磁珠法提取核酸的3种样本处理方法

磁珠法提取核酸的3种样本处理方法

转自：洛阳吉恩特生物科技有限公司 磁珠法核酸提取实验室 以生物磁珠为载体提取核酸，所有反应是在液体体系中进行的，但生物样本多种多样，有液体也有固体，或者固液混合体，大多数生物样本在进行核酸提取纯化之前需要进行一定的前处理，液化、富集、除杂等都是常见的前处理方式。 一、液化

将固体样本转化为液体样本是最重要的样本前处理方法，固体样本是很难直接在试剂盒的作用下用于提取核酸的。固体样本跟杂质一样，会严重阻碍磁珠吸附核酸，并且耗损大量的磁珠位点，很难取得良好的提取效果。

常见的固体样本如植物组织、动物组织、泥土、浓痰等。

植物组织和动物组织，可剪取适量的样本，在研钵内快速研磨。研磨时如果需要保护RNA，可以采用液氮研磨的方式。如果不需要提取RNA，也可以加入裂解液或者生理盐水帮助研磨成匀浆状态。

泥土的处理方式主要是通过浸泡。因为从泥土中提取核酸，并非提取泥土本身，而是提取泥土中存在的微生物的核酸。使用生理盐水或者其他适当缓冲液体浸泡泥土，如果是较为干硬致密的泥土，浸泡前可以先碾碎成小颗粒，浸泡过程中可用小棒搅动帮助泥土分散。浸泡一段时间后，将泥浆用三层滤纸过滤，过滤所得的液体，即可用于磁珠法提取。

如浓痰、脓液等固液混合又较为黏腻的生物样本，可以先使用氢氧化钠液体进行碱解液化，再酸中和后，作为液体样本进行磁珠法提取。

以上方法处理固体样本，所得的液体，可能并不完全清澈透明，杂质还是相对较多的，如果必要，使用离心的方式，可以除去更多的杂质，但相对应该控制离心速度在10000r/min以下，否则核酸也会一起随杂质被离心下去。 二、富集

很多时候，用磁珠法提取的核酸都是微量或者痕量的样本，直接使用样本进行操作，所能得到的核酸很少，这就要求下游的检测试剂灵敏度很高，如果检测试剂灵敏度不足，在样本痕量的情况下，很可能检测不出，出现假阴性。所以对于微量样本和痕量样本，可以进行富集前处理。

有些时候，样本属于常量样本，但下游实验需求核酸量大，也需要对样本进

行富集，以便每个提取都能获得更多的核酸。

或者样本量巨大，无法直接使用试剂盒进行提取，也需要进行富集操作。 常见的富集方法包括蒸发和离心。

以土壤浸润水样本为例，浸泡大量的土壤样本，获得了500ml浸润水，显然无法将500ml浸润水作为样本直接提取。可以先将样本分装在两个30ml离心管内进行，12000r/min离心十分钟，弃去上清液后，用适量生理盐水重悬沉淀后，移入小离心管内，在80℃温度下蒸发液体至液体量少于300ul，即可用于磁珠法进行核酸提取。 三、除杂

很多生物样本中都含有大量的杂质，这些杂质有的可以在试剂盒核酸提取的过程中被洗涤液除去，但有些，很难通过后续的试剂盒洗涤直接除去，这就要求我们在样本前处理的时候，就直接先做初步的除杂。

以大量血液样本为例，常规定量血液样本（200ul以下），通常是不需要提前除杂的。但如果血液样本的量很大，如4-5ml/提取，就很难直接进行了，不仅样本的量超过常规试剂盒的容纳范围，杂质也非常多。

通常的做法是，提前加入红细胞裂解液，离心，弃去上层液体，裂解液重悬样本。

各种各样的样本前处理方法是很灵活多样的，根据下游需求不同，样本特性不同，通常是多种前处理方式组合应用，以达到最佳效果。 四、结语

总之，在磁珠法核酸提取的过程中，样本的前处理工作对整个提取结果会有至关重要的影响。当然，选取合适的磁珠，更能使提取结果事半功倍，吉恩特生物的01系列磁珠，半沉降时间可达15min以上，磁吸时间仅为15s左右，可为操作者带来不一样的磁珠操作体验。详情可参考文章《4个参数教你鉴别DNA提取磁珠》

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/8esw.html