日本TAKARA公司逆转录和定量PCR体系

逆转录PCR

反应体系如下表： 5×PrimerScript Buffer PrimerScript RT Enzyme Mix Random 6 mers (100 μM) Oligo dT Primer (50 μM) Total RNA RNase Free dH2O Total 反应条件：

37 ℃，15 min逆转录反应；85 ℃，5 s逆转录酶的失活反应；4℃，反应结束，产物为cDNA。若短期内不使用cDNA，应将其放于－80 ℃冰箱保存备用。

荧光定量PCR

反应体系如下表：

SYBR? Premix Ex TaqTM( 2×) PCR Primer Forward、 Reverse (10 μM) Rox

RNase Free dH2O cDNA template Total 反应条件：

95 ℃预变性30 s，95 ℃变性5 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共40个循环。扩增产物于4 ℃冰箱保存。

0.5 μL 9 μL 2 μL 25 μL 12.5 μL 各0.5 μL

2 μL 0.5 μL 0.5 μL 0.5 μL

(500 ng/RNA的浓度) μL

补至10 μL

10 μL

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