WB试剂配方

WB试剂配方

SDS-上样缓冲液(2X) 100ml （100 mM Tris-Cl (pH 6.8)；4% (w/v) SDS；0.2% (w/v) bromophenol blue；20% (v/v) glycerol；200mM DTT (dithiothreitol) Tris-base 1.2114g

SDS 4g bromophenol blue 0.2g glycerol 20ml

ddH2O 定容至80ml 1M DTT 20ml

Store the SDS gel-loading buffer without DTT at room temperature. Add DTT from a 1 M stock just before the buffer is used.

配胶：

30%丙烯酰胺（商品化29:1） Tris-HCl：

（1）分离胶（PH8.8）1.5M

称取Tris-base（MW121.14）91.855 g，先ddH2O 400ml，用盐酸调pH=8.8后，定容至500ml

（2）浓缩胶（PH6.8）1M

称取Tris-base（MW121.14）60.57 g，先ddH2O400ml，用盐酸调pH=6.8后，定容至500ml 10% SDS

称取10g SDS粉末，溶于入100ml ddH2O即可，可80℃水浴加热，易于溶解。

10%APS（过硫酸铵）: 称取1 g过硫酸铵；加入10 ml的ddH2O，将固体粉末彻底溶解；贮存于4℃。

TEMED（商品化）

SDS-PAGE电泳缓冲液（25mM Tris, 192mM Glycine, 0.1%SDS） 25℃，pH约为8.6 Tris-base(MW121.14) 3.03g Glycine(MW75.07) 14.41g SDS 1g

加ddH2O定容至1000ml

转移缓冲液

称取14.3g Glycine，2.9g Tris.base，200ml 甲醇定容至1L，存于4℃

10x 丽春红染液 丽春红S 2g 三氯乙酸 30g 磺基水杨酸 30g

加ddH2O定容至100ml 用时稀释10倍

10x TBS母液（1L）

20mM Tris-base 24.228g 150mM NaCl 87.75g

先溶于800ml ddH2O，用浓HCl调pH=7.2-7.4，后定容至1L

用时先稀释成1xTBS，并补加入1‰ Tween-20后配成1xTBS-T

封闭液 5% milk：称取5g脱脂奶粉，溶于100ml 1xTBST；3% BSA：称取3g BSA粉末，溶于100ml 1xTBST 发色液

ECL Plus western blottingdetection system 和Advance ECL western blotting detection system，以及SuperSignal West PicoChemiluminescent （等级强度Advance>ECL Plus> west pico）

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/8glo.html