基因扩增实验室室内质控SOP

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室内质量控制标准操作程序(SOP-22)

1目的：了解并控制实验室检测的精密度的变化

2适用范围：核酸扩增荧光定量检测，使用Line-Gene基因扩增仪实验室 3操作人：** ** 4操作：

4.1自制室内质控品：

a) 自制室内质控品来自临床收集的已知HBV阳性血清大约（1×10拷贝），

每收到一份冻存于-20℃。收集到约35ml时，取出样品，置室温复融。将各管倒入无菌带盖的小三角烧瓶中充分混匀。

b) 将以上的混合血清，以每管120ul，分装于0.5ml离心管内，分装若干

管。剩余血清根据废物处理及生物防护操作程序处理。

c) 将上述取约23管装一小袋，其余20管装一小袋。共分成若干小代。23

管一小袋置于-20℃冰箱，其余置于-70℃超低温冰箱保存，用完一小袋，就从-70℃转移1小袋到-20℃冰箱备用。

4.2基线测定及计算RCV：

在准备开展质控工作当月的第一天取上述23管中的三管复溶，随病人标本一起测定，第二天取两管复溶，随病人标本一起测定，以后每天随病人标本测定一管，20

_

天后计算各项目的测定结果的x

4-6

、s、cv此处的cv即Rcv。

(?x)2ncv?RCV的计算公式：

?xx?n_ 其中x为

s??(x?x)n?12s??x2?n?1s100% xRCV测定中所得23份结果的均值。Σ表示总和。

n表示结果的份数,n-1为自由度。 4.3绘制RCV图 a)

_ _ _ _ _ _

计算 x+ 2S、2S 、 x+ 3S、3S 并在质控图的纵坐标上标出 x、x- x- x±2S、

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_

x±3S

的位置，并将其具体值标在左侧标尺上。

_

线，用蓝笔画出 x±3S

_

b)用红线笔画出 x±2S

线，即成一张“空图”。

还应填齐图纸上方的各项，如：实验项目、质控品来源及批号、起止日期、主要仪器等，还应填上RCV中测定所得的X、S、CV，测定过程中的特殊情况，（附图2）。 4.4室内质控：

a)根据上述质控图，取一小袋上述血清作下月及以后的质控，每次实验时随病标本测定一管。

b)在图纸下方“日期”的上一行相应的日期栏内将“测定值”按原始记录填入，边填写边核对。注意数据顺序应严格按照实际操情况，不得颠倒。未做测定的天数在图上留出空格，因为这样可以真实反应情况，便于分析误差原因。

c)画出每个检测值所对应的图点。 4.5室内质控图的使用方法： 4.5.1描点 a)

_

图中x线为靶线

_

x±2s

_

为警告线，x±3s

，

为失控线。

对于同一批号的质控血清不论使用几个月，其质控图均不变化。只要将图纸上方的“起止日期”项填入每个月的实际起止日期即可。

b) 每天将该批号质控血清按有关规定程序复融随同病人的标本同时检测。将“日期”、“测定值”和“操作者”如实记录在图下方的相应位置，并按前面的方法画出图上的对应点，用直线将该点与前一天的点连接起来。 c)

_ 月底计算当月全部质控血清检测结果的 x

、s、cv，并进行图形分析和

小结，将质量控制图存入质控资料档案。 4.5.2图形分析：

失控的判断标准：将质控品随日常标本共同处理并将质控品结果如实记录 做好的RCV图中描点。

_

a)若结果在x±2S_

b)若结果在x±2S

线内，报告可发出。

_

线外和x±3S

线以内或出现连续6点以上在一侧等规律变

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化，应向有关负责人反映并积极寻找原因，但当天检测结果可以发出。 d)

_

若结果在x +3S

线以外，则为失控，应立即报告有关负责人讯速查找原因.

e) 并将失控情况、必要时复测标本，然后方可发报告。并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录登记。

4.5.3通过观察图形的规律变化进行误差分析，消除误差来源

a) 曲线漂移：提示有系统误差，准确度发生了一次性的向上或向下改变。这

种变化往往是由一个新的情况引起的。如更换不同批号的试剂，启用新批号的质控血清、操作规程人员的变换等。在找原因时应重点注意“漂移”前的发生了哪些变动性的因素。

b) 趋势性的变化：向下或向上的趋势表明准确度发生了渐渐的变化。这种变

化往往是由于一个逐渐改变的因素造成的。如质控血清的降解，试剂效价的降低等。

c) 连续多点分布在靶值同一则：目前，一般认为质控血清的检测结果连续6

天以上出现在靶值同一则，则应迅速查找原因，争取尽快使之回复围绕在靶值随机分布的状态。因为按照统计学的原理，由纯随机误差情况造成的这种可能性很小。连续6天以上出现在靶值同一则的可能性小于1.5%.因此凡出现连续6天以上出现在靶值同一则者均可能性存在非随机误差因素。如果与靶值偏离不大，不会给临床使用带来太大影响时，一般化验报告可以照常填发。

d) 其它规律性变化：（周期性等）。

4.5.4通过图形的资料对比进行误差分析，消除误差来源

_

a) 每个月的月底将该月的全部质控血清检测结果的x和

_

_

s

与该测定的x和

s

进

行比较。如x发生了变化，说明准确度发生了变化提示有非随机误差存在。如果当月s不同则表明检测的精密度发生了变化。 b)将使用同一批号的质控血清的CT

_

值的x和

s按月份列出。如果x逐月上升，

_

则应考虑保存不当造成的试剂效价降低或质控血清本身出现降解。如果各月份

_

x基本一致而

s 逐月加大，则主要提示常规工作的精密度下降，应重点从操作、

管理上找原因。

c)在数年中，把每个月的CV和失控规律列成表，可用作检测质量的历史回顾和

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趋势性分析。 4.6失控后的处理：

4.6.1分析原始数据及初步估计失控原因：发生失控时，对同批实验检测的全部 原始数据结合近期室内质控图和平时经验进行分析，估计失控原因的大体方向。 4.6.2对具体检测过程进行回顾性分析，分析有无特殊情况出现。

4.6.3通过选择性复查进一步分析判断失控原因，决定处理办法。选择性复查时应包括下述样品，以便一次性找出原因，及时发出报告: a)失控时使用的质控血清。

b)重新打开一瓶相同批号的质控血清。 c)失控时使用的标准品。

d)重新打开一瓶相同批号的标准品。

e) 少数几个病人标本（最好选择已知病情近期曾做过该项目的病人标本）通

过对复查结果的分析，找到失控原因，制定相应的解决方案，使实验室重新在控并将失控情况、原因和解决方案在档案中详细记录（见表22）。 4.7该程序的变动程序：本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：检验科主任、室技术负责人。 起草人

批准人 生效日期 年月日 ****医院临床检验中心SOP文件 实验室操作规程文件编号：版本：生效日期： 临床基因扩增实验室室内质量控制标准操作程序第5页共8页

表22临床基因扩增检验实验室PCR实验室室内质量控制失控原因及纠正措施记录

日期 检测项目 操作人 失控现象 原因分析 纠正结果 审核人

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附图2

室内质控记录图

检测项目：试剂厂家：试剂批号：主要仪器质控品来源

_ X：

SD： CV：起至日期年月日至年月日操作人：

3SD 2SD x 2SD 3SD 测定值 ****医院临床检验中心SOP文件 实验室操作规程文件编号：版本：生效日期： 临床基因扩增实验室室内质量控制标准操作程序第7页共8页

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