实验三 微生物生化需氧量(bod5)的测定

实验三 微生物生化需氧量（BOD5）的测定

实验目的：了解生化需氧量的测定方法。 实验材料：

（一）器材

恒温培养箱（20℃?1℃）、溶解氧瓶、三角瓶、移液管、滴定管、量筒、容量瓶、抽气泵等。

（二）材料准备

1．pH7.2磷酸盐溶液 称取21.75g化学纯K2HPO4，8.5g化学纯KH2PO4，33.4g化学纯Na2HPO4?7H2O，1.7g化学纯NH4Cl，溶解于蒸馏水中，并定容至1L，pH7.2。

2．MgSO4溶液 称取22.5g化学纯MgSO4?7H2O，溶于蒸馏水中，并定容至1L。 3．CaCl2溶液 称取27.5g化学纯CaCl2，溶于蒸馏水中，并定容至1L. 4．FeCl3溶液 称取0.25g化学纯FeCl3?6H2O，溶于蒸馏水中，并定容至1L。 5．稀释水的制备

在20L大玻璃瓶中加入18L蒸馏水，嚗气1~2天，使溶解氧量达8mg/L，达到饱和状态。使用前，每升水加入FeCl3溶液、FeCl3溶液、MgSO4溶液、磷酸缓冲液各1mL，混匀，调节pH至7.2，稀释水的BOD5 ?0.2mg/L。

6．接种稀释水

稀释水应含有能进行生物氧化的微生物，否则应在稀释水中加入一些生活污水，作为微生物接种。

取适量生活污水在20℃放置24～36h，上清液即为接种液，每升稀释水中加1～3mL接种液即为接种稀释水。

实验原理：

生化需氧量（biochemical oxygen demand）简称BOD，是指一升含有机物的水中，在有氧条件下，由于水中好气性微生物的作用，使有机物完全氧化时所需要的溶解氧量。一般用氧的毫克数表示（O2mg/L）。微生物分解有机物需要一定的时间，且分解速度随温度而异。目前国外均以20℃并在有充分溶解氧存在时，1L水培养5天所需要的氧作为指标，用BOD5表示。

BOD5的大小可以衡量水被污染的程度，并进而研究相应的处理方法。污水经过处理后，可根据BOD5的数值说明处理的效果。因此BOD5在污水处理中是具有指导意义的指标之一。

在实际测定时，只有某些天然水的溶解氧接近饱和。BOD5小于4mg/L可以直接培养测定，对于大部分污染水需要稀释后方可测定。稀释的目的是降低水样中有机物的浓度，使整个分解过程在有足够溶解氧的条件下进行。稀释度一般以经过5天培养后消耗的溶解氧占原有溶解氧的40%~70%为宜。

测定水样在培养前的溶解氧和在20℃?1℃培养5天后的溶解氧，两者之差即为生化需氧量(BOD5)。水中有机物越多，BOD5越大。但水中溶解氧有限，生化需氧量就会超过水样中所含有的溶解氧量。因此在培养之前，需要用含有一定营养成分和饱和溶解氧的水将水样稀释，然后再进行培养。

采用碘量法先测定稀释水样当天的溶解氧，另外几个同样稀释的水样，放在20℃培养箱中培养5天，然后再测定溶解氧。

实验内容：

1．水样的采集和预处理

(1) 采集水样于适当大小的玻璃瓶中，用玻璃塞塞紧，勿留有气泡。采样后，需在2h内测

定，否测，应在4℃或4℃以下保存，并应在采集后10天内测定。 (2) 用1mol/L的NaOH或HCl溶液调节pH为7.2。

(3) 取100mL待测水样于碘量瓶中，加入1mL ％的硫酸溶液，1mL10％的碘化钾溶液，摇匀；

以淀粉为指示剂，用标准的硫代硫酸钠溶液滴定。计算100mL水样所需硫代硫酸钠溶液的用量，推算

(4) 确定稀释倍数，稀释比根据水中有机物的含量来确定。较为清洁的水样不用稀释；污染

严重的水样，稀释100～1000倍；常规沉淀过的污水，稀释20～100倍；受污染的河水，稀释0～4倍、原则上以培养后减少的溶解氧占培养前的溶解氧的40％～70％为宜。 2. 稀释水样

一般同时做3~5种不同的稀释倍数，选择溶解氧减少在40％~70％之间的水样作为计算生化需氧量BOD5的依据。

根据确定的稀释倍数，用虹吸法把一定量的污水引入1L量筒中，再以虹吸法沿量筒管壁加入所需稀释水（接种稀释水）至1L，用下端带有橡皮板的玻璃上下轻轻搅动（不应产生气泡），轻轻混匀水样。

3．测量溶解氧

用虹吸法沿瓶壁将稀释的水样注满两个250mL的碘量瓶，盖上瓶塞。每一稀释度应设计两瓶，其中一瓶测定当日的溶解氧，另一瓶置于20℃培养箱，经5天培养，再测定水样的溶解氧。

4．空白对照

用虹吸法沿瓶壁将稀释水分别注满两个250mL的碘量瓶，盖上瓶塞。其中一瓶测定当日的溶解氧，另一瓶置于20℃培养箱，经5天培养，再测定水样的溶解氧。

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