精选人教版高中生物选修一专题2课题1微生物的实验室培养教学案含

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微生物的实验室培养

1.培养基中需含有碳源、氮源、水和无机盐等营养物质。

2．消毒的目的是杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，灭菌则是杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。

3．实验室常用煮沸消毒法、巴氏消毒法和使用紫外线或化学药剂进行消毒，常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌等。

4．固体培养基的配制过程为：计算―→称量―→溶化―→灭菌―→倒平板。 5．微生物接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。 6．长期保存菌种可以采用甘油管藏法。

一、培养基

1．概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。

2．种类：(按物理性质分)

3．营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。

二、无菌技术

1．获取纯净培养物的方法

获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，具体操作如下： (1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 (2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 (3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 (4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 2．消毒和灭菌 (1)概念：[填表] 比较项目 理化因素的作用强度 消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭 ..

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消毒 灭菌 较为温和 强烈 物体表面或内部的部分微生物 物体内外所有的微生物 不能 能 (2)常用方法：[连线]

三、大肠杆菌的纯化培养 1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 (1)操作步骤：

计算→称量→溶化→灭菌→倒平板 (2)倒平板的方法及注意事项：

①请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。 ②甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。 ③丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。 2．纯化大肠杆菌

(1)纯化原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。

.(2)接种方法：

①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

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(3)培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37_℃恒温箱中，培养12.h和24.h后，分别观察、记录。

四、菌种的保存[连线]

1．不同培养基的具体配方不同，但一般都含(..) A．碳源、磷酸盐和维生素 B．氮源和维生素

C．水、碳源、氮源和无机盐 D．碳元素、氧元素、氢元素、氮元素

解析：选C.培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还应考虑pH、特殊营养物质及O2等条件。

2．获得纯净培养物的关键是(..)

A．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌 B．接种纯种细菌 C.适宜环境条件下培养 D．防止外来杂菌的入侵

解析：选D.获得纯净培养物的关键是防止外来微生物的污染。 3．下列关于消毒和灭菌方法的选择，对应错误的是(..) A．培养基——高压蒸汽灭菌 B．牛奶——煮沸消毒 C．接种环——灼烧灭菌 D．实验者双手——化学消毒

解析：选B.对牛奶应采用巴氏消毒法进行消毒。 4．下列叙述错误的是(..)

A．右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放在酒精灯火焰附近

B．倒平板整个过程应在酒精灯火焰旁进行

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C．打开培养皿的皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖

D．为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置

解析：选C.C项应是用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全打开，以防杂菌污染。

5．下列有关稀释涂布平板法的叙述，错误的是(..) A．首先将菌悬液进行一系列的梯度稀释

B．然后将不同稀释度的菌悬液分别涂布到琼脂固体培养基的表面 C．在适宜条件下培养

D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落

解析：选D.稀释涂布平板法是将菌悬液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌悬液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养。只有在稀释度足够高的菌悬液里，聚集在一起的微生物才能被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个的菌落。

核心要点

1．培养基配制的原则

(1)目的要明确：不同的微生物需求不同，根据培养目的进行配制。 (2)营养要协调：营养物质的浓度和比例要适宜。营养物质浓度过低不能满足微生物营养需要，过高对微生物的生长有抑制作用。

(3)pH要适宜：各种微生物适宜生长的pH范围不同，如细菌的适宜pH约为6.5～7.5、放线菌的适宜pH约为7.5～8.5、真菌的适宜pH约为5.0～6.0。为维持pH的相对恒定，可在培养基中加入缓冲剂，常用的缓冲剂是磷酸氢二钾—磷酸二氢钾。

2．培养基的成分 营养物质 定义 凡能提供碳元素的物质 作用 构成生物体细胞的物主要来源 无机碳源：CO2、一

| 培养基及无菌技术

碳源 质和一些代谢产物，有NaHCO3等；有机碳些也是异养生物的能..

源：糖类、脂肪酸、..

源物质 花生粉饼、石油等 无机氮源：N2、NH3、氮源 凡能提供氮元素的物质 合成蛋白质、核酸以及铵盐、硝酸盐等；含氮的代谢产物 有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨等 生长因子 生长必不可少的微量有机物 是酶和核酸的组成成分 不仅是优良的溶剂，而维生素、氨基酸、碱基等 培养基、空气、代谢产物 水 — 且可维持生物大分子结构的稳定 为微生物提供除无机盐 碳、氮以外的各种重要元素，包括大是细胞的组成成分、生理调节物质、某些化能自养菌的能源，酶的激无机化合物 量元素和微量元素 活剂等 [名师点拨].几种微生物的营养和能量来源

微生物 蓝藻 硝化细菌 根瘤菌 大肠杆菌 3．几种常用灭菌和消毒方法的比较 灭菌和消毒种类 主要方法 应用范围 微生物接种工具，如接种环、灼烧灭菌 酒精灯火焰灼烧 接种针或其他金属用具等，接种过程中的试管口或瓶口等 干热灭菌 干热灭菌箱160～170.℃加热1～玻璃器皿(如吸管、培养皿碳源 CO2 CO2 糖类等有机物 糖类、蛋白质等有机物 氮源 －NH＋4、NO3等 能源 光能 NH3的氧化 有机物 有机物 NH3 N2 蛋白质等 ..

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2.h 等)、金属用具等凡不适宜用其他方法灭菌而又能耐高温的物品 高压蒸汽灭菌 煮沸消毒法 巴氏消毒法 紫外线消毒 化学药物消毒 100.kPa、121.℃维持15～30.min 培养基及多种器材、物品 100.℃煮沸5～6.min 70～75.℃煮30.min或80.℃煮15.min 30.W紫外灯照射30.min 家庭餐具等生活用品的消毒 牛奶、啤酒、果酒和酱油等不宜进行高温灭菌的液体 接种室、接种箱、超净工作台 用于皮肤、伤口、动植物组织表面消毒和空气、手术器械、塑料或玻璃器皿等的消毒 用体积分数为70%～75%的酒精、碘酒涂抹，来苏尔喷洒等 [题组冲关]

1．下列对灭菌和消毒的理解，错误的是(..)

A．灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子 B．消毒和灭菌实质上是完全相同的 C．接种环用灼烧法灭菌

D．常用灭菌方法有灼烧灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法

解析：选B.消毒是使用较为温和的物理或化学方法，仅杀死物体表面或内部一部分微生物，不包括芽孢和孢子。灭菌则是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。

2．下表是某微生物培养基的配方。请分析回答下列问题：

编号 成分 含量 ① (NH4)2SO4 0.4.g ② KH2PO4 4.0.g ③ FeSO4 ④ CaCl2 ⑤ H2O 0.5.g 0.5.g 100.mL (1)从培养基的营养成分看，此培养基可用来培养的微生物其同化作用类型是..

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________________。利用该培养基培养微生物时，微生物所需要的碳源来自____________。

(2)此表中含有的微生物的营养成分包括____________。

(3)若除去该培养基中的①后再加入不含氮元素的有机物，则此培养基可培养的微生物种类是__________________________。

(4)培养基若加入氨基酸，则它可充当的营养成分是_______________________________。

(5)若要观察微生物的菌落特点，培养基中还应添加的成分是____________________。

解析：(1)从培养基的成分看，该培养基无有机物，因此可以培养自养型微生物，微生物所需的碳源只能由空气中的CO2提供。(2)培养基中的成分包括微生物需要的氮源、无机盐和H2O。(3)培养基中的①是该培养基中唯一的氮源，去掉后则成为无氮培养基，可用于培养自生固氮微生物，因为自生固氮微生物可以利用大气中的N2作为氮源。(4)在培养基中加入氨基酸，可以为微生物提供碳源、氮源和特殊营养。(5)微生物的菌落需要在固体培养基的表面生长，因此培养基中需要添加凝固剂(琼脂)，使液体培养基凝固成固体培养基。

答案：(1)自养型.空气中的CO2.(2)H2O、无机盐、氮源.(3)自生固氮微生物.(4)碳源、氮源和特殊营养.(5)凝固剂(琼脂)

核心要点二

1．操作步骤

| 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

2．倒平板操作的注意事项

(1)培养基要冷却到50.℃左右时开始倒平板。温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。

(2)要使锥形瓶的瓶口通过酒精灯火焰。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污

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染培养基。

(3)倒平板时，要用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开，以免杂菌污染培养基。

(4)平板冷凝后，要将平板倒置。因为平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，培养基表面的温度也较高，平板倒置后，既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

(5)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，那么这个平板不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。

(6)整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。

[题组冲关]

3．下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是(..) A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯 C．加热溶化琼脂时应不断用玻璃棒搅拌 D．待培养基冷却至50.℃左右时倒平板

解析：选A.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，其顺序不能颠倒。牛肉膏容易吸潮，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。在溶化时，加入琼脂后应不断用玻璃棒搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。待培养基冷却至50.℃左右，并且培养基处于溶化状态时开始倒平板。

4．下列有关倒平板操作的叙述，错误的是(..) A．将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B．使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰 C．将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌面上 D．等待平板冷却凝固后需要倒过来放置

解析：选C.整个倒平板过程要防止外来杂菌的入侵，因此灭过菌的培养皿应放在火焰旁，打开的锥形瓶瓶口应迅速通过火焰，培养皿应打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不能将培养皿盖完全打开，等待平板冷却凝固后需要倒过来放置。

核心要点三

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| 纯化大肠杆菌

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1．平板划线法 (1)操作步骤

(2)注意事项

①第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环。

②灼烧接种环之后，要等其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。 ③在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样才能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

④划线时最后一区域不要与第一区域相连。

⑤划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。 (3)平板划线操作中几次灼烧接种环的目的 项目 第一次划线前灼烧 避免接种环上可能存目的 在的微生物污染培养物 2．稀释涂布平板法

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每次划线前灼烧 杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种均来自上次划线的末端 划线结束灼烧 杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者 ..

(1)操作步骤 ①系列稀释操作：

a．将分别盛有9.mL水的6支试管灭菌，并按101～106的顺序编号。 b．用移液管吸取1.mL培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸3次，使菌液与水充分混匀。

c．从101倍稀释的试管中吸取1.mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复b步的混匀操作。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。

②涂布平板操作：

(2)注意事项

①每支试管及其中的9.mL水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离酒精灯火焰1～2.cm处。

②涂布器用体积分数为70%的酒精消毒，取出时，让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃。

③不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。 ④酒精灯与培养皿距离要合适，移液管管头不要接触任何物体。 [名师点拨].平板划线法和稀释涂布平板法的比较

(1)单细胞菌落的获得：利用平板划线法接种时，单细胞菌落从后划线的区域挑取；利用稀释涂布平板法接种时，只有合适的稀释度才能得到单细胞菌落。

.(2)两种接种方法的应用：两种方法都能将微生物分散到固体培养基表面，以获得单细胞菌落，达到分离纯化微生物的目的；稀释涂布平板法还能对微生物进行计数，而平板划线法不能用于微生物的计数。

3．实验结果分析与评价

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(1)未接种的培养基表面若有菌落生长，说明培养基被污染；若无，则说明未被污染。

(2)在接种大肠杆菌的培养基上可观察到独立的菌落。有光滑型菌落，菌落边缘整齐，表面有光泽，湿润、光滑、呈灰色；也有粗糙型菌落，菌落扁平，干涩、边缘不整齐；还有黏液型菌落，为含荚膜菌的菌落。

(3)培养12.h和24.h，菌落大小不同，培养24.h，菌落大，灰色深，光泽度强。

(4)若在培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能是菌液不纯、混入其他杂菌或在实验操作过程中被杂菌污染。

[题组冲关]

5．下列关于平板划线操作的叙述，正确的是(..)

A．使用已灭菌的接种环、培养皿，在操作过程中不需要再灭菌

B．打开含菌种的试管，需通过酒精灯火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞 C．将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可 D．最后将平板倒置，放在培养箱中培养

解析：选D.在平板划线时，已灭过菌的接种环在每次划线后，必须用灼烧灭菌法灭菌，以杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种；盛有菌种的试管在打开或重新塞棉塞前，都需将试管口通过酒精灯火焰灼烧灭菌；在平板内划三至五条平行线后应盖上皿盖，并灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域划线，并按此操作继续往三、四、五区域划线；接种完成后，需将平板倒置放入培养箱，以防培养皿皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

6．(全国卷Ⅲ)某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：

(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用________对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯

度

稀

释

的

理

由

是

________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

..

..

(2)推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有____________________

和

________________________________________________________________________。

分离纯化时应挑选出________________的菌落作为候选菌。

(3)乳酸菌在－20.℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的____________(填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”)。

解析：(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释，这样既可避免杂菌污染，又可将乳酸菌分散成单个细胞，以便在培养基表面形成单个菌落。(2)乳酸的积累影响乳酸菌的增殖，加入碳酸钙可以中和乳酸菌代谢(无氧呼吸)过程中产生的乳酸，另外，乳酸和碳酸钙反应，进而导致碳酸钙分解形成透明圈，有利于乳酸菌的鉴别和分离。(3)对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。在3.mL的甘油瓶中，装入1.mL甘油后灭菌。将1.mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在－20.℃的冷冻箱中保存。

答案：(1)无菌水.泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落.(2)鉴别乳酸菌.中和产生的乳酸(或酸).具有透明圈.(3)甘油

[随堂基础巩固].

1．下列关于培养基的说法，正确的是(..)

A．任何培养基都必须含有碳源、氮源、矿质元素、水及生长因子 B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基 C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基 D．配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例

解析：选D.不同微生物对营养物质的需求不同，如自养微生物的培养基不需要加碳源，自生固氮菌的培养基不需要加氮源。按不同的分类标准，培养基可有不同的种类和作用，其中固体培养基是在液体培养基里加入琼脂等凝固剂配制而成的。配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例。

2．下列操作与消毒灭菌无关的是(..)

..

..

A．接种前用酒精灯火焰灼烧接种环 B．接种前用酒精擦拭双手 C．将平板倒置，放入培养箱中培养 D．接种在酒精灯的火焰旁完成

解析：选C.接种用具、器皿、空气中都存在大量微生物，必须严格地消毒灭菌。A、B、D三项都是实验操作过程中消毒或灭菌的措施。将平板倒置，放入培养箱中培养与灭菌无关。

3．采用干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等几种方法，可分别杀死哪些部位的杂菌(..)

A．接种环、吸管、培养基、接种室 B．吸管、接种环、培养基、接种箱 C．培养基、吸管、接种环、接种箱 D．培养皿、吸管、培养基、双手

解析：选B.干热灭菌是将灭菌物品放入干热灭菌箱内，在160～170.℃下加热1～2.h，适用于耐高温且需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等；灼烧灭菌是利用酒精灯火焰的充分燃烧层灭菌，如接种针、接种环等；高压蒸汽灭菌用高压蒸汽灭菌锅，一般在压力为100.kPa，温度为121.℃的条件下，维持15～30.min，主要用于培养基灭菌；紫外线照射适用于物体表面灭菌和空气灭菌，如接种室、接种箱、超净工作台等，使用前用紫外线照射约30.min。

4．不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述，错误的是(..)

A．氮源物质为该微生物提供必要的氮元素 B．碳源物质也是该微生物的能源物质 C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质 D．水是该微生物的营养要素之一

解析：选B.由题干以CO2为唯一碳源可知，该微生物可以利用CO2合成有机物，CO2不能为微生物提供能量，其能源来自光能或氧化无机物释放出的化学能。

5．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37.℃恒温箱的目的是(..) A．对比观察培养基有没有被微生物利用 B．对比分析培养基是否被杂菌污染

..

..

C．没必要放入未接种的培养基 D．为了下次接种时再使用

解析：选B.对未接种的培养基进行培养，起到对照作用，可确定培养基是否被杂菌污染。

6．下列有关平板划线操作的描述，错误的是(..) A．将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红 B．接种环在平板上划线的位置是随机的

C．在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过酒精灯火焰 D．最后一区的划线不能与第一区相连

解析：选B.接种环在平板上划线的位置并不是随机的：将沾有菌种的接种环伸入平板内，划三至五条平行线后应盖上皿盖，并灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线，重复以上操作，在三、四、五区域内划线。

7．图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，回答相关问题：

(1)图甲是利用____________法进行微生物接种，图乙是利用____________法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是________和________；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是____________和酒精消毒。

(2)平板划线时，为保证微生物的数目随划线次数的增加而逐步减少，每次划线都要从______________________开始，平板划线结束后，最后一次划的线不能与第一次划的线________。

(3)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？_______________________________________________________。

(4)下图是接种后培养的效果图解，其接种方法是______(填“图甲”或“图乙”)。

(5)假设用图乙所示方法接种培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能

..

..

的原因是什么？

________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

解析：(1)图甲和图乙分别是平板划线法和稀释涂布平板法进行微生物接种，这两种方法所用的接种工具分别是接种环和涂布器。(2)平板划线时，每次划线前都要从上一次划线的末端开始，最后一次划线不能与第一次划线相连。(3)由于在酒精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接种常在火焰附近进行。(4)培养基上的菌落分布均匀，接种方法为稀释涂布平板法。(5)采用稀释涂布平板法进行菌种分离时，稀释度要足够高，否则会使微生物不能分散成单个细胞。

答案：(1)平板划线.稀释涂布平板.接种环.涂布器.灼烧灭菌.(2)上一次划线的末端.相连(或相接、相交、交叉等).(3)火焰附近存在着无菌区域.(4)图乙.

(5)稀释倍数不够，菌液的浓度太高

[课时跟踪检测].

一、选择题

1．下列关于微生物的营养，说法正确的是(..) A．同一种物质不可能既作碳源又作氮源 B．凡是碳源都能提供能量 C．除水以外的无机物仅提供无机盐 D．无机氮源也可能提供能量

解析：选D.对一些微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。CO2是光能自养细菌的碳源，但不能提供能量。CO2和N2是无机物，也是微生物的碳源和氮源。硝化细菌所利用的氮源是无机氮源氨，同时氨也为硝化细菌提供用以化能合成作用的能源。

2．培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是(..)

①化学消毒.②灼烧灭菌.③干热灭菌.④紫外线消毒.⑤高压蒸汽灭菌.⑥巴氏消毒

A．⑤③②①④⑥......B．①②③④⑤⑥

..

..

C．⑥②③④①⑤............D．③④②①⑥⑤

解析：选A.培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底地灭菌的效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；为不破坏牛奶中的营养成分，可采用巴氏消毒。

3．(江苏高考)做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是(..) A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖 B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落 D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上

解析：选D.在高压灭菌的操作过程中，加热结束后应让灭菌锅内温度自然下降，待压力表的压力降到零时，打开放气阀，旋松螺栓，打开盖子。倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全取下放到一边。接种环经火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却后，再用其挑取菌落。在微生物的培养中，一般在皿底上用记号笔做标记。

4．下列有关平板划线法操作的叙述，错误的是(..)

A．第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 B．每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种

C．在每一区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液

D．划线结束后，灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者

解析：选C.在用平板划线法分离大肠杆菌的实验中，接种环取菌种前灼烧的目的是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后残留的菌种；划线结束后仍需灼烧接种环，是为了避免细菌污染环境和感染操作者；从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。

5．为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述错误的是(..) A．对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法 B．临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上

..

..

C．临时保藏菌种容易被污染或产生变异

D．对于需要长期保存的菌种，可以采用低温－4.℃保藏的方法

解析：选D.对于需要长期保存的菌种，可采用甘油管藏法，即在3.mL甘油瓶中加入1.mL甘油后灭菌，将1.mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在－20..℃的冷冻箱中保存。

6．用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时(..)

①可以用相同的培养基.②都需要使用接种针进行接种.③都需要在酒精灯火焰旁进行接种.④都可以用来计数活菌

A．①②...............B．③④ C．①③...............D．②④

解析：选C.平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基；平板划线法采用接种针或接种环进行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作；进行接种操作时，要进行无菌操作，需要在酒精灯火焰旁接种，避免空气中的微生物污染培养基；平板划线法一般用于分离菌体而不能计数活菌。

7．下表是对四种生物的能源、碳源、氮源、新陈代谢类型的描述，正确的是(..)

选项 A B C 项目 能源 碳源 氮源 硝化细菌 乳酸菌 根瘤菌 NH3 CO2 NH3 自养需氧型 乳酸 N2 衣藻 光能 CO2 NO－3 自养需氧型 糖类等 糖类等 N2 异养厌氧型 N2 自养需氧型 D 代谢类型 解析：选B.从能源来看，硝化细菌的能源是氧化氨气为硝酸盐过程释放的能－

量，乳酸菌和根瘤菌需糖类等有机物供能；从氮源看，乳酸菌需要NH＋4、NO3；从

代谢类型看，根瘤菌为异养需氧型；从碳源看，硝化细菌与衣藻需CO2，乳酸菌和根瘤菌需要糖类等有机物。

8．下面是微生物平板划线示意图，划线的顺序为1、2、3、4、5。下列叙述正确的是(..)

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A．在五个区域中划线前后都要对接种环和培养基进行灭菌 B．划线操作时完全打开皿盖，划完立即盖上

C．接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的 D．第1区和第5区的划线最终要连接起来，以便比较前后的菌落数 ..解析：选C.在每次划线前后都要对接种环进行灭菌；进行划线操作时，左手将培养皿的皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖；注意接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的；第1区和第5区的划线不能相连。

9．某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理，下列叙述正确的是(..) A．培养基分装到培养皿后进行灭菌

B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线 C．接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养 D．培养过程中每隔一周观察一次

解析：选B.在配制培养基的过程中要先灭菌后倒平板；转换划线角度后要对接种环进行灼烧灭菌，杀灭接种环上残留的菌种，再进行划线；接种后的培养皿应放置在恒温培养箱中培养；微生物生长、繁殖较快，在培养过程中一般要隔天观察一次。

10．科学家通过实验发现了细菌的快速进化过程。人们发现，用肉汤培养假单胞杆菌，如果肉汤保持不动，不久后，在肉汤的不同部位，如表面、底部或其他部位，细菌的形态发生了如图所示的变化，出现一定数量的变异株。下列有关说法错误的是(..)

A．这个实验说明了细菌在不同的小环境中发生了进化

B．细菌的生命周期短，繁殖速度快，容易受到外界环境影响而发生变化

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C．用静置的肉汤培养FS细菌，其菌落形状将趋于一致

D．用不断摇动的肉汤培养SM细菌，不会出现FS细菌和WS细菌

解析：选C.分析题干信息可知，最初的SM细菌在静置的肉汤表面繁殖，一段时间后，有一部分在肉汤底部繁殖，这部分可能向厌氧方向进化，故细菌在不同的小环境下可发生进化。细菌生命周期短，繁殖速度快，容易受外界环境因素(如温度、氧气)的影响。用静置的肉汤培养FS细菌，该细菌也有可能向不同方向进化，如进化成WS细菌。不断摇动，肉汤中的溶氧会抑制厌氧型的FS细菌；不断摇动，容器与肉汤无固定接触面，WS细菌无法附着生长繁殖。

二、非选择题

11．(1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑________、________和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、________、________等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。

(2)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行________(填“消毒”或“灭菌”)；操作者的双手需要进行清洗和________(填“消毒”或“灭菌”)；空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质

变

性

，

还

能

________________________________________________________________________。

(3)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的__________________________________。

(4)通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行

初

步

的

________________________________________________________________________。

(5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_______________________________。

解析：(1)大肠杆菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、生活周期短等优点，培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。(2)对培养基和培养皿应进行灭菌，操作者的双手需要进行清洗和消

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毒。紫外线能使蛋白质变性，还能损伤DNA的结构。(3)稀释涂布平板法要先将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，操作中应保证样品稀释的比例合适。(4)对获得的纯菌种可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定。(5)检测培养基是否被污染的方法是将未接种的培养基在适宜条件下进行培养，观察是否有菌落形成。

答案：(1)温度.酸碱度.易培养.生活周期短.(2)灭菌.消毒.损伤DNA的结构.(3)比例合适.(4)鉴定(或分类).(5)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生

12．下面为牛肉膏蛋白胨培养基的成分列表，据此回答：

成分 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 含量 0.5.g 1.g H2O 0.5.g 100.mL (1)蛋白胨在培养基中的作用是_________________________________。 (2)要用此材料配制观察细菌菌落状况的培养基，还需添加的成分是____________。

(3)

确

定

表

中

各

成

分

含

量

依

据

的

原

则

是

_________________________________________。

(4)培养基配制好后，分装前应进行的工作是___________________________________。

(5)从配制培养基直到培养完成，所采用的预防杂菌污染的方法有_________________________________________________________________________。

(6)在培养基凝固前要搁置斜面，其目的是____________________________________________________________________。

解析：蛋白胨中含有大量的蛋白质降解而成的多肽类物质等，因而在培养基中提供碳源、氮源和生长因子。细菌菌落是在固体培养基上形成的。确定各营养成分含量要依据所培养的微生物的需要。培养基配制好后，首先要调整pH，然后再分装，整个操作过程都要保证无杂菌污染。

答案：(1)提供碳源、氮源、生长因子.(2)琼脂(凝固剂).(3)所培养微生物对各营养成分的需要量.(4)调整pH.(5)对培养基进行高压蒸汽灭菌、灼烧接种环、酒精棉擦手、在火焰旁接种、在火焰旁迅速用棉塞塞住试管口.(6)扩大接种面积

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13．在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。实验基本步骤如下：

配制培养基―→灭菌、倒平板―→培养―→观察 请回答下列有关问题：

(1)配制培养基时，各成分含量确定的原则是________________________。不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是_______________________________。

(2)倒平板的适宜温度是50.℃左右，原因是_____________________________。待平板冷凝后，要将平板倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止________________________。

(3)纯化菌株时，若使用稀释涂布平板法进行接种，应选择的涂布工具是图中的________；若使用平板划线法进行接种，应选择的接种工具是图中的________。

(4)划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能

的

操

作

失

误

有

________________________________________________________________________。

(5)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及培养物必须经过________处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。

解析：培养基中各成分含量要根据微生物的生长需要来确定。微生物生长需要一定的pH，所以培养基装瓶前需要调节pH。由图可知，A为接种环，B为涂布器，C为胶头滴管，D为接种针，稀释涂布平板法应选择的涂布工具是B，平板划线法应选择的接种工具是A。第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落，造成此现象的原因可能有两个：一是接种环灼烧后未冷却，菌种接触到高温的接种环而死亡；二是划第二划线区域第一条线时未从第一区域末端开始。有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，因此，使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。

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答案：(1)所培养微生物对各营养成分的需要量.调整pH.(2)温度过高会烫手，过低培养基又会凝固.皿盖上的水珠落入培养基，造成污染.(3)B.A.(4)①接种环灼烧后未冷却.②划线未从第一区域末端开始.(5)灭菌

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