酶标仪操作方法(修改)

黄曲霉毒素检测方法

一、实验材料

1、实验室用蒸馏水 2、色谱级甲醇 3、具塞锥瓶

4、用于萃取样品及收集萃取液的玻璃器皿 5、滤纸

6、可吸取50微升容量的移液器及一次性吸头 7、吸水纸

8、450nm的酶标仪 9、计时器

二、提取液制备

1、分别量取20ml蒸馏水至各锥形瓶。

2、分别量取80ml甲醇至各锥形瓶，震摇使之充分混匀。

三、样品的准备

1、称取50克样品和5.0克氯化钠至一有盖容器中。 2、加入100ml甲醇/水提取液。 3、盖好盖子高速搅拌1分钟。 4、静置2~3分钟，使样品沉淀。

5、用滤纸过滤10ml萃取液，收集到一个干净容器中。 6、取5ml萃取液，加入20ml水稀释。 7、过滤萃取液，待测。

四、检测程序

1、开始实验前要求试剂及样品萃取液达到室温。

2、取适量的孔条固定在微孔板架上，确定未使用的孔条与干燥剂一同放入密封袋中保存。 3、加入50微升的酶标记物到所有的微孔中。

4、加入50微升的标准品及样品到相应的孔中，注意使用一次性吸头防止交叉污染。 5、加入50微升抗体溶液到所有的微孔中，轻微震荡微孔板。 6、室温下孵育10分钟。

7、倒掉微孔中溶液，微孔中注满蒸馏水，然后倒掉，重复四次，共五次洗板。 8、最后一次清洗完后，倒掉微孔中溶液，然后翻转微孔板在吸水纸上拍干。 9、每孔中加入100微升的底物溶液。 10、室温下孵育10分钟。

11、每孔中加入100微升停止液。 12、用450 nm的酶标仪读吸光度值。

玉米赤酶烯酮检测方法

一、实验材料

1、实验室用蒸馏水 2、ACS级甲醇 3、100ml量筒

4、用于萃取样品及收集萃取液的玻璃器皿 5、滤纸

6、可吸取50微升容量的移液器及一次性吸头 7、吸水纸

8、450nm的酶标仪 9、计时器

二、提取液制备（80%甲醇/水）

1、分别量取20ml蒸馏水至各锥形瓶。

2、分别量取80ml甲醇至各锥形瓶，震摇使之充分混匀。

三、样品稀释液的准备（70%甲醇/水） 1、分别量取30ml蒸馏水至各锥形瓶。

2、分别量取70ml甲醇至各锥形瓶，震摇使之充分混匀。

四、样品的准备

1、称取50克样品并加入100ml 80%甲醇/水提取液与样品混合至一个有盖容器中。 2、盖好盖子剧烈震荡3分钟。 3、静置2~3分钟，使样品沉淀。

4、取样品上清液用70%甲醇/水溶液以1:50的比例稀释。 （例如取上清液100微升到4.9ml 70%甲醇/水中混匀测定）

五、检测程序

1、开始实验前要求试剂及样品萃取液达到室温。

2、取适量的孔条固定在微孔板架上，确定未使用的孔条与干燥剂一同放入密封袋中保存。 3、取与微孔条同等数量的混合孔，并将其固定在微孔板架上，确定未使用的孔条与干燥剂 一同放入密封袋中保存。

4、加入100微升的标准品或样品到相应的混合孔中。

5、用干净的吸头移取200微升的酶标物到所有的混合孔中。

6、用移液器吸入再推出小孔中的溶液，反复4到5次，以便进行混合，然后移取100微升的样品和酶标物的混合溶液到测试孔中。 7、室温下孵育10分钟。

8、倒掉微孔中溶液，微孔中注满蒸馏水，然后倒掉，重复四次，共五次洗板。 9、最后一次清洗完后，倒掉微孔中溶液，然后翻转微孔板在吸水纸上拍干。 10、每孔中加入100微升的底物溶液。

11、室温下孵育5分钟。(如果0标准的吸光度值低于1.2，也可孵育10分钟。) 12、每孔中加入100微升停止液。

13、用450 nm的酶标仪读取吸光度值。

赭曲霉毒素检测方法

一、实验材料

1、实验室用蒸馏水 2、色谱级甲醇 3、量筒

4、用于萃取样品及收集萃取液的玻璃器皿 5、滤纸

6、可吸取50微升容量的移液器及一次性吸头 7、吸水纸 8、洗瓶

9、450nm的酶标仪 10、计时器

二、样品的准备（稀释倍数5） 1、配置适量甲醇/水溶液（7 : 3），混合并储存于密闭容器中。

2、称取20克样品，量取100ml 70%的甲醇/水溶液到一个干净有盖容器中。 3、剧烈震荡3分钟。

4、静置2~3分钟，使样品沉淀。

5、用滤纸过滤15ml萃取液，收集到一个干净容器中。

三、清洗液的准备

1、取浓缩液20ml加入180ml蒸馏水。 2、将配好的清洗液转移至洗瓶中。

四、检测程序

1、开始实验前要求试剂及样品萃取液达到室温。

2、取适量的孔条固定在微孔板架上，确定未使用的孔条与干燥剂一同放入密封袋中保存。 3、加入100微升的样品及标准液到混合孔中。

4、用干净的吸头移取100微升的酶标物到所有的混合孔中。

5、用移液器吸入再推出小孔中的溶液，反复4到5次，以便进行混合，各孔移取100微升混合液至测试孔。 6、室温下孵育10分钟。

7、倒掉微孔中溶液，微孔中注满清洗液，然后倒掉，重复四次，共五次洗板。 8、最后一次清洗完后，倒掉微孔中溶液，然后翻转微孔板在吸水纸上拍干。 9、每孔中加入100微升的底物溶液。 10、室温下孵育10分钟。

11、每孔中加入100微升停止液。

12、用450 nm的酶标仪读取吸光度值。

呕吐毒素（脱氧雪腐镰刀菌烯醇）检测方法

一、实验材料

1、实验室用蒸馏水 2、100ml量筒

3、用于萃取样品及收集萃取液的玻璃器皿 4、滤纸

5、可吸取50微升容量的移液器及一次性吸头 6、吸水纸

7、450nm的酶标仪 8、计时器

二、样品的准备

1、称取20克样品，量取100ml 水到一有盖容器中。 2、剧烈震荡3分钟。

3、静置2~3分钟，使样品沉淀。

4、用滤纸过滤15ml萃取液，收集到一个干净容器中。

三、清洗液的准备

1、将清洗浓缩液倒入1L容积的容器中，加入蒸馏水。 2、将配好的清洗液转移至洗瓶中。

四、检测程序

1、开始实验前要求试剂及样品萃取液达到室温。

2、取适量的孔条固定在微孔板架上，确定未使用的孔条与干燥剂一同放入密封袋中保存。 3、加入50微升的酶标记物到微孔中。

4、加入50微升的标准品及样品到相应的孔中。

5、加入50微升抗体溶液到微孔中，轻微震荡微孔板。 6、室温下孵育10分钟。

7、倒掉微孔中溶液，微孔中注满清洗液，然后倒掉，重复四次，共五次洗板。 8、最后一次清洗完后，倒掉微孔中溶液，然后翻转微孔板在吸水纸上拍干。 9、每孔中加入100微升的底物溶液。 10、室温下孵育5分钟。

11、每孔中加入100微升停止液。

12、用450 nm的酶标仪读取吸光度值。

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