植物组织中丙二醛含量的测定
更新时间:2024-05-15 08:39:01 阅读量: 综合文库 文档下载
植物组织中丙二醛含量的测定
一、原理
植物器官衰老或在逆境下遭受伤害,往往发生膜脂过氧化作用,丙二醛(malondialdehydeMDA)是膜脂过氧化作用的产物之一,其含量可以反映植物遭受逆境伤害的程度。
丙二醛在酸性和高温条件,可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应,形成在532nm波长处有最大光吸收的有色三甲基复合物,该复合物的吸光系数为155????????/(??·????),并且在600nm处有最小光吸收。可按公式:
??532-??600=155000×??×??①
算出MDA浓度??(????????/??),进一步算出单位质量组织中 MDA 含量(????????/??)。式中A532和A600分别表示532nm和600nm处的吸光度值。??为比色杯厚度(???? )。
需要指出的是,植物组织中糖类物质对MDA-TBA反应有干扰作用。为消除这种干扰,经试验,可用下列公式消除由蔗糖引起的误差。
??(????????/??)=6.45(??532-??600)?0.56??450 ②
式中: A450、A532和A600分别表示450nm、532nm 和600nm波长下的吸光度值。用公式②算出植物样品提取液中MDA的浓度后,进一步算出其在植物组织中的含量。 二、实验材料、试剂与仪器设备 (一)实验材料 海滨锦葵叶片。 (二)试剂
1、5%三氯乙酸(TCA)。
2、0.67%(W/V)硫代巴比妥酸(TBA)溶液:称取硫代巴比妥酸0.67g溶于10%TCA溶解并用其定容至l00mL 。 (三)仪器设备
研钵,恒温水浴锅,分光光度计,冷冻离心机,天平,刻度试管,可调加样器 三、实验步骤
1.MDA的提取:称取植物材料0.5g,剪碎,加入5%TCA5mL,研磨至匀浆,匀浆在3000r/min离心10min,上清液为样品提取液。
2. 显色反应和测定:吸取离心的上清液2mL,加入2 mL0.67%TBA溶液,摇匀。将试管放入沸水浴中煮沸10min(自试管内溶液中出现小气泡开始计时),取出试管并冷却,3000r/min再离心15 min。
3.取上清液并量其体积。以0.67%TBA 溶液为空白测定532nm、600nm和450nm处的吸光
度值,并按公式②算出MDA浓度。 注意:
1.可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm也有吸收(最大吸收在450 nm),当植物处于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高,必要时要排除可溶性糖的干扰。 2.低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应,当植物组织中铁离子浓度过低时应补充Fe3+(最终浓度为0.5 nmol · L-1)
3.如待测液浑浊,可适当增加离心力及时间,最好使用低温离心机离心。
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