HPLC法测量山豆根和开喉剑喷雾剂中氧化苦 参碱含量

HPLC法测量山豆根和开喉剑喷雾剂中氧化

苦参碱含量

（贵州师范大学化学与材料学院，贵州 贵阳 550001）

摘要：以超声提取法提取山豆根与开喉剑中的氧化苦参碱为研究对象，并采用高效液相色谱测定其出锋面积，通过标准曲线方程计算出山豆根和开喉剑中氧化苦参碱的含量。甲醇-水（0.025％磷酸）（5:95）为流动相；检测波长：220nm；流速：1.0ml/min；进样量：10μl；柱温：40℃。结果表明：氧化苦参碱的HPLC进样量在10μg/ml-0.1μg/ml范围内与峰面积积分值呈良好线性关系（r=0.9995），标准偏差RSD=0.011，平均回收率为76.43%。本方法简便易行、精确度高、重复性好。适用于检测山豆根和中成药中氧化苦参碱的含量。 关键词：高效液相色谱法； 山豆根 ；开喉剑； 苦参碱

Determination of Oxymatrine in Vietnamese Sophora Root and open the larynx sword with high performance liquid chromatography

Linghu Changfa

(Chemistry and materials science, Guizhou Normal University, 550001 Guizhou Guiyang) Abstract: Extracted by ultrasonic extraction tonkinensis with open throat Sword oxymatrine for the study, and using high-performance liquid chromatographic determination of its front area, calculated by the standard curve equation tonkinensis and open throat sword in oxidation flavescensthe content of a base. Methanol - water (0.025%

phosphoric acid), (5:95) as mobile phase; detection wavelength: 220nm; flow rate: 1.0ml/min; injection volume: 10 μl; column temperature: 40 ° C. : Oxymatrine The HPLC injection volume in 10μg/ml-0.1μg/ml within the

integral value of the peak area showed a good linear relationship (r = 0.9995), the standard deviation (RSD) = 0.011, the average recovery was 76.43 %. This method is simple, high accuracy, good repeatability. Apply to detection oxymatrine tonkinensis and proprietary Chinese medicines in the content. Keywords: HPLC；Vietnamese Sophora Root；open the larynx sword oxymatrine

引言： 山豆根（Vietnamese Sophora Root）为双子叶植物纲豆科植物越南槐的干燥根及根茎。植物形态为灌木，高1～2m。生于石灰岩山地或岩石缝中。主产广西。秋季采制挖根，除去地上茎叶，晒干。根茎呈不规则结节状，顶端残留茎基或茎痕，下面生根数条。根长圆柱形，略弯曲，长10～35cm，直径0.3～1.5cm；表面棕色至棕黑色，有纵皱纹及横长皮孔。质坚硬，断面皮部淡

棕色，木部黄白色。微有豆腥气，味极苦。功能主治：清火解毒，消肿止痛。用于咽喉牙龈肿痛、肺热咳嗽烦渴、黄疸、热结便秘.化学成分分析 根含总生物碱约0.93%，其中苦参碱0.52%，氧化苦参碱0.35%, 以及微量的臭豆碱和甲基金雀花碱；并含槐果碱。黄酮类化合物有紫檀素和l-三叶豆高丽槐甙,后者经酶水解得l-高丽槐素,均为紫檀素类化合物，有抗癌作用，其作用甙比甙元强，右旋体比左旋体强。另含山豆根素、山豆根查耳酮、山豆根色烯素、山豆根色烯查耳酮、山豆根色烯素、山豆根色烯查耳酮、山豆根色满素、山豆根苯并二氢呋喃素、大豆素、2′,4′，7-三羟基-6,8-双(3- 甲基-2-丁烯)二氢黄酮、山豆根新色烯查耳酮、山豆根新色烯素及柒料木素；其所含酚性物质，水解得咖啡酸和长链醇其中以C26为主，占72.4%；此外，尚含羽扇豆醇、β-谷甾醇、维生素C和维生素B1。有报道，中性多糖由D-半乳糖和D-葡萄糖组成，其分子比为1:1。开喉剑是由贵州三力制药有限公司生产的用于肺胃蕴热所致的咽喉肿痛，口干口苦，牙龈肿痛以及口腔溃疡等疾病，氧化苦参碱其主要活性成分之一。本实验目的：采用现代HPLC技术提高氧化苦参碱的提取效率。 1 材料与方法 1.1

材料 山豆根产于广西桂林（新购），开喉剑产于贵州三力制药有限责任公司， 国药准字Z20026493。 1.2 仪器与试剂

仪器：超声器名为超声清洗机，上海跃进医用光学器械厂，型号：CQ-100B-ST型；高效液相色谱仪：LC2000D 编号20069911（色谱柱LUNA-5U-C18(2)-100A 规格：150*4.6mm 304930/27 OOF/4252/EO T2000P色谱工作站。）砂芯过滤器：FD/JH/JS 飞达公司。微孔滤膜 水相：规格∮50mm 孔径：0.45μm 有机相：规格∮50mm 孔径：0.45μm。聚偏氟乙烯微孔滤膜（F型）针头过滤器：规格∮13mm 孔径：0.45μm 上海兴亚净化材料厂。电子天平：HZY-A200 规格：max=200g e=10μg d=1mg

试剂：甲醇：天津科密欧化学试剂有限公司（HPLC） 三氯甲烷：成都市科龙化工试剂厂。分析纯（AR） 浓氨水：重庆川东化工有限公司化学试剂厂 分析纯（AR）磷酸：成都市科龙化工试剂厂。分析纯（AR）。 1.3 检测条件

液相色谱条件[1.8]：甲醇-水（0.025％磷酸）（5:95）为流动相，检测波长为210nm[3.7]，流速为1.0ml/min,柱温20-30℃，进样量10μL,理论板数约为2300. 色谱柱LUNA-5U-C18(2)-100A 规格：150*4.6mm 304930/27 OOF/4252/EO 和 T2000P色谱工作站。 1.4 方法

本实验采用三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（40:10:1）浸泡，并运用超声处理等手段进行提取。再用高效液相色谱法对提取物质的检测。并采用科学的计算手段进行计算，从而得出山豆根含有氧化苦参碱的含量。 2 提取

2.1 山豆根氧化苦参碱的提取

精密称定0.55-0.60g山豆根五份[2.3]，置于具塞锥形瓶中。精密加入50ml三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（40:10:1）密塞。称定重量。放置60分钟。超声处理 将上述五个锥形瓶和试液放入超声器中，设置功率为250W，频率为90Hz，处理40min，再称定重量。并用三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（40:10:1）补足减少的重量。摇匀，并用快速滤纸过滤。提取液处理 精密量取上述滤液10ml，置于圆底烧瓶中。将圆底烧瓶置于40℃温水中回收溶剂至浸膏状，加入甲醇约5ml使其溶解。转移至10ml容量瓶中加甲醇至刻度线，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，取滤液，即的样品提取液，贴好标签，密封待测。 2.2 中成药开喉剑中氧化苦参碱的提取

精密称定0.55-0.60g开喉剑五份[2.3]，置于具塞锥形瓶中。精密加入50ml三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（40:10:1）密塞。称定重量。放置60分钟。超声处理 将上述五个锥形瓶和试液放入超声器中，设置功率为250W，频率为90Hz，处理40min，再称定重量。并用三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（40:10:1）补足减少的重量。摇匀，并用快速滤纸过滤。提取液处理 精密量取上述滤液10ml，置于圆底烧瓶中。将圆底烧瓶置于40℃温水中回收溶剂至浸膏状，加入甲醇约5ml使其溶解。转移至10ml容量瓶中加甲醇至刻度线，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，取滤液，即的样品提取液，贴好标签，密封待测。 2.3 加样回收 [2 3.8]

精密称定适量山豆根三份并加入200μl标准液[2.3]，置于具塞锥形瓶中。精密 加入50ml三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（40:10:1）密塞。称定重量。放置60分钟。将上述五个锥形瓶和试液放入超声器中，设置功率为250W，频率为90Hz，处理40min，再称定重量。并用三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（40:10:1）补足减少的重量。摇匀，并用快速滤纸过滤。精密量取上述滤液10ml，置于圆底烧瓶中。将圆底烧瓶置于40℃温水中回收溶剂至浸膏状，加入甲醇约5ml使其溶解。转移至10ml容量瓶中加甲醇至刻度线，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，取滤液，即的样品提取液，贴好标签，密封待测。加样回收情况如表 3 标准工作曲线

精确称取氧化苦参碱对照品适量，并用甲醇定容稀释成1ml含1.5mg的稀释液 （此步为老师完成）由于氧化苦参碱在10μg/ml-0.1μg/ml范围呈线性关系[1,2.9]，故将此溶液分别稀释成浓度为3.06μg/ml、1.53μg/ml、0.48μg/ml、0.30μg/ml、0.15μg/ml. 浓度为3.06μg/ml的标准液出峰如图 1 所示。 以甲醇-水（0.025％磷酸）（5:95）为流动相，检测波长为210nm，流速为1.0ml/min,柱温20-30℃，理论板数约为2300.进样量10μl。线性回归方程为y=1560.7x-212.25 r=0.9995

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