液相色谱系统的日常维护及注意事项

液相色谱系统的日常维护及注意事项

液相色谱系统的日常维护及注意事项（之一）

仪器安装条件与注意事项

1、 安装本仪器的实验台应水平、稳固、并具有足够的放置空间。避免在具有腐蚀性气体、大量灰尘或能产生强磁场的地方安装本仪器，否则将会影响仪器的正常运转及缩短仪器的使用寿命。

2、 由于仪器所用溶剂是易燃并且有毒，故安装设备的房间应通风良好，应具有向外排风的装置，否则可能引起中毒或身体不适，也可能会引起火灾。 3、 应安装四个以上三芯电源插座（220V，5～10A），必须具有专门的接地线（注意，绝不能将电源线的中线作为接地线），并确保输出电源的电压稳定，否则会导致仪器的不正常运作。如果实验室无专用接地线，一般可用φ15～20mm的铜棒打入地下1～1.5米，用φ1.2mm左右的塑胶单股导线连接到电源插座的接地端。

4、如果实验室电压不稳定，应使用稳压器等必要设备，使电源电压稳定。 5、实验室的室温应控制在15℃～30℃范围内，并且波动要小；湿度在45～80%范围内。

6、由空调或其他设备产生的气流不要直吹仪器，避免光线直射及振动。

仪器的启动顺序：先开高压恒流泵和紫外检测器，待紫外检测器自检完毕，回到默认波长254nm后，再开计算机及打开工作站软件。

仪器关闭顺序：先按泵停止，关闭氘灯，退出工作站软件，然后再关仪器。 仪器应由专人负责，如果使用人员不固定，请准备《仪器使用登记本》，以明确使用情况，及时处理和保养。

液相色谱系统的日常维护及注意事项（之二）

流动相使用的注意事项

必须使用HPLC级或相当于该级别的流动相，并要先经0.45μm薄膜过滤。

过滤后的流动相必须经过充分脱气，以除去其中溶解的气体（如02），如不脱气易产生气泡，增加基线噪声，造成灵敏度下降，甚至无法分析。 几种脱气方法比较：

1、 氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱气，效果较好但成本高。

2、加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染。 3、抽真空脱气法：易抽走有机相。

4、 超声脱气法：一种较为常见的脱气法。流动相放在超声波容器中，用超声波震荡10～15分钟，此法效果并不太好但操作简单。 如果管路中使用peek树脂部件，请不要使用下列流动相：

浓硫酸、浓硝酸、二氯乙酸、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿和二甲基亚砜 特别注意HPLC使用过后的系统清洗： 含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法：

1、 先用100%的纯水冲洗，打开排放阀，用3～5ml/min的流量，洗二十分钟左右后停泵。

此举主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空间的清洗。 2、 再用95：5的甲醇/水清洗整个系统，关闭排放阀，用1ml/min的流量，洗30～60分钟后停泵。此举主要是用水清洗整个系统中的盐，用5%的甲醇主要是为了保护色谱柱。

3、 最后用100%的甲醇清洗整个系统，用1ml/min的流量，洗2分钟左右，然后关机。

如果流动相中不含盐，则使用上述第三步清洗即可。

液相色谱系统的日常维护及注意事项（之三）

流动相的更换

在分析过程中，有时需要更换流动相进行分析。一定要注意前一种使用的流动相和所更换的流动相是不是能够相溶。如果前一种使用的流动相和所更换的流

动相不能够相溶，那您就要特别注意了。要采用一种与这二种需更换的流动相都能相溶的流动相进行过滤、清洗。

较为常用的过滤流动相为异丙醇，但实际操作中要看具体情况而定，原则就是采用与这二种需更换的流动相都能相溶的流动相。一般清洗时间为30～40分钟，直至系统完全稳定。

如不进行以上“特别注意”上述步骤的操作，将会导致系统管路阻塞。严重时将引起流通池污染堵塞，不得不更换流通池。用户就要承担不必要的损失了。 储液器的注意事项：

保持流动相储液器的清洁是保证仪器正常使用的关键。要使用HPLC级的溶剂，对试剂含有缓冲盐及非HPLC级的流动相一定要用0.45μm过滤器除去其中的微量物质。

液相色谱系统的日常维护及注意事项（之四）

管路连接的注意事项

1、 将管子完全插入开口端，直至其与开口端的末端相碰为止。否则将产生死体积，引起峰展宽。

2、 为了使柱外效应减到最小，获得理想的分析结果，尽量使用管径细的管路作为连接。

3、 管路接头不要拧得过紧，以防破坏螺纹。

液相色谱系统的日常维护及注意事项（之五）

基本操作注意事项

泵运行前先打开排空阀，用注射器抽出流动相，观察10秒，流动相应连续流出。不用排空阀时应将其关闭，否则大气压力会使流动相从排空阀出口流出。

在使用仪器过程中，注意贮液瓶里的流动相是否够用，如快用尽应及时更换。更换流动相时务必停泵，防止吸入大量空气，影响仪器正常运作。

在启动分析进样时，请快速扳动7725i进样阀，否则会引起系统压力突跳，影响仪器的使用寿命。

如对样品分析的定性定量要求较高，应配置柱温箱，保持温度恒定。

若流动相不是纯甲醇，样品分析结束后，必须用HPLC级甲醇对泵及进样阀进行清洗，大约半小时后，待压力重新回落并稳定，方可关泵。

若流动相中含有缓冲盐，则须根据其特殊的清洗方法进行清洗（上述提到过）。

液相色谱系统的日常维护及注意事项（之六）

氘灯的保养

紫外检测器中的氘灯是有一定使用寿命的。为了节省灯的使用寿命，在暂时不使用时可在不关机的情况下，只把灯关掉（建议：最好在需要关灯4小时以上才关灯，因为频繁的开关灯，同样会缩短灯的使用寿命）。

相色谱系统的日常维护及注意事项（之七）

色谱柱的保养事项

为了保护色谱柱，延长其使用寿命，在使用时应采取以下几方面措施：应在柱头加烧结片不锈钢滤片，需要时加保护柱。防止柱头堵塞，影响分析效果。当流动相的PH>7时,要用大粒度同种填料作预柱。溶剂的化学腐蚀性不能太强。要避免微粒在柱头沉降。为防止高压冲击，泵上的压力限制不宜太高，一般在15～ 20MPa为宜，在旧柱或梯度洗脱时应稍高些，以避免因上限设置过低而造成正常使用中的中途停机。

色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂（甲醇或乙腈），两端封死。

液相色谱系统的日常维护及注意事项（之八）

手动进样阀的维护注意事项

在每次使用后，尤其是进样浓度差异比较大的样品时要用专用工具（不是带针头的注射器）冲洗进样阀，冲洗时必须冲洗进样阀两头数次，每次数毫升。以防止无机盐沉积和样品微粒造成阀内部磨损或阻塞以及样品的交叉污染。

安装进样阀的5，6出口要与注射器在同一水平线上，以防止虹吸现象的发生，导致进样量的重复性变异。

进样量的多少要根据定量管的环体积决定：当样品量较少时：进样体积由注射器的进样体积决定，但最大体积要小于环体积的1/2。当样品量较多时：进样体积由定量管的体积决定，为保证样品完全把定量管的流动相置换干净，需注射5～6倍的环体积。

要使用专用的液相注射器进样，绝不可用气相注射器。注射器前应用专用的样品过滤器。

液相色谱系统的日常维护及注意事项（之九）

高压恒流泵的维护注意事项

泵的密封圈是最易磨损的部件，密封圈的损坏可引起系统的许多故障，要注意保养和定期更换。应采取下列措施以延长使用寿命：

绝对不允许在没有流动相或流动相还没有进入泵头的情况下启动泵而造成柱塞杆的干磨。

每天使用后应将整个系统管路中的缓冲液体冲洗干净，防止盐沉积，整个管路要浸在无缓冲的溶液或有机溶剂中。长期不用也要定期开泵冲洗整个管路。

要用HPLC级试剂

输液管前端要用烧结不锈钢沉子过滤流动相。要注意防止管路阻塞造成压力过高而损坏仪器。

压力下限应设置在0.5～1MPa，以防止储液器中的流动相被抽干或严重渗漏而引起柱塞的干磨，有柱后清洗功能的高压恒流泵还要注意保持清洗液，否则将失去柱后清洗效果。

液相色谱系统的日常维护及注意事项（之十）

泵的压力不稳定

在安装调试时以及在日常使用过程中，若出现压力不稳的现象。原因有几点： （一）管路里有气泡，建议由流动相多走些时间。或打开排空阀，用配件里的针筒多抽几下。

（二）输入单向阀失效所致，这也是经常遇见的。首先如何判断输入单向阀失效。 判断步骤为：

渗透性好，可耐高压，适于高流速下操作。 3．流动相

在凝胶色谱中，为提高分率效率，多采用低粘度、与样品折光指数相差大的流动相。常用的流动相有苯、甲苯、邻二氯苯、二氯甲烷、1，2一二氯乙烷、氯仿、水等。

高效液相色谱仪操作步骤 高效液相色谱仪操作步骤：

1)、过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。 2)、对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

3)、打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。

4)、进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。

5)、有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。

6)、调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。

7)、设计走样方法。点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new

method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。

8)、进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。

9)、关机时，先关计算机，再关液相色谱。 10)、填写登记本，由负责人签字。 注意事项：

1)、流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。

2)、柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。 3)、所有过柱子的液体均需严格的过滤。 4)、压力不能太大，最好不要超过2000 psi。

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