1 24 1采用烘箱储藏法测定油脂抗氧化作用将纯猪油、 ...

齐齐哈尔医学院学报 2 1第 3 0 0年 1卷第 1期 L l

添加一定量三自草总黄酮提取物的猪油和添加 0 1维生素 . C的猪油分别置于 6℃烘箱，照国家标准 G/、5 8 5按 Bq 3~ 5 19,隔一定时间测定并计算其过氧化值 ( OV)即精密 95每 P。称取 2 3~ g混匀的样品，于 2 0 ml量瓶中，入氯仿~置 5碘加 冰醋酸 ( 3混合液 3 ,样品完全溶解。加饱和碘化钾 2: ) Oml使溶液 1, 加塞、匀，暗

处放置 3mi,水 5,匀后 ml摇在 n加 Oml摇立即用 0 0 l . 2mo/ L硫代硫酸钠标准溶液滴定至淡黄色时，加 0 5%淀粉指示剂 1 .续滴定至蓝色消失为止。同时以 .0 继 m1空白试剂滴定为参比P OV= ( l v ) C× 0 1 6/×】 O v一‘2× .2 9 m O

清除率=(~ A ) A×1 0,中 Al不加样品的 A1 2/ 1 0式为

吸光值， 2为加入样品后的的吸光值 l。 A _ 6 _ 1 2 4 3三白草黄酮类化合物对超氧阴离子 ( )除实 ... O一清验_ 7 取 4 5 mlp . r— HC缓冲溶液，别加入 . H8 2 T i s 1分 4 0ml度为 0 2 0 4 0 6 0 8mg ml 1 0rg ml三白 .浓 .、.、.、./和 ./的 n 草总黄酮提取物， 5℃保温 2 n再加入 0 3m . 2 O mi, . l 2 0 mmo/ l

I的邻苯三酚启动反应， mi在 5 0n测 A值。同时设 5 n后 1 m

式中 v和 v分别为样品和空白试剂消耗 N :。准 1 2 as O标！

置空白对照 (入 4 2m1加 .的蒸馏水代替提取液 )再以相同浓，度的茶多酚作对比实验，白对照管以缓冲溶液调零’Ⅱ管空力药分别以相同浓度药液调零。超氧阴离子清除率按下式计算： 清除率 (= (对照~ A加药/对照 ) 10%) A A× 0表正交试验中的影响因素及水平

溶液的体积/ l m; C为硫代硫酸钠溶液的浓度/ o L;为样 ml~ m品质量/;.2 9 1硫代硫酸钠相当碘的质量数 ( ) g0 16为 mg g。

1 24 2三白草黄酮类化合物清除羟基自由基的能力测 . . .定l 3 根据 F no e tn反应，由该反应体系过氧化氢与亚铁离子产生羟自由基，具有很高的反应活性、活时间，加它存若入水杨酸后能有效捕捉一0H,产生在 5 0n处有强吸收并 1 m

峰的有色物质若加入具有清除一 OH的物质，会与水杨酸便

竞争，而使有色产物变浅，从吸光值减少。本实验中， 1 在 OnI比色管中依次加入 7 5 . mmo/ l L硫酸亚铁铵 1ml7 5m

mo/ ,. lL水杨酸 lml0 1 Hz ,rs HC1冲液 2ml最后 ,. 021mlti—缓 ,

2结果与讨论

2 1芦丁标准曲线 .

按前述方法，定不同浓度的芦丁溶液测

的吸光度，到芦丁溶液浓度 (/ )吸光度值关系曲线得 mg m1与

分别加入一定浓度的样品 1,温静置 2h在 5 0 m处测 室 ml, 1 n

的回归方程式：一1 1 0 x l . 0 2其相关系数 r . 9 6 y . 84 -0 0 2, -一0 9 9。

其吸光值。

22三白草总黄酮提取的正交实验设计正交实验结果如 .表 2所示。

裹 2正交试验结果

试验编号

浓度A

时间 B

固液比C

温度 D平行 1

望些空平行 2

——————平行 3 平均值

由表 2可知，种因素对浸提效果影响大小依次为：液 4料比>乙醇浓度>提取时间>温度。最佳浸提条件为： O的 7乙醇为提取溶剂， 7 料液比 1: 0的条件下提取 4h 在 01 C、 2。 2 3半边旗黄酮体外抗氧化活性活性以纯猪油为空自对 .照品、添加 0 1维生素 C的猪油为阳性对照品、添加以 .以 0 2、 .、 . 三白草总黄酮提取物的猪油为供试样品 .% 04 06

2 4不同质量浓度的三白草总黄酮提取物化合物时羟基自 . 由基清除效率数据见图 1。

l2 3分别置于 6、、, 5℃烘箱 .隔 l天取样测定其过氧化值每( OV) P。结果如表 3。可见，半边旗中提取的黄酮成分对从猪油的氧化具有明显的抑制作用，随着质量分数的增大其且抗氧化能力增强， . 半边旗黄酮的抗氧化活性和对照品 02 01维生素 C相当。 . 表 3半边旗黄酮对猪油的抗氧化作用

芝井艇皇

图 1三白草黄酮清除羟基自由基清除率与浓度的关系

羟基自由基 ( OH)一种重要的活性氧，分子式上看 .是从是由氢氧根 ( 0H一 )去一个电子形成。羟基自由基具有极失强的的电子能力也就是氧化能力，基自由基是活性氧中化羟学性质最活泼的一种，生物体内最具进攻性[。由图 1在“ 可

知，测定范围内随三白草总黄酮提取物浓度的增加羟基自在 由基的清除率呈线性增加。

21 4 9

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染 1 8例 I U医院感的危险因素分析及护理对策 3 C张华芳【要】目的摘 探讨重症监护室 ( U)染的危险因素分析及护理对策。方法对我院 2 0 I C感 0 4年

1月~2 0 0 7年 1 2月 I医院感染患者 1 8例进行回顾性分析。结果 I CU 3 CU医院感染中以老年患者居

多；感染部位占前三位的是下呼吸道、尿道、泌胃肠道；础疾病以脑血管疾病、基呼吸系统疾病、伤性疾损病及消化道疾病的感染率最高；曼不动杆菌感染有上升趋势；与创伤性操作、体抵抗力下降、舍孢并机不理使用抗茵药物、医务人员缺乏交叉感染意识等有关。结论加强 I U病室管理，善环境因素和操 C改作中易导致污染和感染的环节，真遵守无菌原则 .断感染途径，高患者机体抵抗力，理应用抗生认切提合素是预防 I U医院感染的有效护理对策。 C【关键词】重症监护室医院感染护理

重症监护室 (C的创建和完善对提高危重患者的抢救 I U)成功率起到了至关重要的作用， I U患者通常病情危重、但 C

要。通过对 2 0年 1~ 2 0 04月 0 7年 1 2月我院 I U医院感染 C的病例进行回顾性分析，讨如何降低 I U医院感染的发生探 C率，报道如下。现

抵抗力差、有严重的潜在性疾病，经历了重大手术、长伴或有 期的，谱抗菌约物使用史，带有多种介入性留置导管， 多使I U院内感染发生率是普通病房的 3 5。严重感染可以 C~倍导致抢救最终失败，此控制和预防 I U医院感染十分重因 C作者单位：四川省内江市第二人民医院邮编 6 10 40 3收稿 H期 2 1—0— 1 00 5 9

1临床资料 2 0年 1月~2 0 01 0 7年 1 2月我院 I U收住患者 1 9例， C 88发生医院感染 1 8例， 7 3。男 1 2例， 3 3占 . O女 6例，年龄 1~

9 2岁 .

均年龄 5 .平 8 7岁，中 6其 O岁以上 7 5例， 5 . ;占 4 3气管插管、留置尿管、吸机支持呼吸患者 8呼 2例， 5 . ;占 9 4使用Ⅱ联以上抗生索 9例， 6 . 。其诊断标准参照 2 0 6占 96 01验结果表明，白革总黄酮提取物对一OH和 (一具有明三 )均 显的清除作用，呈量效关系。对比试验说明三白草总黄酮且提取物对 0一清除效果比茶多酚明显，其在较高浓度时 的尤优势更加突出。

2 5三白草总黄酮超氧阴离子 ( )清除试验邻苯三 . 0的酚在碱性条件下迅速自氧化，自氧化过程中产生 0,)加 ( 速邻苯三酚自氧化速率，时生成有色中间产物， 5 0 n 同在 1 m有强烈的光吸收，间产物的积累在滞后 3~4 与时间成中 O 5S良好的线性关系，般维持 4ri,后减慢。由于自氧化速一 n随 a

本研究发现三白草中黄酮类化合物具有很好的抑制超氧

率依赖于 0的浓度，除 (则抑制自氧化反应，止中间 清 ) 阻产物的积累，而评价受试物清除 0的能力。以添加药液从

基阴离子和羟基自由基的作用，且从植物中提取无毒副作而用且抗氧化能力强的抗氧化剂正是目前所需要的，望能为希三白草这一药用植物开发利用提供更好的帮助。 参考文献[]文东旭摘 .白草中具有保肝作用的非对映木脂素[]国外医 1三 J.药一植物药分册 .0 1 1 ( ) 1 7 2 0, 6 4: 6

的浓度为横坐标，除率为纵坐标作图，清比较三自草总黄酮提物和茶多酚对 0的清除效果。见图 2 。10 0

8 O

喜r i o量皇 4 02 OO

[] Hw n Y, e H, mJ e a.T e uao i ep— 2 a gB L e J Na B, t 1 won wfrn dt re -n s fo S u u u hi n ss a d t er e f c s o he a tv to e r m a r r s c ne e i n h i fe t n t c i a i n

o eo i me rleao- at ae ee tr a f rxs oi rtr ci tdrcpo mmaJ.JN t

p o p f v g[￣ aPr d, 0 2 6 4 6 6 o 2 0, 5( ): 1

I]石玉平，挺， s卢王永宁， .菜蜂花粉中黄酮类物质清除羟基自等油属量攘厦q/ l m

由基的研究[]食品科学，0 4 1 ( )3 J. 20, 13:7

图 2三白草总黄酮对 o一的清除作用 2

[] Ro gTso Whc oy h nl o o n scnr uet h 4 n a. i p lp e oi cmp u d o ti t ote h c b ttl nixdn ciie fa pe J .JAgi F o hm, oa a t ia tat t so p l[] r od C e o vi c2 0 5 49 9 0 5, 3: 8

由图 2可看出，白草总黄酮提取物和茶多酚对 (三 )一均

有清除作用，清除的效果与添加的剂量正相关。在低浓度且

[]冯雅琪，国江，庆红， .扑酚抗脂质过氧化作用研究[] 5吴郝等厚 J.河北大学学报 (自然科学版 ) 2 0, 5 1: 7,0 5 2 ( )5[] C oG, o i E, r n i xd n n r o ia t e a— 6 a S f P i RI c o .A t—o ia ta d p 0 xd n b h v

时，者的消除效果相当，随着浓度的增加，白草总黄酮二但三提取物对 0一的清除效果明显提高，向反应体系中添加 当 1浓度为 0 8mg m的三白草总黄酮提取物时，)的清除 ml ./ l (

iro lv n i tu tr o ff ood srcue— at i rlt nhp J . F e a s ci t eai sis[] re vy oRe ia i l g& M e ii e 1 9 2 ( ): 9 d c lB o o y d en, 9 7. 2 5 7t

率达到了 6 .4, 5 7同浓度的茶多酚清除率只有 3 . 2, 74%即在同等浓度下，白草总黄酮提取物对 0一清除率比茶多三的酚高 2.2。 8 3 3结论 .

[]王晓春，苏，克前.前草水煎液对氧自由基清除作用的研 7龙徐车究[]实用预防医学，0 2 9 2:3 J. 20,( ) 1 9[] B u r Na￣i P cvk e 1 f cs f u eo ie 8 ae V, k maT, uo syV, t .E f t o pr

xd a e sg n r tn y t m s o u ce t n e e a i g s s e n m s l o e,c o e g c a d NA N C e h l n r i n i r—

1通过正交实验，到三白草黄酮的最佳浸提条件为： )得 7 的乙醇为提取溶剂， 7 O在 O℃、液比 1:2料 0的条件下提取 4。2三白草总黄酮提取物具有较强的抗氧化活性。试 h )

h so ssi ctar y[] o ra e t n mi r o s p ne n a i wa J .J unl of t Au o o c Ne o u.

S s e, 0 0, 9 3 y tm 2 0 7: 4

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