实验样品采集运输保存方法

1. RNA实验样品采集、保存方法 1.1 使用范围及样品量

类别：Microarray Service；Sequencing Service; PCR Array& PCR Service 样本量： 样本 动物组织样品

哺乳动物培养细胞样品（悬浮细胞） 哺乳动物培养细胞样品（贴壁细胞） 植物组织样品

样本量 50-100mg 1*107个 15cm2

100mg-1g，根据植物不同部位的组织决定组织需要量，尽可能多些，但不必超过1g

1.2 动物组织样品 1.2.1 新鲜组织样品 A. 使用RNAlater试剂

取新鲜组织（注：动物死亡后尽快在10min内取材），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，所用组织必须切至厚度在0.5cm一下，然后放入装有5倍体积RNAlater的离心管（或冻存管）中。

4度孵育过夜，此时样品管需要横臵以便组织块充分接触到RNAlater，然后转入-20中保存，样品在-20不会冻结，但溶液中可能会有一些晶体出现，这并不影响后续的RNA抽提。

B. 使用Trizol试剂

取新鲜组织（1min以内），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，每50-100mg组织加入1ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品，最好冰上进行操作。

匀浆的裂解液4度短期保存（1month），-20或者-70度长期保存。 1.2.2 冻存组织

生物体死亡后尽快（10min以内）切取新鲜组织，并以PBS或生理盐水清洗干净切成小块；培养液倒入离心管中，离心沉淀细胞，弃去上清液。

细胞沉淀（1*107个）中加入1ml Trizol裂解液 反复吸打几次后，目视可见细胞层溶液完全 -70保存

1.3 贴壁细胞

从培养容器中吸出并弃去培养液

培养瓶直接加入Trizol试剂，Trizol用量与细胞贴壁面积有关，15cm2细胞贴壁面积加入1mlTrizol。

反复吸打几次后，目视可见细胞层溶解完全。 -70度保存。 1.4 植物组织样品

准确取得所需新鲜组织后，如有必要可用PBS清洗干净，将所用组织切碎，装入冻存管中或者用锡箔包裹好。

立即投入液氮中保存。

2.血液类样品采集、保存方法 2.1 适用范围及样品量

全血/血细胞：Microarray Service；Sequencing Service; PCR Array& PCR Service 血清/血浆：Microarray Service；PCR Array& PCR Service 样本量

样本 全血 血浆 血清

样本量

1-2ml （即每份样品2-4管） 1-2ml （即每份样品2-4管） 1-2ml （即每份样品2-4管）

在样品保存及转移过程中，应避免反复冻融样品

一般建议用新鲜的血液标本进行试验，如果标本已经保存较长时间，请先联系技术部门确认样本是否适合进行实验。

2.2 全血

采集好全血，转移至单独的冻存管中，按照每400-500ul/管分装。 短期保存可以再-20度或者-70度冰箱；长期保存放入液氮。 2.3 血浆

使用抗凝管采集全血，并尽快进行血浆分离：1000g 离心10min，分离血浆和细胞组分（抗凝剂一定不能是肝素）

将采集好的血浆转移至单独的冻存管中，按照每400-500ul/管分装。 短期保存可以再-20度或者-70度冰箱；长期保存放入液氮。 2.4 血清

使用凝血管采集全血，采血后两小时内分离血清；

采血后轻轻倒转采血管混合4-5次，直立臵于室温待血液完全凝固，1000g离心10min，分离血清。

将采集好的血清转移至单独的冻存管，按照每400-500ul/管分装。 短期保存可以再-20度或者-70度冰箱；长期保存放入液氮。 2.5从全血中提取白细胞 2.5.1 抗凝血收集

取无菌的15ml离心管一只，首先用EDTA或者柠檬酸钠溶液充分吹打管壁，使离心管壁完全接触到该溶液，而后在管底留下少许该溶液（200ul左右）收集5ml全血后迅速用枪混匀或用手指拨动离心管底部混匀。防止部分血液凝固。

2.5.2 全血白细胞分离（以3ml抗凝血为例说明）

向一只15ml离心管中加入3ml抗凝血，而后加入9ml红细胞裂解液。盖紧管盖，温柔的颠倒混匀数下，不要剧烈震荡

将离心管臵于室温放臵10min 将离心管以2500g 离心5min

弃上清，尽可能将上清吸净，勿吸到管底白色斑块细胞

弃去上清后在管底出现可见的白色斑块，此斑块为富集的白细胞。如果裂解不完全加入1mlPBS缓冲液重悬，然后重复第一步

充分裂解后，加入1mlPBS缓冲液清洗一次 2500g离心5min

弃上清，可获得血液样品中全部白细胞的80%以上，而后可加入适量的Trizol，用移液枪充分吹打，混匀，直至出现清亮不粘稠的液体。

而后可以将以上的Trizol试剂存在生物冰（0-4度）寄送，或者直接干冰寄送。

3.DNA实验样品采集、保存方法 3.1 适用范围及样品量

适用范围：Microarray Service；Sequencing Service; PCR Service

样品量

样本 细胞 组织

3.2 悬浮细胞

约1*107个细胞，低速离心收集，弃去培养液； 加入2-5ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中； 低速离心沉淀细胞，弃去PBS； 放入-70度冰箱保存。

对于ChIP-chip实验为了获得理想结果，建议根据下述方法处理及保存悬浮细胞样品 取107个悬浮细胞低速离心，用10ml培养基将细胞沉淀重悬于50ml离心管中； 加入270ul 37%的甲醛，轻轻混匀，室温孵育10min；该步骤最好在通风橱完成 加入1ml 1.25M的甘氨酸，轻轻混匀，室温孵育5min，中和甲醛； 2000g离心5min，弃上清，用预冷的 PBS/EDTA 洗细胞两遍 2000g 离心5min，弃上清； 收集到的样品-80度冻存。 3.3 贴壁细胞

约1*107个贴壁细胞，胰酶消化；

加入PBS悬浮细胞，低速离心收集，弃去液体； 加入2-5 ml PBS 悬浮细胞，转入小离心管中； 低速离心沉淀细胞，弃去PBS 放入-70度冰箱保存。

对于ChIP-chip实验为了获得理想结果，建议根据下述方法处理及保存贴壁细胞样品 3.4组织

采集新鲜组织（生物体死亡后10min内取材并保存好） 组织块以PBS或生理盐水清洗干净，切为小块 放入液氮或-70度冰箱保存

4.蛋白实验样品采集、保存方法

样本量 1*107个 50-100mg

4.1 适用范围及样品量

适用范围：Microarray Service Other Service 样本量：

样本 血清和血浆 细胞 组织

4.2 血清和血浆

采集新鲜血液，分离血清或血浆，放入-20度或者-70度冰箱保存 4.3悬浮细胞

约1*107个细胞，低速离心收集，弃去培养液； 加入2-5ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中； 低速离心沉淀细胞，弃去PBS； 放入-70度冰箱保存。 4.4 贴壁细胞

约1*107个贴壁细胞，胰酶消化；

加入PBS悬浮细胞，低速离心收集，弃去液体； 加入2-5 ml PBS 悬浮细胞，转入小离心管中； 低速离心沉淀细胞，弃去PBS 放入-70度冰箱保存。 4.5 组织

采集新鲜组织（生物体死亡后10min内取材并保存好） 组织块以PBS或生理盐水清洗干净，切为小块 放入液氮或-70度冰箱保存

5. 样品保存和运输 5.1 注意事项

将收集的各类样品用冻存管或离心管装好，保存在低温冰箱或者液氮中。

所使用的1.5ml冻存管或离心管、枪头等必须高温灭菌处理，装好样品后管口需要以封

样本量 100-200ul 107个 50-100mg

口膜封好。

注意已保存的样品不要反复冻融。 5.2 干冰运输

根据干冰量准备大小适当的泡沫盒，在其中放入干冰（需要10公斤，至少为8公斤）和标本（用塑料袋或者塑胶手套装好），盒子内的空隙用旧报纸塞满，以防干冰挥发后有液体流出。

泡沫盒须选择较厚的，以免在运输过程中破碎导致样品丢失，分别用封箱带密封。最后在外面套上一个纸盒子，也要用胶带密封。

5.3冰袋运输

保存在RNAlater中的组织样本；

保存于Trizol中的细胞样本或经过匀浆的组织样本在短期（5 day）可使用冰袋运输。 5.4 液氮运输

冻存组织需要干冰或液氮运输。液氮无法快递，适合市内运输。 5.5 常温运输

本市内细胞样品也可以直接常温运送，运送时在培养瓶中装满培养液并以封口膜封口，然而某些实验条件中包含时间限制，建议冻存后运输。

5.6样品运输注意事项

打包好的样品交于快递公司，不提及干冰等字样 快递寄出，将快递单号告知销售，以便跟踪快递进程

务必在周日、周一、周二寄出快递，以免到达上海的时间是周末，公司无法查收。

口膜封好。

注意已保存的样品不要反复冻融。 5.2 干冰运输

根据干冰量准备大小适当的泡沫盒，在其中放入干冰（需要10公斤，至少为8公斤）和标本（用塑料袋或者塑胶手套装好），盒子内的空隙用旧报纸塞满，以防干冰挥发后有液体流出。

泡沫盒须选择较厚的，以免在运输过程中破碎导致样品丢失，分别用封箱带密封。最后在外面套上一个纸盒子，也要用胶带密封。

5.3冰袋运输

保存在RNAlater中的组织样本；

保存于Trizol中的细胞样本或经过匀浆的组织样本在短期（5 day）可使用冰袋运输。 5.4 液氮运输

冻存组织需要干冰或液氮运输。液氮无法快递，适合市内运输。 5.5 常温运输

本市内细胞样品也可以直接常温运送，运送时在培养瓶中装满培养液并以封口膜封口，然而某些实验条件中包含时间限制，建议冻存后运输。

5.6样品运输注意事项

打包好的样品交于快递公司，不提及干冰等字样 快递寄出，将快递单号告知销售，以便跟踪快递进程

务必在周日、周一、周二寄出快递，以免到达上海的时间是周末，公司无法查收。

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