固相萃取反相高效液相色谱法检测太湖蛳螺中微囊藻毒素

第２４卷第５期Ｖ０１．２４，Ｎｏ．５２００８年９月Ｓｅｐ．２００８

固相萃取一反相高效液相色谱法

检测太湖蛳螺中微囊藻毒素

ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏｃｙｓｔｉｎｓｉｎｔｈｅｓｎａｉｌｇｅｎｕｓｅｒｉｏｃｈｅｉｒｆｒＯｍ

ＴａｉｈｕｕｓｉｎｇＲＰ－ＨＰＬＣｗｉｔｈａｎｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓｏｌｉｄｐｈａｓｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ

闫建秀１，２虞锐鹏１汤坚１顾小红１

ｍⅣＪｉａｎ．ｚ也’，２ｙＵＲｕｉ－ｐｅｎ９１ＴＡＮＧＪｉａｎｌＧＵＸｉａｏ．ｈｏｎ９１

（１．江南大学食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡２１４１２２；２．江南大学食品学院，江苏无锡２１４１２２）

（１．Ｓｔａｔｅ研ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｉａｎｇｎａｎ№搿ｊ移，Ｗｕｘｉ，五ａｎｇｓｕ２１４１２２，Ｃｈｉｎａ；

２．ＳｃｈｏｏｌｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＪｉａｎｇｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，阢撕，＾ａｎｇｓｕ２１４１２２，Ｃｈｉｎａ）

摘要：建立一种高效液相色谱法测定太湖蛳螺中微囊藻毒素

ＲＲ和ＬＲ的方法。该方法采用固相萃取法进行纯化富集，用

２极管阵列检测器检测，比较不同提取溶剂、提取时间和淋洗

液等因素对样品中微囊藻毒素提取效率的影响。色谱条件：

色谱柱３００ＳＢＺｏｒｂａｘＣ１８柱（２５０ｉｎｎｌｘ４．６ｍｍｉ．ｄ．，５ｐ．ｍ），

流动相为乙腈：水（Ｖ：Ｖ）＝３５：６５（舍Ｏ．１％甲酸），检测

波长为２３８ｎｍ。在２．５～１００ｎｇ的范围内，进样量与峰面积

呈良好的线性关系。该方法灵敏度高，简便快捷，可作为水

生物中藻毒素风险评价和监测水生物体内蓄积的藻毒素较

可靠的分析方法。

关键词：高效液相色谱；固相萃取；微囊藻毒素；太湖蛳螺

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｍｉｅｒｏｃｙｓｔｉｎｓ（ＭＣ—ＲＲ、ＭＣ—ＬＢ）ｉｎｔｈｅｓｎａｉｌｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍ

ＴａｉｈｕｗｅＴｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＲＰ—ＨＰＬＣｗｉｔｈｓｏｌｉｄｐｈａｓｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．Ｍｉｃｒｏ－

ｃｙｓｔｉｎｓ

ｗｅＹｅｅｘｔｌ日ｃｔｅｄｂｙｓｏｌｉｄｐｈａｓｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｄｉｏｄｅａｔ－

ｒａｙｄｅｔｅｅｔｏｒ．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆ

ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｏｌｖｅｎｔｓ，ｔｈｅｔｉｍｅｏｆｔｒｅａｔｍｅｎｔａｎｄｔｈｅ

ｅｌｕｔｉｏｎｓｏｌｕｔｉｏｎｓＯｎｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｍｉｅｒｏｃｙｓｔｉｎｓｗｅｒｅｃｏｎｌ－

ｐａｒｅｄ．Ａｃｎｌｌｌｍｎ３００ＳＢＺｏｒｂａｘＣ１０（２５０ｍｌｎｘ４．６ｔｏｎｉｉ．ｄ．，５ｔｕｎ）ｗａｓ

ｓｅｌｅｃｔｅｄａｎｄｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｉｓａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－ｗａｔｅｒ（３５：６５），ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ

０．１％ｆｏｒｍｉｃａｃｉｄ．ａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｉｓ２３８ｎｍ．Ａｓｏｏｄｌｉｎｅ－

ａｒｒａｌｌｇｅｏｆ２．５—１００

ｎｇ

ｃｏｕｌｄｂｅｏｂｔａｉｎｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｔｈａｔｔｈｅ

ｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄａｎｄａｃｃｕｒａｔｅｆｏｒｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇｔｈｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆｔｈｅｔｏｘｉｃｍｉｃｒｏｃｙｓｔｉｎｓｉｎａｑｕａｔｉｃａｎｉｍａｌｓ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＲＰ?ＨＰＬＣ；Ｓｏｌｉｄｐｈａｓｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；Ｍｉｃｒｏｃｙｓｔｉｕｓ；Ｔａｉｈｕｓｎａｉｌｇｅｎｕｓｅｒｉｏｃｈｅｉｒ

基金项目：农业部农业行业标准制定（项目编号：２００６—１８２）；江苏省科技厅仪器设备共享服务平台项目资助（项目编号：

０６—５７）

作者简介：闷建秀（１９８４一），女，江南大学食品学院在读研究生。

Ｅ—ｍａｉｌ：ｗａｗａ＿ｙａｎｌｌ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ

通讯作者：虞锐鹏

收稿日期：２００８一嘶一１６

９２

近年来我国大部分湖泊水体富营养化加剧，藻类由此而大量繁殖，产生“水华”现象。蓝藻衰败的过程中产生有害蓝

藻毒素，其中微囊藻毒素（ｍｉｃｒｏｃｙｓｔｉｎａ，简称ＭＣｓ）是毒性最强的一种，它具有强烈的促肝癌作用¨Ｊ。ＭＣ存在多种异构体，其中毒性最大的ＭＣ．ＲＲ和ＬＲ最为常见。到目前为止，国内外因藻毒索引起的水生动物、鸟类、畜类甚至人类死亡的事件时有发生睢－４］。ＭＣｓ在鱼体内的富集及污染状况逐渐引起了国内外学者的广泛关注”’６１。ＭＣｓ通过食物链而引起人类潜在的健康危害已成为一个重要的公共卫生问题。淡水水产品是我国重要的食物资源，其中以藻类为食的蛳螺，既是鱼类和河蟹等水生动物养殖的饲料，同时也是当地居民喜爱的一种水产品。食用这类被ＭＣｓ污染的水产品，可能会对人类健康造成危害。

生物体内ＭＣｓ含量最常用检测方法为高效液相色谱（ＨＰＬＣ）。ＨＰＬＣ技术一般采用正相或反相色谱对毒素进行分离，然后进行紫外、荧光或化学发光检测，可广泛用于ＭＣｓ

的分离、鉴定和定量检测。该法有良好的灵敏度（可达０．１彬Ｌ）和选择性，与液相色谱一质谱联用、快速离子轰击色谱等昂贵仪器相比，价格便宜。与酶联免疫法相比，在定性和定量上更加可靠。将固相萃取法和反相高效液相色谱（ＲＰ．ＨＰＬＣ）相结合，可以准确定量ＭＣｓ含量，从而更加有效地检测水产品中ＭＣｓ。目前，我国不断加强对ＭＣｓ的研究，调查ＭＣｓ的污染状况，尤其是水产品中ＭＣｓ的污染状况，应引起足够的重视。

本试验从环境安全和食品安全的角度出发，选取太湖蛳螺作研究对象，采用固相萃取法结合ＲＰ—ＨＰＬＣ检测两种常见的微囊藻毒素ＭＣ－ＲＲ和ＬＲ，优化处理步骤，建立一种简

安全与检测２００８年第５期

便、快速检测蛳螺体内ＭＣｓ的方法，为探讨微囊藻毒素对水产品的污染和水产品中微囊藻毒素的研究奠定了一定的基础。

１材料与方法

１．１材料

微囊藻毒素标样ＭＣ．ＲＲ、ＬＲ：瑞士Ａｌｅｘｉｓ公司，纯度＞９５％：

甲醇、乙腈：均为色谱纯，美国天地公司；

三氟乙酸（ＴＦＡ）：分析纯。

１．２仪器与设备

高效液相色谱仪Ａｇｉｌｅｎｔ１１００：配２极管阵列检测器，美国安捷伦科技有限公司；

固相萃取柱ＥＮＶＩ—１８：美国Ｓｕｐｅｌｃｏ公司，５００ｍｇ；

型台式离心机ＡｎｋｅＴＧＬ一１６Ｂ：上海安亭科学仪器厂；

型超声振荡器ＨＳ３１２０Ｄ：天津横奥科技发展有限公司；

恒温水浴锅Ｗ２０１Ｂ：上海申顺生物科技有限公司；

多功能食品搅拌器ＳＧ３００一Ａ：上海科骏电器有限公司。１．３方法

１．３．１蛳螺样中ＭＣ提取与制备蛳螺取样及制备参见水产品抽样方法（ＳＣ／Ｔ３０１６－—＿２００４）。取３ｇ匀浆后的蛳螺样，加入８５％甲醇水溶液２０ｍＬ，超声提取１０ｍｉｎ（频率：５０ｋＨｚ，功率：１００Ｗ），１００００ｒ／ｍ．ｉｎ离心１０ｍｉｎ，移取上层清液，沉淀再次抽提（方法同前），合并上清液，于４０℃旋转蒸发至甲醇挥发尽。将此浓缩液通过已预处理好的ｃ。。固相萃取柱，过柱速度约为３ｍＬ／ｍｉｎ，先后用超纯水和２０％甲醇溶液各５ｍＬ淋洗ｃ。。柱去除杂质，９０％甲醇溶液（含０．１％ＴＦＡ）５ｍＬ将ＭＣ洗脱至容量瓶中，置于４０℃水浴吹至半干后，用甲醇定容至ｌＩｎＬ，经０．４５岬有机微孔滤膜过滤后，待测。

１．３．２标准溶液配制取ＭＣ—ＲＲ、氓标准品配制成浓度为１０ｔｗ／ｍＬ的储备溶液。准确移取标准储备液，用甲醇定容，分别配成浓度为０．２５，０．５０，０．７５，１．００，５．００，１０．００ｔ培，／ｍＬ系列标准溶液。

１．３．３色谱分析条件色谱柱：ＺｏｒｈａｘＳＢＣ。８（２５０ｎｌＩＢ×４．６ｍｍｉ．ｄ．，５岬）；流动相：乙腈：水（Ｖ：Ｖ）＝３５：６５（含０．１％甲酸）；流速：１．０ｍＩ／ｍｉｎ；进样量：２０ＩｚＬ；检测波长：２３８ｎｍ；柱温：３０ｏＣ。

２结果与讨论

２．１色谱分析条件的选择

试验中通过２极管阵列检测器进行紫外扫描发现ＭＣ?ＲＲ和ＬＲ的最大吸收波长均为２３８ｎｍ，因此选择２３８ｎｍ作为检测波长。色谱柱分别用了ＳｙｍｍｅｔｒｙＣ幢（２５０ｍｍｘ４．６ｍｍ，５斗ｍ），ＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８（２５０ｉｎｔｏｘ４．６ｍｍ，５ｐａｎ），ＤｉｋｍａＤｉａｍｏｎｓｉｌＣｌｌ（２５０ｈｉｍ×４．６ｍｍ，５ｐａｎ）和Ｌｉｃｈｒｏ－ｓｐｈｅｒｅＣ１８（２５０Ｉｎｔｏｘ４．６ｍｍ，５ｔｔｍ）４种反相色谱柱，并分别以甲醇～水、乙腈—水（Ｏ．１％甲酸）、甲醇一磷酸盐缓冲液为流动相，分离蛳螺中的ＭＣ－ＲＲ和ＬＲ。结果发现：在ＭＣ．ＬＲ出峰处，ＺｏｒｂａｘＳＢＣ埔（２５０ｍｍ×ｇ．６ｍｍ，５ｇｍ）色谱柱的分离效果最好，如图１所示。ＺｏｒｂａｘＳＢＣ幅柱对于难分离的肽类物质有着较好的分离效果，且其高纯硅胶保证了良好的峰形。另外考虑２３８ｎｍ处甲醇的吸收大于乙腈，使得甲醇一水系统噪音较大，信号较弱，信噪比较小。而酸溶液和磷酸缓冲液对仪器腐蚀较大，特别是磷酸缓冲液对输液泵的密封圈腐蚀较大等因素，故选择ＺｏｒｂａｘＳＢＣｌ。柱并以乙腈／水为流动相的色谱条件。

１７．５

１５．Ｏ

１２．５

号１篓

２．５

Ｏ

ｏ

１

１７．５

１５．０

１２．５

ｌＯ．Ｏ

７．５

５．０

２．５

Ｏ

Ｏ５ｌＯ１５２０

时间

Ｔｌｍｅ／ｍｉｎ

Ｏ５１０１５２０

时向

Ｔｉｍｅ／ｒａｉｎ

（ｂ）ＺｏｒｂａｘＳＢＣｔ柱

以“～Ｌ一灭

－＿．Ｊ一’＿－●－?＿‘

１

ｌ

ｌ

ｊ

ｌ

｛

Ｏ５ｌＯ１５２０

时间

Ｔｍｌｅ／ｍｉｎ

（ｃ）ＶｉｋｍａＤｉａｍｏｎｓｉｌＣｍ柱

时同

Ｔｔｍｅ／ｍｉｎ

（ｄ）‰ｌｌＩＩＤ｜Ｉ，ｈｔ∞Ｃｔｓ柱

图１不同色谱柱对ｂｌＣ的分离

Ｆｉｇｕｒｅ１Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｌｍｎｎｓｏｎ

ｔｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆＭＣ在ＭＣ的提取过程中，粗提取液通过Ｃ。。小柱固相萃取纯化后，可去除大量极性化合物的干扰。因此采用３５％乙腈（含０．１％甲酸）作为流动相进行等度洗脱，就可使色谱峰达

９３

第２４卷第５期

囝建秀等：固相萃取一反相高效液相色谱法检测太湖蛳螺中微囊藻毒素

到基线分离，使出峰时间尽量提前，在２０ｍｉｎ内完成，分离效果如图２（ａ）和（ｂ）所示。ＭＣ－ＩＬＲ、Ｌｉｔ与相邻峰分离良好，谱线比较平滑，未出现托尾现象。

２．２

ＭＣ—ＲＲ和ＬＲ提取条件的选择

２．２．１提取溶剂的选择水生动物体内的ＭＣ提取，常使用提取溶剂有以下３种：Ａ：５％醋酸溶液；Ｂ：正丁醇：水：甲醇（１：４：１５。Ｖ：Ｖ：Ｖ）；Ｃ：８５％甲醇水溶液”ｑｊ。试验中分别采用以上３种溶剂提取蛳螺体内ＭＣ，通过比较ＭＣ—ＬＲ的提取量，发现Ｂ和ｃ的提取效果明显优于Ａ，如图３所示。Ｂ和ｃ相比较，Ｂ提取出的杂质更多，吹干易挥发物后粗提液较为浑浊，使得ＭＣ．ＬＲ色谱出峰处的杂质干扰也较多，干扰ＭＣ的准确定量分析。另外，甲醇具有通过蒸发就能快速浓缩的优点，故选用８５％甲醇作为提取溶剂来提高提取效率，节省操作时间。

６

４ｏ

｛

２

０８６

罨４

２

０

３．５

８．５１３．５

时间

Ｔｉｍｅｌｎｎｎ

８．５

１３．５

（ｂ）

１８．５

时间

Ｔｉｍｅ／ｒａｉｎ

图２

ＭＣ标样（ａ）和蛳螺加标（ｂ）ＨＰＬＣ色谱图

Ｆｉｇｕｒｅ

２

ＨＰＬＣｓｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｓｔａｎｄａｒｄａｎｄＭＣｉｎｓｎａｉｌ

ｏ．９

一

ｏ．８

善弘

ｏ、翟

０．６

ｏ－５

不同提取溶剂种类

图３提取溶剂对ＭＣ－ＬＲ提取效果的影响

ｌｒ唱ｕｒｅ３

Ｔｈｅｄｔｉｃｉｅｒｒｙ０ｆ

ＭＣ－Ｈ！明删∞ｂｙ

ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｏｌｕｔｉｏｎｓ

２．２．２提取方法的选择试验中通过２５℃水浴振荡和超声波两种方法对蛳螺中微囊藻毒素ＭＣ．ＲＲ和ｕｔ进行提取，两者提取结果相近，见表１。由于超声波提取操作简便，水浴

９４

振荡需较长，因此试验选取超声波提取。

２．２．３提取时间的选择试验比较了超声提取５。Ｏ。３０

ＩＩｌｉｎ

对微囊藻毒索提取效率影响。超声提取５，１０，３０ｒａｉｎ后，

ＭＣ．Ｉ晨的提取量分别为Ｏ．醅，Ｏ．７８，Ｏ．７６帖／ｇ。结果表明：

超声提取１０ｒａｉｎ后微囊藻毒素的提取率略高于５ｍｉｎ，超声提取ｌＯ，３０ｍｉｎ得到的结果差不多。从节约时间上考虑。本次试验选择超声提取１０

ｒａｉｎ。

裹ｌ提取方法对ＭＣ—ＲＲ和ＬＲ提取效果的影响

Ｔａｂｌｅｌ

ＥｘｔｒａｃｔｅｄｑｕａｎｔｉｔｙｏｆＭＣ．ＲＲｏｂｔａｉｎｅｄｂｙ

ａｇｉｔａｔｉｏｎ

ａｎｄ

ｕｌｔｒａｓｏｎｉｔｉｃａｔｉｏｎ／（鹇?ｇ。１）

２．３

ＭＣ?ＲＲ和ＬＲ固相萃取条件优化

２．３．１杂质的淋洗ＳＰＥ柱在洗脱前用适当的溶液进行淋

洗，可以减少杂质及其对目标物的干扰。在ＭＣ的固相萃取

中，一般都采用甲醇水溶液作为杂质淋洗液。甲醇浓度过低，杂质淋洗效果不好，严重干扰色谱峰；甲醇浓度过高，杂

质淋洗效果虽然明显，但同时也会将少量ＭＣ洗脱下来。因

此，选用合适的杂质淋洗液至关重要。试验过程中，分别选用２０％，２５％，３５％，４５％甲醇水溶液作为淋洗液，淋洗ｃ。。固

相萃取柱，收集过柱后的淋洗液，比较其ＨＰＬＣ色谱图（图４）。结果表明：２５％甲醇水溶液淋洗柱子时，可造成少量ＭＣ的流失，且随着甲醇浓度的增加，杂质洗脱能力越强，ＭＣ的流失也越大。因此选用２０％甲醇水溶液作为杂质淋洗液最为合适。

６

４

ａ

１

２

０３．５

５．０

７．５

１０．ｏ

１２ｊ

１５．ｏ

１７．５

２０．Ｏ

时间

Ｔ＇ｎｎｅ／ｍｉｎ

４５％甲酵

３５％甲醇

２５％甲醇２０％ｑｊ醇

图４不同浓度杂质淋洗液色谱图比较

Ｆｉｇｕｒｅ４

Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｕｔｉｏｎｓ

２．３．２洗脱液的选择洗脱液是为了尽量将分析物从固定

相中洗脱下来以进行分析。在ＭＣ洗脱液吹于浓缩的过程中，甲醇浓度越高，浓缩越快，因此选３种高浓度的甲醇洗脱

液：９０％甲醇水溶液＋０．１％ＴＦＡ、９０％甲醇水溶液和１００％甲醇溶液。使用９０％和１００％甲醇洗脱ＭＣ时，得到的回收率差不多，但洗脱下来的杂质太多，造成色谱峰干扰严重。而在９０％甲醇洗脱液中加入０．１％ＴＦＡ，则效果显著较前两

种更好，杂质峰干扰较小，回收率较高。加入’Ｍ改善回收

安全与检测２００８年第５期

率的原因可能在于加入１下＇Ａ后，酸性环境促进了Ｍｃ多肽质子化，减少ＭＣ与硅胶表面硅醇基之间的作用，使其更容易被洗脱下来。

２．４线性关系和检测限

取浓度分别为０．２５，０．５０，０．７５，１．００，５．００，１０．００Ｉｊ，ｇ／ｒ，，Ｌ系列标准溶液，在色谱条件下测定。以标准溶液浓度（∥ｍＬ）为横坐标，以相应的吸收峰面积为纵坐标，进行线性回归分析，得标准曲线回归方程和相关系数，见表２。在２．５—１００ｎｇ的范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系。在信噪比为３的条件下，使用２极管阵列检测器的绝对检出量为ｌ嘴，最低检出限为０．１∥ｒｎＬ。换算成实际样品重量，其检测限可达３３．３ｎｇ／ｇ。

裹２线性范围及相关系数

Ｔａｂｌｅ２Ｔｈｅｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｅｑｕａｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅｑｎａｌｙｔｉｅａｌｍｅｔｈｏｄ

２．５精密度和回收率试验

分别准确称取６份蛳螺样品３ｇ（不含ＭＣ），在其中３份中添加藻毒素浓度为ｂｌＣ?ＲＲ：Ｏ．５５１，Ｍｃ－ＬＲ：Ｏ．７１３峭／ｇ；在

另外３份中添加藻毒素浓度为ＭＣ—ＲＲ：２。７６，ｌＶｌＣ—ＬＲ：３．５６∥ｇ，按上述方法制备后分析测得回收率和精密度见表３。样品中Ｍｃ的回收率在７９．１％一８４．３％以上，相对标准偏差在３．８％－４．５％之间，说明该方法回收率高，重现性较好。

裹３蛳螺样ＭＣ检测方法回收率

Ｔａｂｌｅ３Ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓｏｆｔｈｅａｎａｌｙｔｉｃａｌｍｅｔｈｏｄ

２．６样品的测定

在相同地点取样，对不同批次的太湖蛳螺样品按１．３．１方法进行处理并测定，结果见表４。

表４蛳螺样品中ｌＶｌＣ徽囊藻毒素含量’

Ｔａｂｌｅ４ＴｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆＭＣｉｎｓｎａｉｌｓ／（峙?ｇ一）ｔＮ．Ｄ．：未检出

结果表明：７月虽然是蓝藻爆发高峰期，但在蛳螺体内并未检测出ＭＣ，而２００６年和２００７年１０月均检出不同含量的ｌＶｌＣ。显示太湖水体有毒蓝藻污染所产生的毒素已经影响到水产品的质量并存在潜在的食品安全危险。

ＷＨＯ暂定的Ｍｃ．Ｌ１１临时可耐受的每Ｅｌ摄取量（ＴＤＩ）为０．０４峙／（ｉ，ｇ?ｄ）。假设一个成年人６０ｋｇ，如果一天摄入３ｇ蛳螺（２００６年１０月，ｌＶＩＣ．ｕｔ＝Ｏ．８１略／ｇ）就会超过ＴＩ）Ｉ值。因此通过食用水产品摄入ｂｌＣ的风险不容忽视，建立起水产品中ｌ～ｌＣｓ的标准检测方法非常必要。

３结论

建立固相萃取法结合ＲＥ．Ｉ－ＩＰＬＣ检测被有毒蓝藻污染的水环境中蛳螺体内微囊藻毒素的方法。通过蛳螺体内Ｍｃ提取分离条件的比较，确定出８５％甲醇为最佳提取试剂，超声提取１０ｍｉｎ为最佳提取方式和时间。当添加量大于０．５螨／ｇ，方法回收率可达７９％以上。综合上述结果表明，该法具有操作简便，灵敏度高，选择性好，回收率稳定等特点，是进行ＭＣ测试及评价水产品安全性的可靠手段。

参考文献

１ＫＫｕｎｉｍｉｔｓｕ，ＳＹ０６ｈｉｚａｗａ，ＲＭａｌ吼Ｉｓ】【Ｉｉｍ８。ｅｔａ１．Ｃｈｍｉｓｔｒｙａｎｄｔｏｘｉ?ｅｏｌｏｌｇ＇ｙｏｉ＂ｃｙｌｉｅｈｅｐａｔａｐｅｔｉｄｅｔｏｘｉ珊．ｔｈｅｍｉｅｒｏｅｙｓｔｉｍｆｒｏｍｅｙａｎｏｂａｅｔｅ－血［Ｊ］．１－ｌｉｅｒｏｂｉｏｌＣｕｌｔＣｏｉｌ，１９９４，１（１０）：５．

２Ｒｌｔａｒａｄａ．Ｒｅｃｅｎｔｎｄｖａｎｅｅ８０ｆｔｏｘｉｃｃｙ蛐ｏｂ删ａｒｅｎ℃ｈ［Ｊ】．Ｊ．ｄＨｅａｌｔｈＳｅｉｅｌａｅｅ，１９９９，４５（３）：１５０—１６５．

３ＩＲＦａｌｃｏｎｅｒ．Ｔｏｘｉｃｃｙｌｍｄ旧吐ｅｒｉａｌｂｌｏｏｍｌ袖ｌｅｍｓｉｎＡｕｓｔｒａｌｉａｎ悟ｌｅｔｓ：ｒｉ５ｋ６ａｎｄｉｍｐａｃｔｓｏｎｈｕｍａｎｈｅａｌｔｈ［Ｊ］．Ｐｈｙｅｏｌｏｏａ，２００１，加（３）：２２８—２３３．

４ＰＶＺｉｍｂａ，ＬＫｈｏｏ。ＰＳＧａｕｎｔ，ｅｔａ１．ｃｏ曲舶ａｔｉ∞ｏｆｅ．ａｆｆｌｓｈ，ｌｅｔａ－ｌｕｒｕｓｐｕｎｅｔａｔ蚺（１ｌａｆｌｒｌｅ∞ｌｕｅ）。ｍｏｒｕｄｉｔｙｆｒｏｍｌｂｌｉｅｒｏｅｙｓｔｉｓｔｏ妇［ｊ］．Ｊ．０ｆＦｉｓｈ１）ｉ曲．ａｓｅｓ。２００１，２４（１）：４１—４７．

５ＰＳｂｔｏｈａｘｎｅｄ，ＷＷＣａｒｍｉｅｈａｅｌ．Ａ＾Ｈｕｓ∞ｉｎ．Ｆ，ｌ妇ｌａｌｉｏＩｌｏｆｍｉｃｒｏ－ｅｙｅ．ｉｎｓｉｎｔｈｅｆｒｅｓｈｗａｔｅｒｆｉｓｈ

０雠ｈ∞血ｕｉｌｏｔｉｅｔｔｓｉｎＩｌｔｔｌｔＥ｜洳鼬ｆａｒｍｅ，ｍｔａｉｎｉ．ｇａＭｉｅｒｏｅｙｓｔｉｓｂｌｏｏｍ［Ｊ］．Ｅｎｖｉｒｏｎ．＇ｒｏｘｉｃ，０１．，２００３（１８）：１３７—１４１．

６ＬＱＸｉｅ，ＰＸｉｅ，ＰＣｕｏｘ，ｅｌａ１．ｏｒ籼ｄｉｓｌｘｉｂｕｔｉｏｎａｎｄｂｉｏ。ｅｃｕｍｕｌａ－

ｔｉｏｌｌｏｆ

ｍｉｅｒｏｅｙｓｔｉｎｓｉｎｆｒ∞ｈｗａｔｅｒｆｉｓｈａｎｔ

ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔ１．ｏｐｈｉｅｌｅｖｅｌ８ｆｒｏｍｔｈｅｅｕｔｒ咄ｅｌａｋｅｃｈｌｌ０ＩＩｌＩ，ｃｈｉ腿［Ｊ】．Ｅｎｖｉｒｏｎ．＂ｒｏｘｉｅ０１．，２００５（２０）：２９３—３００．

７ＰＫｏｔａｋ，ＰＺｕｒａｗｄｌ，ＰＡｚｅｖｅｄｏ．Ｍｉｃｒｏｅｙｓｔｉｎ?ＬＲｅｏｎｅｅｎｔｒ址ｉｏｎｉｎ越Ｉ删ｃｆｏｏｄｗｅｂｅｏｍｐｓ蛐ｔｓｆｒｏｍｌａｋｅｓ《ｖａｔｙｉｌ唱ｔｒＤｐＩｌｌｉＣｓｔａｔｕｓ［Ｊ】．Ｃａｎ．Ｊ．ＦｉｓｈＡｑｕｓｔＳｅｉ．，１９９６（５３）：１９７４—１９８５．

８ＪｔｍＣｈｅｒｔ．ＰｉｎｇＸｉｅ，ＬｏｎｇｇｅｎＣ，ｕｏ，ｅｔａ１．＇ｌ＇ｉａ目ａｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｍｍｄ

ｓｅａｓｏｎａｌｄｙｎａｍｉｃｓｏｆｔｈｅｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｅｍｉｅｒｏｅｙｓｔｉｎｓ—Ｉ且ａｎｄ－ＲＲｉｎａｆｒｅｓｈｗａｔｅｒ∞ａｉｌ（Ｂｅｌｌｍｒａ嬲ｍ岫）ｆｒｏｍ＆ｌａｌ＿ｇｅｓｈａｌｌｏｗ，即恤讪－

ｉｃｌ如ｏｆｔｈｅｓｕｂｔｒｏｐｉｃａｌＣｈｉｎａ［Ｊ】．ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＰｏｌｌｕｔｉｏｎ，２００５（１３４）：４２３—４３０．

９５

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/8g2l.html